Method Article

Oparta na immunofluorescencji metoda wizualizacji komórek kępek w kriosekcjach jelita drogowego

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Mizutani, Y. et al., Zastosowanie przeciwciał antyfosfogirdynowych do wizualizacji komórek kępek jelitowych w swobodnie pływających kriosekcjach mysiego jejunum.J. Vis. Exp. (2018)

Ten film ilustruje opartą na immunofluorescencji metodę wizualizacji komórek kępek jelitowych w swobodnie pływających kriosekcjach jelita czczego myszy. W obrębie kosmków jelitowych kolokalizacja zielonej fluorescencji na końcu światła z wydłużoną masą czerwonych korzonków wskazuje na obecność komórek kępkowych.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowania

  1. Przygotować 10 l soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS): 32,27 g wodorofosforanu sodu (Na2HPO4·12H2O), 4,5 g diwodorofosforanu sodu (NaH2PO4·2H2O), 80,0 g chlorku sodu (NaCl) dodanego do wody ultraczystej do końcowej objętości 10 l. Roztwór przechowywać w temperaturze pokojowej (RT).
  2. Przygotować 200 ml PBS-T: 200 ml PBS z etapu 1.1 ze 100 μl....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rycina 1: Żelatynowe wypełnienie skrawków jelita czczego w celu morfologicznego zachowania kriosekcji
(A) Fotografie procedur śródświetlnego wypełniania mysiego jelita czczego żelatyną. (A1) Ścięta końcówka prostej igły o rozmiarze 18 została usunięta aby uniknąć przebicia ściany jelita. (A2) Buforowany obojętny roztwór formaliny (10%) wstrzykn.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Slc:DDY 6-tygodniowe samice myszyChubu Kagaku ShizaiNie dotyczy
12-wodny wodorofosforan disodowy (Na2HPO412H2O)WakoNumer katalogowy: 196-02835
Dihydroenfosforan sodu dwuwodny (NaH2PO42H2OWakoNumer katalogowy: 199-02825
Chlorek sodu (NaCl)Wako199-10665
Triton X-100, eter oktylofenylowy polioksyetylenowy(10)Katayama ChemicznyNie dotyczy
sacharozaWakoNumer katalogowy: 190-00013
10% buforowany neutralny roztwór formalinyMuto ChemicznyRok 20215Krok 1.3.
Koniugat falloidyny-barwnika fluorescencyjnego, falloidyna Alexa Fluor 594ThermoFisher NaukowyA12381
metanolNacalai Tesque21915-35
DAPI (4',6-diamidyno-2-fenyloindol, dichlorowodorek)ThermoFisher NaukowyZobacz materiał D1306
N.N-dimetyloformamid (DMF)Nacalai TesqueNumer katalogowy 13015-75
Albumina surowicy bydlęcejSigmaA9647-10G
Prosta igła ze stali nierdzewnej o rozmiarze 18 mmTerumo (Ziemia)NN-1838R
U.S.P. 6-0, szew nylonowy 60 cm, CrownjunKono Seisakusho powiedział:Nie dotyczy
Igła skrzydełkowa o rozmiarze 22Terumo (Ziemia)Zobacz materiał SV-22DLK
Strzykawka 20 ml TERUMOTerumo (Ziemia)Zobacz materiał SS-20ES
Probówka wirówkowa 50 mlTPP (TPP)Numer katalogowy: 91050
15 ml probówek wirówkowych IwakiIwaki powiedział:2325-015
Mikroprobówka 1,5 mlgwiazdaPrzekaźnik RSV-MTT1.5
Żelatyna w proszku, Gelare-blancLaboratorium biologiczne NittaNumer katalogowy: 2809
Związek do zatapiania zamrożonej próbki tkanki, związek O.C.T. 118 ml 12 sztukSakura FineTechNumer katalogowy: 4583
Cryomold, CRYO DISH nr 3, 125 sztuk, wymiary dołka 20 x 25 x 5 (mm)Prace Shoei1101-3
IzopentanNacalai Tesque26404-75
Naczynie do hodowli komórkowych sokoła 35 x 10mm Easy-GripCorning353001
Koncentrat roztworu do pobierania antygenu, roztwór do pobierania docelowego pH 9 10xDako DakoZobacz materiał S2367Koncentrat roztworu do pobierania antygenu w kroku 4.2.2.
Blok białkowyDako DakoZobacz materiał X0909Roztwór blokujący, o którym mowa w 4.2.5.
Przeciwciała przeciwko fosfo-Y1798 girdynie (pY1798)Laboratoria Immunobiologiczne (IBL) = Przedsiębiorstwo XNumer katalogowy: 28143Przeciwciała przeciwko fosfo-Y1798 girdynie w kroku 4.2.6.
Kozie przeciwciało anty-królicze IgG (H + L) o wysokiej adsorpcji krzyżowej przeciwciało drugorzędowe, Alexa Fluor 488ThermoFisher NaukowyA11034
Nośniki montażowe Aquous, Prolong Gold Antifade MountantThermoFisher NaukowyZobacz materiał P36930
Szkiełka nakrywkowe, Matsunami Micro Cover Glass 22 x 22 mm 100 szt. Grubość nr 1Szkło MatsunamiC022221
Entellan Nowe, ksylenowe media montażowe do mikroskopiiMerck Millipore107961
Szkło przesuwne z powłoką MAS białeSzkło MatsunamiMI-MAS-01
Mapa drewniana typu KOPrace Shoei99-40007
Olejek immersyjny 518 F bez fluorescencji 20 mlZeissNumer katalogowy: 444960
Pipety, Pipetman P (P2, P20, P200, P1000)GilsonF144801, F123600, F123601, F123602
System produkcji wody ultraczystejFirma AdvantecGS-590
Rękawica plastikowa, rękawica nitrylowa StargwiazdaPrzekaźnik RSU-NGVM
KriostatMikrosystemy LeicaZobacz materiał CM1950
Zamrażarka, SANYO Ultra LowSanyo powiedział:Płyta MDF-382
Lodówka gablotaZamrażarka NihonNC-ME50EC
Łaźnia wodna, Thermominder SDminiN (do rozpuszczania żelatyny w temperaturze 50 C)Taitec powiedział:Numer katalogowy: 0068750-000
Inkubator do hybrydyzacji (do pobierania antygenu w temperaturze 50 °C)Taitec powiedział:Zobacz materiał HB-100
Komora inkubacyjna do barwienia immunologicznegoCosmo Bio10DO
Wytrząsarka odwrotna do immunohistochemii (do temperatury pokojowej)Taitec powiedział:NR-1
Wytrząsarka odwrotna do immunohistochemii (dla 4 C)Tokio Rika KikaiZłącze MMS-3010
Mikroskop stereoskopowy (do pracy z tkankami)OlympusSZ61
Mikroskop stereoskopowy (dla rysunku 1B)Mikrosystemy LeicaZobacz materiał M165FC
Mikroskop fluorescencyjny (dla rysunku 3)NikonE800
Konfokalny laserowo-skaningowy mikroskopZeissZobacz materiał LSM700
Rozdział powiedział: powiedział: powiedział: powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Tuft CellsImmunofluorescence MethodJejunum CryosectionsConfocal MicroscopyAntigen RetrievalPhalloidin StainingDNA Binding DyePrimary AntibodiesSecondary AntibodiesMounting Media

Related Articles