Method Article

Multipleksowa metoda barwienia immunologicznego przy użyciu pierwszorzędowych przeciwciał od tego samego gatunku gospodarza

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Lyu, Q., et al. Podgrzewanie w kuchence mikrofalowej i fluorofor-tyramamid do multipleksowego barwienia immunologicznego na nadnerczach myszy − przy użyciu niesprzężonych przeciwciał pierwotnych od tego samego gatunku gospodarza. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje test do przeprowadzania multipleksowego barwienia immunologicznego przy użyciu pierwotnych przeciwciał od tego samego gatunku gospodarza. W tej metodzie wycinek tkanki nadnerczy poddawany jest dwuetapowemu procesowi barwienia immunologicznego. Początkowo wycinek jest barwiony przeciwciałami specyficznymi dla markerów w korze, a następnie usuwa się związane przeciwciało i ponownie barwi przeciwciałami specyficznymi dla markerów w rdzeniu.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Barwienie pierwszym przeciwciałem

  1. Odwoskować i ponownie uwodnić szkiełka zatopione w parafinie (FFPE) utrwalone w formalinie, przeznaczając 5 minut na każdy z następujących etapów: ksylen lub równoważne odczynniki 3x, 100% etanol 2x, 95% etanol 1x, 70% etanol 1x, 50% etanol 1x i woda destylowana 2x,
    nuta: Szkiełka powinny pozostać wilgotne, począwszy od tego etapu nawadniania, aż do montażu w ostatnim etapie.
  2. W celu opcjonalnego pobrania antygenu umieścić szkiełka w 27....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Medium montażowe zapobiegające blaknięciuLaboratoria wektoroweH-1000
Biotynylowany osł anty-myszJacksonImmunoTel. 715-066-151Rozcieńczenie 1:500
Biotynylowany osioł anty-królikJacksonImmunoNr kat. 711-066-152Rozcieńczenie 1:500
DAPI (interfejs DAPI)Legenda biologiczna4228012 μg/ml w wodzie destylowanej
Mikroskop fluorescencyjnyechoObrót 4
Streptawidyna sprzężona z peroksydazą chrzanowąJacksonImmunoNumer katalogowy: 016-030-084Rozcieńczenie 1:1000
Kuchenka mikrofalowa, 700WGeneral ElectricJEM3072DH1BB
Mysz anty-CYP2F2Santa CruzSC-374540Rozcieńczenie 1:250
Mysz anty-THSanta CruzSC-25269Rozcieńczenie 1:1000
Normalna surowica osłaJacksonImmunoNumer katalogowy: 017-000-1212% surowicy w PBST
Królik anty-20αHSDKerafast,Zobacz materiał EB4002Rozcieńczenie 1:500
Królik anty-3βHSDTransGenic,KO607Rozcieńczenie 1:250
Królik anty-THNovusNB300-109Rozcieńczenie 1:1000
Królicza anty-β-kateninaAbcam,ab32572Rozcieńczenie 1:500
Streptawidyna Peroksydaza chrzanowa (SA-HRP)JacksonImmunoNumer katalogowy: 016-303-084Rozcieńczenie 1:1000
TSA Cy3 TyramidPerkinElmer powiedział:SAT704B001EARozcieńczenie 1:100
TSA Tyramid fluoresceinyPerkinElmer powiedział:SAT701001EARozcieńczenie 1:100
powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

Related Articles