Test skupiający się do ilościowego określania mian wirusa w narządach zakażonej myszy

Streszczenie

Źródło: Brien, J. D. et al., Izolacja i kwantyfikacja wirusa Zika z wielu narządów u myszy. J. Vis. Exp.(2019 rok)

Wideo demonstruje procedurę ilościowego oznaczania wirusa Zika w wielu narządach myszy za pomocą testu tworzącego ognisko. Proces ten polega na zakażeniu monowarstw komórek ssaków homogenatami tkanek zakażonych wirusem, a następnie zastosowaniu metylocelulozy w celu zapobieżenia rozprzestrzenianiu się wirusa. Następnie stosuje się barwienie immunologiczne, aby umożliwić precyzyjną kwantyfikację i pomiar zakaźności specyficznej dla narządów.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Izolacja narządów

UWAGA: Wirus nie jest stabilny w temperaturze pokojowej (RT), więc liczba zwierząt zbieranych jednorazowo musi być starannie zaplanowana, aby zachować miano wirusa.

1. Zakażone myszy przy użyciu wybranej dawki i trasy, w oparciu o wymagany fenotyp. W ramach tego protokołu należy zainfekować 8-10 tygodniowe myszy C57BL/6 z niedoborem receptora interferonu typu I (Ifnar1^....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
1-bromo-3-chloropropan (BCP)	Gen MRC	Zobacz materiał BP151
Strzykawka o pojemności 10 ml	Thermo Fisher Naukowy	BD 309642
Igła 18G	Thermo Fisher Naukowy	22-557-145
Strzykawka 1 ml TB	Thermo Fisher Naukowy	14-823-16H
Strzykawka o pojemności 20 ml	Thermo Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 05-561-66
24-rurowy młynek do koralików	Thermo Fisher Naukowy	15 340 163
Koraliki ze stali nierdzewnej 3,2 mm	Thermo Fisher Naukowy	NC9084634
37C Inkubator do hodowli tkankowych	Nuair (U)	5800
Przeciwciało 4G2	w domu
96-dołkowe płaskie płyty denne	Średni	TP92696
96-dołkowe okrągłe płyty dolne	Średni	TP92697
Probówki Basix 1,5 ml eppendorf	Thermo Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 02-682-002
Skoncentrowany wybielacz bakteriobójczy	Zszywki	30966CT
Analizator CTL S6	Lista CTL (lista CTL	Uniwersalny analizator CTL S6
Zakrzywione nożyczki do cięcia	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy: 14061-11
Dulbecco's Modified Eagle's Medium - wysoka zawartość glukozy Z 4500 mg/L glukozy	MiliporeSigma	Zobacz materiał D5671
Etanol (klasy biologicznej molekularnej)	MiliporeSigma	E7023
Surowica bydlęca płodu	MiliporeSigma	F0926-500ML
Kleszcze	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 11036-20
Lodowaty kwas octowy	MiliporeSigma	Numer katalogowy: 537020
Przeciwciało znakowane kozią przeciwciałem anty-mysie znakowaną HRP	MiliporeSigma	Numer katalogowy: 8924
SZYBY SZPALKOWE 1 M	MiliporeSigma	H3537-100ML
Izopropanol (klasy biologicznej molekularnej)	MiliporeSigma	I9516
Koktajl ketamina/ksylazyna	Medycyna porównawcza
L-glutamina	MiliporeSigma	G7513
Zestaw do oczyszczania RNA Magmax	Thermo Fisher Naukowy	Zobacz materiał AM1830
Metyloceluloza	MiliporeSigma	Zobacz materiał M0512
Mikrowirówka	Ependorf	5424R
Probówki EDTA MiniCollect 0,5 ml	Bio-jeden	Numer katalogowy: 450480
Rurki typu O-ring	Thermo Fisher Naukowy	21-403-195
Jednoetapowa mieszanka RT-PCR q	Thermo Fisher Naukowy	4392938
Paraformaldehyd	Thermo Fisher Naukowy	EMS- 15713-S
sól fizjologiczna buforowana fosforanami	MiliporeSigma	D8537-500ML
Pipety wielokanałowe Proline	Sartorius Sartorius (Wyspa	Nr kat. 72230/72240
Pipety jednokanałowe Proline	Sartorius Sartorius (Wyspa	Numer telefonu 728230
Woda wolna od RNA	Thermo Fisher Naukowy	10-977-023
RNAzol BD	Gen MRC	Zobacz materiał RB192
Kołysząca się platforma	Thermo Fisher Naukowy	11-676-333
Silnik RPMI 1640	rybak	MT10040CV
Saponina	MiliporeSigma	Zobacz materiał S7900
Łyżka/szpatułka	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 10090-17
Nożyczki do cięcia prostego	Narzędzia naukowe	Numer katalogowy 14060-11
Tryton X-100	MiliporeSigma	Zobacz materiał T8787
Prawdziwe niebieskie podłoże	Firma VWR	Numer katalogowy: 95059-168
trypsyna	MiliporeSigma	T3924-100ML

szt. powiedział: powiedział: powiedział: TGL powiedział: Sar Sar TGL powiedział: