Technika generowania ludzkiego, humanizowanego modelu myszy ksenoprzeszczepu wszczepionego w PBMC

Streszczenie

Źródło: Li, Z., et al. Humanized Xenograft Model Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje test do generowania humanizowanego modelu myszy ksenoprzeszczepu. Myszom z obniżoną odpornością wstrzykuje się cyklofosfamid, aby spowodować wyczerpanie komórek odpornościowych. Komórki nowotworowe pochodzące od pacjenta zmieszane z ludzkimi komórkami jednojądrzastymi krwi obwodowej (PBMC) w hydrożelu są wstrzykiwane podskórnie myszy, tworząc guz z naciekającymi limfocytami T.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB. Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ustanowienie modelu opartego na ludzkim PBMC

1. Mieloablacja myszy NOD/SCID za pomocą cyklofosfamidu: określenie optymalnych dawek
   1. Kup samice myszy z nieotyłym cukrzycą/ciężkim złożonym niedoborem odporności (NOD/SCID) (6-8 tygodni).
      nuta: Wszystkie myszy biorące udział w tym....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Separacja PBMC / hodowla komórkowa
Histopaque-1077 (Histopaque-1077	Sigma	Numer katalogowy: 10771	Izolacja komórek
DMEM (DMEM)	Corning	10-013-CVR	Hodowla komórkowa
DPBS (Polskie Biuro Obsługi	Corning	21-031-CVR	Hodowla komórkowa
FBS (Sieć Usługowa	Corning	35-076-CV	Hodowla komórkowa
Penicylina-Streptomycyna, płyn	Gibco (firma Gibco)	Rozdział 15140-163	Hodowla komórkowa
Trypsyna-EDTA (0,25%), czerwień fenolowa	Gibco (firma Gibco)	25200-114	Hodowla komórkowa
Matrigel	Corning	356237	Inokulacja CDX
Analiza FACS
Deoksyrybonukleaza I z trzustki bydła	Sigma	Pył DN25	Przygotowanie próbki
Kolagenaza typu I	Sigma	Zobacz materiał C0130	Przygotowanie próbki
Przeciwciało anty-mysie/ludzkie CD11b (M1/70)	Legenda biologiczna	101206	Facs
Przeciwciało anty-mysie Ly-6C (HK1.4)	Legenda biologiczna	128008	Facs
Przeciwciało anty-mysie Ly-6G (1A8)	Legenda biologiczna	127614	Facs
Przeciwciało anty-ludzkie CD8 (OKT8)	Sungene Biotech	H10082-11H	Facs
Przeciwciało anty-ludzkie CD279 (MIH4)	eBionauka	Numer katalogowy: 12-9969-42	Facs
Przeciwciało anty-ludzkie CD3 (HIT3a)	4A Biotechnologia	--	Facs
Cytometr przepływowy Guava easyCyte 8HT	Milipory	Numer katalogowy: 0500-4008	Facs
Implantacja guza/PDX / dawkowanie / pomiar
cyklofosfamid	J&K	Kot#419656, CAS#6055-19-2	Skuteczność in vivo
Disulfiram (disulfiram)	J&K	Kot#591123, CAS#97-77-8	Skuteczność in vivo
strzykawka	Bd	300841	Inokulacja CDX
Igły podskórne (14G)	Shanghai SA Mediciall & Plastic Instruments Co., Ltd.	0,7 * 32 TW SB	Inokulacja PDX
Suwmiarka z noniuszem (MarCal)	Mahr	16ER	Pomiar guza
Indywidualne klatki wentylowane IVC	Lingyunboji Sp. z o.o.	Zobacz materiał IVC-128	Obiekt dla zwierząt

) Klienta powiedział: