Terapia fagowa przeciwko zakażeniu Pseudomonas aeruginosa w zarodkach danio pręgowanego

Streszczenie

Źródło: Cafora, M., et al., A. Zastosowanie terapii fagowej w celu przeciwdziałania zakażeniu Pseudomonas aeruginosa w zarodkach danio pręgowanego z mukowiscydozą. J. Vis. Exp. (2020)

Film demonstruje technikę terapii fagowej ukierunkowaną na zakażenie Pseudomonas aeruginosa w zarodkach danio pręgowanego z mukowiscydozą. Terapia fagowa skutecznie zmniejsza obciążenie bakteryjne i łagodzi prozapalne odpowiedzi immunologiczne w zarodkach danio pręgowanego mukowiscydozy zakażonych bakteriami, co prowadzi do zmniejszenia śmiertelności zarodków mukowiscydozy.

Protokół

1. Mikroiniekcja zarodków danio pręgowanego z bakteriami i koktajlem fagowym

UWAGA: Aby przeprowadzić infekcję ogólnoustrojową, zarodek musi mieć krążenie krwi, które zwykle zaczyna się po 26 hpf.

1. Po 26 hpf zdekorionować zarodki roztworem pronazy przygotowanym przez rozpuszczenie proszku pronazy w pożywce E3 w stężeniu 2 mg/ml. Delikatnie odpipetuj zarodki, aby przerwać kosmówkę. Wyrzuć pożywkę pronazy/E3 i kilkakrotnie opłucz naczynie świeżym E3, aby usunąć całą pronazę.
2. Znieczulić zarodki danio pręgowanego w pożywce E3 zawierającej trikainę na około 5 minut przed wstrzyknięciem.
....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Agar Bacto	Bd	Numer katalogowy 214010
Buforowana fosforem sól fizjologiczna PBS firmy Dulbecco	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał D8537
Metanosulfonian 3-aminobenzoesanu etylu	Sigma-Aldrich	886-86-2	Nazwa zwyczajowa tricaine
Mikromanipulator Femtojet	Eppendorf	Numer katalogowy: 5247
Igły do mikroiniekcji	Aparatura harwardzka
N-fenylotiomocznik >=98%	Aldrich-P7629	103-85-5
Pronaza	Sigma-Aldrich	9036-06-0
Mikrowtrysk Z-MOLDS	Instrumenty Word Precision

TGL TGL powiedział: powiedział: