Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Obrazowanie PET in vivo za pomocą 89Zr-DFO-J591
UWAGA: Ten etap protokołu obejmuje obsługę i manipulację radioaktywnością. Przed wykonaniem tych czynności badacze powinni skonsultować się z Departamentem Bezpieczeństwa Radiologicznego swojej instytucji macierzystej. Należy podjąć wszelkie możliwe kroki w celu zminimalizowania narażenia na promieniowanie jonizujące.
- U samców nagich myszy atymicznych należy wszczepić podskórnie komórki rakowe raka prostaty 5 x 106 węzłów chłonnych (LNCaP) i pozwolić im urosnąć do ksenoprzeszczepu 100-150 mm3 (3-4 tygodnie po zaszczepieniu).
- Rozcieńczyć 89Zr-DFO-J591 radioimmunokoniugatu do stężenia 1,0 mCi/ml w 0,9% sterylnym roztworze soli fizjologicznej.
- Wstrzyknąć 200 μl roztworu 89Zr-DFO-J591 (DFO = desferrioksamina, J591 = przeciwciało skierowane przeciwko antygenowi błonowemu specyficznemu dla prostaty [PSMA]) (200 μCi; 7,4 MBq) do bocznej żyły ogonowej myszy z ksenograftem.
- W pożądanym punkcie czasowym obrazowania (np. 12, 24, 48, 72, 96 lub 120 godzin po wstrzyknięciu) znieczulij mysz 2% mieszaniną izofluranu i tlenu gazowego.
- Umieść mysz na łóżku skanera PET dla małych zwierząt i utrzymuj znieczulenie podczas skanowania za pomocą 1% mieszaniny izofluranu i tlenu gazowego. Przed umieszczeniem zwierzęcia na łóżku skanera należy sprawdzić znieczulenie metodą szczypania palców u nóg i nałożyć maść okulistyczną na oczy myszy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.
- Pozyskaj dane PET dla myszy za pomocą skanowania statycznego z co najmniej 40 milionami zbiegów zdarzeń przy użyciu okna energetycznego 350-700 keV i okna czasowego koincydencji wynoszącego 6 nsec.
- Po zakończeniu pozyskiwania obrazu nie pozostawiaj myszy bez opieki i nie umieszczaj jej w klatce z innymi myszami, dopóki nie odzyska przytomności.
