Technika oczyszczania przeciwciał monoklonalnych wytwarzanych przez komórki jajnika chomika chińskiego

Streszczenie

Źródło: Velugula-Yellela, S. R., et al. Oczyszczanie i analiza przeciwciała monoklonalnego z komórek jajnika chomika chińskiego przy użyciu zautomatyzowanego systemu mikrobioreaktora. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje test do oczyszczania przeciwciał monoklonalnych z płynu do hodowli komórkowych pobranego z komórek jajnika chomika chińskiego. Wykorzystuje porowatą żywicę szklaną z unieruchomionym białkiem A, które wiąże się z regionem Fc przeciwciał w próbce, skutecznie oddzielając je od zanieczyszczeń. Zastosowanie buforu elucyjnego o niskim pH osłabia interakcję, ułatwiając pobieranie oczyszczonych przeciwciał.

Protokół

1. Oczyszczanie przeciwciał

UWAGA: Bufor równoważący dla przeciwciała wewnętrznego wynosi 25 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 7,5. Zastosowanym buforem elucyjnym jest 0,1 M kwas octowy. i żywica (białko A) są zależne od oczyszczonego specyficznego przeciwciała. Objętość kolumny jest równa wysokości łoża żywicy. Ilość zużytej fazy ruchomej jest określana w odniesieniu do objętości kolumny.

1. Inicjalizacja systemu oczyszczania
   1. Otwórz oprogramowanie dołączone do systemu oczyszczania. Korzystając z instrukcji ręcznych, zrównoważyć kolumnę z buforem równoważącym przy natężeniu przepływu 2 ml/min pr....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Linia komórkowa CHO DG44	Invitrogen	A1100001
Akta Avant 25	General Electric Nauki przyrodnicze	28930842
Żywica do ultrachromatografii Pro Sep vA	Millipore Sigma	115115830	Faza stacjonarna oczyszczania
Kolumna Omnifit 10 cm	Płynna inteligencja Diba	006EZ-06-10-AA	Obudowa do fazy stacjonarnej
Baza Tris	Fisher Naukowy	Zobacz materiał BP154-1
Superloop 10 ml	GE Opieka zdrowotna	18-1113-81
Wielokątny detektor rozpraszania światła μDawn	Wyatt	WUDAWN-01
0,22 μm Millex GV Jednostka filtrująca Membrana PVDF	Merck Millipore	SLGV033RB
10X sól fizjologiczna buforowana fosforanami	Corning	46-013-CM
Strzykawka 12 ml	Wirus Covidien	8881512878
Probówka Falcon 50 ml	Corning Inc.	Numer katalogowy: 352070
Płytka 96-dołkowa	Bio-Rad	127737
kwas octowy	Sigma-Aldrich	695072
Filtry odśrodkowe Amicon Ultra-4 100 kDa	Merck Millipore	UFC810096
Wzorzec aminokwasowy, 1 nmol/μL	Technologie Agilent	Nr kat. 5061-3330
Suplement aminokwasowy	Technologie Agilent	5062-2478
Roztwór mrówczanu amonu - analiza glikanów	Korporacja Waters	186007081
Niebieskie nakrętki z przegrodą	Technologie Agilent	5182-0717
Chromatografia wody (klasa MS)	Fisher Chemiczny	Zobacz materiał W6-4
kwas solny	Fisher Naukowy	A144-500
Nienaruszony wzorzec kontroli masy mAb	Korporacja Waters	186006552
Kolumna aminokwasowa Intrada 150 x 2 mm	Imtakt	WAA25
NanoDrop One Mikroobjętościowy spektrofotometr UV-Vis	Thermo Fisher Naukowy	840274100

powiedział: