$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.
1. Podstawowe informacje o grupie badanej
UWAGA: Repozytorium Informacji o Alergiach Państwowego Kluczowego Laboratorium Chorób Układu Oddechowego (AIR-SKLRD) to duży bank surowicy założony w Instytucie Szpitala Oddechowego w Kantonie (GIRH). Zainicjowany w ostatniej dekadzie projekt AIR-SKLRD rozpoczął już zbieranie i przechowywanie próbek surowicy od pacjentów z chorobami alergicznymi oraz ich informacji klinicznych (Tabela 1). Obecne badanie przeprowadzono z użyciem surowic z AIR-SKLRD.
- Przeszukaj bazę danych AIR-SKLRD pod kątem surowic pobranych od stycznia 2015 r. do czerwca 2018 r. i wybierz pacjentów z chorobą alergiczną, u których stwierdzono wrażliwość na alergeny powszechne w regionie.
- Upewnij się, że wszyscy wybrani pacjenci mają choroby związane z alergią, takie jak alergiczny nieżyt nosa i/lub astma, alergiczne zapalenie skóry i/lub pokrzywka, oraz że surowica tych pacjentów zawiera wielokrotne uczulenie na immunoglobulinę E swoistą dla alergenu w surowicy (sIgE) na powszechne alergeny w tym regionie, wykryte przez System 1.
- Wykluczenie pacjentów z niekompletną dokumentacją medyczną, tych, którzy zostali utraceni w związku z obserwacją, tych, którzy odmawiają wyrażenia świadomej zgody na wykorzystanie ich próbek surowicy do celów naukowych, pacjentów ze zidentyfikowanym niedoborem odporności, osób obecnie stosujących immunoterapię lub leki immunomodulujące lub tych, u których stwierdzono infekcje pasożytnicze.
- Upewnij się, że przed pobraniem surowicy nie podano żadnego leczenia ani recepty na lek, aby zminimalizować ingerencję w wyniki badań laboratoryjnych. Wszystkie próbki surowicy, które nie spełniały kryteriów, zostały odrzucone.
2. Przebieg badania i interesujące pomiary
UWAGA: System mikroprzepływowy potrzebuje 100 μL surowicy do określenia 19 alergenów. Krew żylną (5 ml) pobrano od każdego pacjenta za pomocą próżniowego naczynia krwionośnego zawierającego żel separacyjny. Po odwirowaniu przez 10 minut w stężeniu 1 000 x g pobrano górną warstwę do testów. Niewykorzystaną surowicę przechowywano w temperaturze -80 °C. Przed badaniem surowicę przechowywano w temperaturze pokojowej przez 30 minut i wstrząsano mieszaczem wirowym. Uniknięto powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania.
- Przede wszystkim należy przebadać próbki surowicy pod kątem sIgE do całych alergenów Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), sierści kotów (e1), sierści psów (e5), trawy bermudzkiej (g2), tymotki łąkowej (g6), karaluchów (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans(M5), ambrozja (W1), białko jaja (F1), mleko (F2), pszenica (F4), orzeszki ziemne (F13), soja (F14), migdały (F20), kraby (F23) i krewetki (F24). Postępuj zgodnie z instrukcjami podanymi w sekcji 3.
UWAGA: Oznaczenie sIgE wykonano za pomocą zestawu do oznaczania IgE swoistego dla alergenu (patrz Tabela materiałów) i zmierzono za pomocą analizatora chemiluminescencji.
- Losowo wybrać trzy próbki spośród próbek zawierających wystarczającą ilość surowicy (co najmniej 900 μl) do badania odtwarzalności. Utrzymując wszystkie warunki bez zmian, mierz trzy surowice na obecność alergenów sIgE codziennie przez 9 kolejnych dni (tj. 100 x 9 = 900 μl surowicy).
