Method Article

Technologia mikromacierzy peptydowych do profilowania swoistości przeciwciał

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Cornett, E. M., et al. Analiza swoistości przeciwciał histonowych z mikromacierzami peptydowymi. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film demonstruje technikę, która wykorzystuje technologię mikromacierzy peptydowych do profilowania specyficzności przeciwciał rozpoznających modyfikacje potranslacyjne (PTM) na peptydach histonowych. Szkiełko mikromacierzy zawierające unieruchomione peptydy histonowe sprzężone z fluoroforem ze znanymi kombinacjami PTM poddaje się działaniu docelowych przeciwciał specyficznych dla PTM. Proces ten pomaga zidentyfikować swoistość przeciwciała dla celu i jego potencjalną reaktywność krzyżową z niedocelowymi PTM.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Projektowanie slajdu tablicy i układu płyty źródłowej

  1. Pod nagłówkiem "Zaplanuj układ slajdów" w interfejsie ArrayNinja kliknij link odpowiadający używanej drukarce mikromacierzowej.
    nuta: ArrayNinja został zaprogramowany tak, aby naśladować ruch robota dwóch powszechnie używanych drukarek mikromatrycowych (patrz Tabela 1). Kompatybilność z innymi macierzami można skonfigurować na życzenie.
  2. Kliknij wewnątrz okna dialogowego "Płyta obciążeniowa", wpisz "pusty" i kliknij "enter". Zobacz rysunek 1, aby zobaczyć zrzut ekranu modułu projektowego ArrayNinja.
  3. Dostosuj ś....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Moduł projektowy ArrayNinja. Zrzut ekranu modułu projektowego ArrayNinja jest pokazany w przerywanej linii. Panel sterowania (u góry) pokazuje wszystkie parametry, które można zmienić w drukarce mikromacierzy. Po dostosowaniu tych parametrów kreskówkowy obraz układu slajdów (w lewym dolnym rogu) jest aktualizowany w czasie rzeczywistym. Po ustawieniu układu użytkownik może najechać kursor.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Bufor drukowaniaArrayIt (Tablica)Ppb
BsaWszechczysty2390
Szkiełka mikroskopowe pokryte streptawidynąGreiner Bio-oneNumer katalogowy: 439003-25
Płytka dołkowa z polipropylenu 384Greiner Bio-one784201
Biotyna-fluoresceinaSigmaNumer katalogowy: 53608
Skontaktuj się z drukarką MicroarrayAushon powiedział:2470Drukarka mikromacierzowa Aushon 2470
Skontaktuj się z drukarką MicroarrayMaszyny genoweSieć OmniGrid 100Drukarka mikromacierzy OmniGrid
PbsInvitrogenNumer katalogowy: 14190
Bufor blokującyArrayIt (Tablica)Papiery wartościowe SBB
Wosk hydrofobowy długopisLaboratoria wektoroweH-4000ImmEdge Długopis PAP z barierą hydrofobową
Uszczelka silikonowaLaboratoria biologiczne Grace622511
Naczynie hybrydyzacyjneThermo Scientific267061lub podobny statek
Przeciwciało drugorzędowe sprzężone z barwnikiem fluorescencyjnymTechnologie życioweA-21244Alexa Fluor 647 (anty-królik)
Przeciwciało drugorzędowe sprzężone z barwnikiem fluorescencyjnymTechnologie życioweA-21235Alexa Fluor 647 (anty-mysz)
Woskowy ImprinterArrayIt (Tablica)MSI48
Tween-20 (Kanał Telewizyjny)WszechczystyNumer katalogowy 9490
Skaner mikromacierzySieć InnopsysSkaner InnoScan 1100ALlub równoważny skaner mikromacierzy
EipTitan Mikromacierz peptydowa histonówEpicyfer112001
Mikromacierz peptydowa AbSurance Pro HistoneMiliporyNumer katalogowy: 16668
Modified Tablica peptydów histonowychAktywny motywNumer katalogowy 13001
Mikromacierze peptydowe z kodem histonowymFormat JPTHis_MA_01
woskDąb KrólewskiWosk GulfWaxdo wosku do odcisku
Nawilżana komora hybrydyzacyjna z mikromatrycąFirma VWR97000-284
Wysokowydajna komora mycia szkiełek mikroskopowychArrayIt (Tablica)HTW
Wirówka do szkiełek mikroskopowychFirma VWRZobacz materiał 93000-204
Przeciwciało 1Księga AbcamNumer katalogowy: 8898
Przeciwciało 2MiliporyNumer katalogowy: 07-473
Biotynylowany peptyd histonowyEpiCypher (EpiCypher)12-2001Przykładowy peptyd. Podobne peptydy z różnymi modyfikacjami są dostępne w kilku komercyjnych źródłach.
Magia obrazuhttps://www.imagemagick.org/script/index.php
Tablica Ninjahttps://rothbartlab.vai.org/tools/
szt. szt. powiedział: TGL

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

Related Articles