Method Article

Hamowanie replikacji wirusa zapalenia wątroby typu B za pomocą limfocytów T specyficznych dla antygenu wirusowego

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Xiong, X., et al. Wirusowe limfocyty T specyficzne dla Ag pochodzące z komórek macierzystych hamują replikację HBV u myszy. J. Vis. Exp. (2019).

Film demonstruje test z wykorzystaniem ludzkich komórek macierzystych CD8+ pochodzących z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) w celu zahamowania replikacji wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) u myszy. Te limfocyty T, zmodyfikowane za pomocą receptorów specyficznych dla HBV, są przenoszone do myszy transgenicznych. Kompetentne replikacyjnie plazmidy genomu HBV są następnie wstrzykiwane bezpośrednio do wątroby, umożliwiając wychwyt DNA wirusa. Gdy antygeny wirusowe ulegną ekspresji i prezentacji przez hybrydowe cząsteczki MHC-I, zmodyfikowane limfocyty T rozpoznają te kompleksy i wiążą się z nimi. Powoduje to uwalnianie cząsteczek cytotoksycznych, co prowadzi do zniszczenia komórek wątroby zakażonych HBV i zahamowania replikacji wirusa.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez local
instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjna komisja rewizyjna JoVE. Wszystkie procedury związane z pobraniem próbek zostały wykonane zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Wytwarzanie wirusowych limfocytów T CD8+ specyficznych dla Ag z limfocytów T iPSC (limfocyty T iPSC-CD8+)

  1. Tworzenie konstruktów retrowirusowych
    nuta: Geny α i β receptora limfocytów T (TCR) są połączone sekwencją samorozszczepiającą 2A. Wektor retrowirusowy MSCV-IRES-DsRed (MiDR) to DsRe....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rycina 1: Wytwarzanie limfocytów T iPSC-CD8 + specyficznych dla wirusa HBV Ag.

Mysie iPSC są transdukowane za pomocą następujących konstruktów retrowirusowych: HBs183-91 TCR (MiDR-s183 TCR) lub OVA257-264 TCR (MiDR-OVA TCR), a transdukowane iPSC są współhodowane z komórkami zrębu OP9-DL1/DL4 w celu różnicowania linii T. (A) Schematyczne przedstawienie retrowiru.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Myszy HHDInstitut Pasteur, Paryż, FrancjaNokaut H-2 klasy I, myszy transgeniczne HLA-A2.1 (HHD)
iPS-MEF-NG-20D-17Bank komórek RIKENAPS0001
Zobacz materiał SNL76/7Kontroler ATCC (Kontroler TZobacz materiał SCRC-1049 (angielski
OP9Kontroler ATCC (Kontroler TCRL-2749
Plazmid pAAV/HBV1.2Dr Pei-Jer Chen (Narodowy Tajwański Szpital Uniwersytecki, Tajwan)Konstrukt DNA HBV
Geny TCR specyficzne dla HBs183-91(s183) (FLLTRILTI)Dr Adam J. Gehring (Instytut Badawczy Szpitala Ogólnego w Toronto, Toronto, Kanada)Specyficzne dla FLLTRILTI geny TCR hybrydy ludzko-mysiej A2 (Vα34 i Vβ28)
Geny TCR specyficzne dla OVA257–264Dr Dario A. Vignali (Uniwersytet w Pittsburghu, Pensylwania)Geny TCR specyficzne dla SIINFEKL H-2Kb
Przeciwciało anty-CD3 (17A2)Legenda biologiczna100236
Przeciwciało anty-CD44 (IM7)BD Pharmingen103012
Przeciwciało anty-CD4 (GK1.5)Legenda biologiczna100408
Przeciwciało anty-CD8 (53-6,7)Legenda biologiczna100732
Przeciwciało anty-IFN-γ (XMG1.2)Legenda biologicznaNumer katalogowy: 505810
Przeciwciało anty-TNF-a (MP6-XT22)Legenda biologiczna506306
α-MEMInvitrogenA10490-01
Przeciwciało anty-HBsRybak termicznyMA5-13059
ACK Bufor do lizyLonza10-548E
Brefeldin ASigmaZobacz materiał B7651
DMEM (DMEM)InvitrogenABCD1234
FBS (Sieć UsługowaKlonZobacz materiał SH3007.01
Sortownik komórek FACSAria FusionBdNumer katalogowy: 656700
żelatynaMiliporeSigmaZobacz materiał G9391
Zagłuszacz genówAgilentNumer katalogowy: 204130
HLA-A201-HBs183-91-PE pentamerProimmunologicznyF027-4A - 27
Przeciwciało wtórne przeciw mysim przeciwciałom HRPInvitrogenA27025
mFlt-3LPeprotech250-31L
mIL-7Peprotech217-17
Nukleaza S7Roche10107921001
ParaformaldehydMiliporeSigmaZobacz materiał P6148-500GUwaga: alergiczne, rakotwórcze, toksyczne
Bufor przepuszczalnościLegenda biologiczna421002
PolibreneMiliporeSigma107689
Mocowanie przeciwblaknięcia ProLong™ Gold z DAPIInvitrogenZobacz materiał P36931
QIAamp MinElute Virus Spin KitQiagen powiedział:Numer katalogowy: 57704
) powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatitis B VirusViral Antigen Specific T CellsiPSC Derived CD8 T CellsHydrodynamic Plasmid DeliveryHBV Genome PlasmidsTail Vein InjectionAntigen Presenting MoleculesCytotoxic Molecule ReleaseHBV Infected Liver CellsViral Replication Suppression

Related Articles