3. Procedura testu półautomatycznego systemu mikroprzepływowego
UWAGA: System 2 integruje automatyczną technologię mikroprzepływową, mikromacierz białek, analizę zimnego światła, równoległą analizę IgE i technologię przetwarzania obrazu. Protokół testowy jest podzielony na cztery części: przygotowanie sprzętu, ładowanie próbki, inkubacja i pomiar.
- Przygotowanie sprzętu
- Włącz komputer i analizator power.
nuta: Włącznik zasilania znajduje się po lewej stronie podstawy.
- Uruchom program LabIT na komputerze. Jeśli pojawi się okno ostrzegawcze Dark Frame, kliknij OK, aby uruchomić test LEAK. Następnie kliknij środkowe logo, aby przejść do interfejsu operacyjnego.
nuta: System przypomni użytkownikowi o uruchomieniu testu SZCZELNOŚCI, jeśli jest bezczynny przez ponad 24 godziny.
- Sprawdź temperaturę reakcji i temperaturę CCD (urządzenie sprzężone z ładunkiem) w prawym dolnym rogu ekranu. Temperatura reakcji powinna wzrosnąć do 37 °C ± 1 °C w ciągu około 10 minut, a temperatura CCD powinna spaść do -15 °C ± 1 °C.
- Uruchom test SZCZELNOŚCI, gdy temperatura CCD spadnie do -15 °C ± 1 °C. Przed uruchomieniem testu SZCZELNOŚCI upewnij się, że w przyrządzie nie pozostały żadne inne przedmioty i zamknij drzwi. Kliknij Narzędzia | Test systemu | Test SZCZELNOŚCI. Nie otwieraj drzwi podczas testowania. Po zakończeniu testu pojawi się okno raportu.
- Ładowanie próbki
- Dodać 620 μl buforu do przemywania płuczkę, 120 μl buforu blokującego, 60 μl koniugatów A i B, 60 μl substratu A i B oraz 100 μl próbek surowicy do odpowiedniego zbiornika odczynnika we wkładzie mikroprzepływowym.
- Inkubacja
- Kliknij Identyfikator wkładu, użyj skanera kodów kreskowych, aby zeskanować numer seryjny wkładu, wprowadź identyfikator próbki, włóż kasetę do analizatora, zamknij drzwiczki i kliknij Analizator i Uruchom, aby rozpocząć analizę.
- pomiar
- Eksport wyników do oprogramowania statystycznego (np. Excel) po wykonaniu pomiaru.
UWAGA: Po 30 minutach inkubacji analizator automatycznie wykonuje pomiar i podaje wynik.
Tabela 1: Charakterystyka demograficzna pacjentów. W sumie znaleziono 293 osoby, które spełniły kryteria włączenia, z medianą wieku 23 (przedział międzykwartylowy od 8 do 36 lat). Wśród nich 170 (58,02%) stanowili mężczyźni, a 123 (41,98%) kobiety. Ponadto 92 (31,40%) z nich miało alergiczny nieżyt nosa, 117 (39,93%) miało astmę alergiczną, 36 (12,29%) miało współistniejące nieżyt nosa i astmę, a 48 (16,38%) miało inne choroby alergiczne, takie jak alergia pokarmowa lub alergia skórna.
| charakterystyczny | Nie.( %) |
| Płeć, n(%) | |
| kobieta | 123 (41,98%) |
| mężczyzna | 170 (58,02 proc.) |
| Wiek, rok, n(%) | |
| Mediana (25%,75%) | 23(8,36) |
| ≤10 | 97(33,11%) |
| 11-20 | 37 (12,63 proc.) |
| 21-40 | 101 (34,47%) |
| >41 | 58 (19,80 proc.) |
| Diagnoza, n(%) | |
| Alergiczny nieżyt nosa | 92 (31,40 proc.) |
| Astma alergiczna | 117 (39,93%) |
| Alergiczny nieżyt nosa z astmą | 36(12,29%) |
| inni | 48 (16,38 proc.) |