Test resazuryny agarowej z węglem drzewnym w celu oceny aktywności badanego związku przeciwko prątkom

Streszczenie

Źródło: Gold, B. et al., Wizualizacja testu resazuryny z agarem z węglem drzewnym do półilościowego, średnioprzepustowego liczenia prątków. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film prezentuje test CARA, test rezazurynowy z węglem drzewnym do oceny aktywności związków przeciwdrobnoustrojowych przeciwko Mycobacterium tuberculosis. CARA pomaga w ocenie skuteczności tych związków poprzez ocenę ich wpływu na wzrost bakterii i rozróżnienie między działaniem bakteriobójczym i bakteriostatycznym.

Protokół

1. Konfiguracja testów replikujących i niereplikujących MIC₉₀

1. Zaszczepić M. tuberculosis, M. bovis BCG lub M. smegmatis przy OD₅₈₀ 0,01-0,1 i rozwinąć do środkowej fazy logarytmicznej (OD₅₈₀ ~ 0,5) w Middlebrook 7H9-ADN (Middlebrook 7H9 zawierający 0,2% glicerolu, 0,2% dekstrozy, 0,5% albuminy i 0,085% NaCl) lub 7H9-OADC (Middlebrook 7H9 zawierający 0,2% glicerolu i 10% suplementu OADC).
2. Hodować M. tuberculosis i M. bovis BCG jako ~20 ml stojących kultur w kolbach do hodowli komórkowych, a M. smegmatis z wytrząsaniem w okrągłodennych polipropyl....

Wyniki

Rysunek 1: Schemat testu bulionowego MIC₉₀ i CARA z przewidywanymi wynikami. Zarówno wyniki MIC₉₀, jak i CARA są prezentowane dla 8 możliwych działań. Kodowanie kolorami dla studzienek mikropłytek MIC₉₀ jest białe (brak wzrostu) i brązowe (wzrost), a dla mikropłytek CARA jest czarne (brak fluorescencji) i różowe (fluorescencja rezorufiny). Dane są hi.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Middlebrook 7H9	Becktona Dickinsona	Numer katalogowy: 271310
Middlebrook 7H11	Becktona Dickinsona	Numer katalogowy: 298810
Middlebrook OADC	Becktona Dickinsona	212351
BSA, szok cieplny	Roche	3118958001
Aktywowanego	Sigma
PBS, Dulbecco's Ca2+ i Mg2+ wolne	Technologie życiowe / Invitrogen	Nr kat. 14190-144
Animacja 80	Sigma	Zobacz materiał P8074
Ryfampicyna	Sigma	Czynnik R3501
6-bromo-1H-indazol-3-amina	Alfa Aesar	Zobacz materiał H34095
Fosforan potasu jednozasadowy	Sigma	Zobacz materiał P0662
Siarczan magnezu, siedmiowodny	Sigma	Zobacz materiał M1880
Cytrynian żelazowo-amonowy	Sigma	F5879
Siarczan, siedmiowodny	Sigma	Z0251
Chlorek amonu	Sigma	A9434
Kwas masłowy, płynny	Sigma	B103500
Rezazuryna w proszku	Sigma	Czynnik R7017
chlorek sodu	J.T. Bakera	Numer katalogowy: 4058-01
Przygotowany roztwór resazuryny	Invitrogen	DAL1100
Spektrofotometr	Urządzenia molekularne	Zobacz materiał M5
96-dołkowe, mikropłytki poddane hodowli tkankowej	Corning	3595
Zbiorniki na odczynniki	Firma VWR	89094-678
Zamykane torby plastikowe	Firma VWR	Nr tel. 395-94602
14 ml polipropylenowe probówki okrągłodenne	Corning	352059
Stożkowa probówka wirówkowa 50 ml	Corning	Numer katalogowy: 352070
75 cm2 Kolba do hodowli komórkowych	Corning	431464U

powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: (wersja angielska) okrążeń