Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Wytwarzanie rekombinowanych, żywych, atenuowanych wirusów grypy do szczepionek

981 wyświetleń

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Pérez-Girón, J. V. et al, Donosowe podawanie rekombinowanych szczepionek przeciw grypie w chimerycznych modelach myszy w celu zbadania odporności błony śluzowej.J. Vis. Exp. (2015)

Film prezentuje metodę tworzenia rekombinowanych wirusów grypy dostosowanych do zimna. Polega na transfekcji komórek ludzkich dwukierunkowymi plazmidami, a następnie inkubacji w niższej temperaturze w celu uzyskania wirusów odpowiednich do produkcji szczepionek, charakteryzujących się zmniejszoną replikacją w cieplejszych warunkach.

Protokół

1. Wytwarzanie rekombinowanych żywych atenuowanych szczepionek przeciw grypie metodą genetyki odwrotnej

UWAGA: Szczegółowy protokół generowania rekombinowanych wirusów grypy metodą odwrotnej genetyki został opisany w poprzednich badaniach i wykracza poza zakres tego raportu. Krótko mówiąc, ratowanie szczepionek przeciw grypie przystosowanych do przeziębienia (CAV) odbywa się w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II przy poziomie bezpieczeństwa biologicznego 2 (BSL2) i obejmuje kroki opisane poniżej.

  1. Wygeneruj reasortant, przystosowaną do zimna szczepionkę przeciw grypie, używając jako tła....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1. Inżynieria identyfikowalnych LAIV.(A) Segmenty grypy sklonowane w plazmidach ambisense transfekowano do komórek 293T przy użyciu Lipofectamine 2000. 24 godziny po transfekcji supernatanty uzyskane z komórek 293T użyto do pokrycia przepuszczających grypę komórek nerki psów Madin-Darby (MDCK) w obecności 1% trypsyny TPCK. Cały protokół przeprowadzono w temperaturze 33 °C. S.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zmodyfikowany Eagle Medium firmy Dulbecco (DMEM 1X)Technologie Gibco RL-LifeNumer katalogowy: 41965-039
Opti MEMTechnologie Gibco RL-Life31985-047
Lipofektamina 2000Technologie Invitrogen-LifeNumer katalogowy: 11668-027
Penicylina-Streptomycyna (10.000 U/ml)PAA (Agencja OchronyP11-010
Albumina surowicy bydlęcejSigma-AldrichCertyfikat A2153
Dimetylosulfotlenek (DMSO)Sigma-AldrichZobacz materiał D2650
Trypsyna-TPCKSigma-AldrichZobacz materiał T1426
T powiedział:

Tagi

Rekombinowany wirus grypyywa atenuowana szczepionkadwukierunkowa transfekcja plazmidowaprodukcja wirusa zimnoadaptowanegohodowla ludzkich kom rek nab onkowychnak adka z kom rek MDCKinkubacja w obni onej temperaturzesamomonta bia ek wirusowychprotok przygotowania szczepionkinadekspresja kwasu sialowego