Metoda mikromiareczkowania na płytkach do oceny minimalnego stężenia hamującego antybiotyku

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Ketelboeter, L. M., et al. Metody hamowania produkcji pyomelaniny bakteryjnej i określania odpowiedniego wzrostu wrażliwości na stres oksydacyjny. J. Vis. Exp. (2015).

Ten film demonstruje metodę opartą na płytkach mikromiareczkowych do określania minimalnego stężenia hamującego (MIC) testowych antybiotyków przeciwko bakteriom. Po dodaniu zawiesiny patogenu bakteryjnego Pseudomonas aeruginosa do płytki mikromiareczkowej zawierającej seryjne rozcieńczenia badanego antybiotyku i inhibitora wytwarzania pyomelaniny przez bakterie, mierzy się gęstość optyczną studzienek w celu obliczenia minimalnego stężenia hamującego antybiotyku oraz wpływu inhibitora produkcji pyomelaniny na wrażliwość bakterii na antybiotyki.

Protokół

1. Test minimalnego stężenia hamującego antybiotyku (MIC) na płytkach 96-dołkowych

Założyć nocne hodowle szczepów, które mają być testowane w LB (Luria-Bertani) z i bez NTBC (2-[2-nitro-4-(trifluorometylo)benzoilo]-1,3-cykloheksanodion).
nuta: Protokół ten jest opisany przy użyciu reprezentatywnego poziomu 300 μM NTBC.
1. Dodać 300 μM NTBC do 2 ml LB. Dodać równoważną objętość nośnika (dimetylosulfotlenku, DMSO) do 2 ml LB dla stanu braku NTBC.
2. Za pomocą sterylnych wykałaczek zaszczep probówki jedną izolowaną kolonią bakterii. Dla każdego szczepu będzie jedna kultura z NTBC i jedna kultura bez NT....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1: Schemat zestawu 96-dołkowych płytek do oznaczania metodą MIC antybiotyku. (A) 100 μl 2x antybiotyków o najwyższym stężeniu początkowym znajduje się w rzędzie A. Rzędy od B do H wypełnia się 50 μl LB + NTBC lub LB + DMSO bez antybiotyków. (B) Dwukrotne seryjne rozcieńczenia przeprowadza się w rzędach od A do G, w wyniku czego w każdym dołk.......