Oczyszczanie samoorganizujących się nanocząstek białkowych za pomocą chromatografii powinowactwa

Abstract

Źródło: Karch, C. P. et al., Produkcja samoorganizujących się nanocząstek białkowych eksprymowanych przez E. coli dla szczepionek wymagających prezentacji epitopów trymerycznych.J. Vis. Exp. (2019)

Ten film prezentuje oczyszczanie samoorganizujących się nanocząstek białkowych lub SAPN oznaczonych histydyną za pomocą chromatografii cieczowej o powinowactwie. Uzyskane w ten sposób oczyszczone frakcje SAPN nadają się do opracowania szczepionek, co daje nadzieję na potencjalne zastosowania immunoterapeutyczne.

Protocol

1. Ekspresja samoorganizującego się rdzenia nanocząstek białkowych zawierających wiązkę sześciu helis (SHB-SAPN) w E. coli BL21(DE3)

1. Zmieszać 95 ml składnika A i 5 ml składnika B pożywki w sterylnej szklanej kolbie Erlenmeyera o pojemności 2 litrów, zgodnie z instrukcjami producenta (patrz tabela materiałów). Dodać ampicylinę do końcowego stężenia 100 μg/ml.
2. Zaszczepić pożywkę bakterią E. coli z wcześniej ustalonej kultury podstawowej glicerolu. Inkubować kulturę w temperaturze 30 °C z wytrząsaniem przy 200 obrotach na minutę (obr./min) przez 48 h.
   UWAGA: Zastosowany zapa....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanol	rybak	BP26181	4 L
Ampicyliny	rybak	Zobacz materiał BP1760-25	25 gramów
Jednorazowe filtry próżniowe/systemy przechowywania Corning	rybak	Numer katalogowy: 09-761-108	Różnorodność rozmiarów
Fabrycznie zapakowane kolumny GE Healthcare 5 ml HisTrap HP	GE Opieka zdrowotna	45-000-325	Opakowanie 5 szt
glicerol	rybak	Zobacz materiał BP229-4	4 L
Imidazol	rybak	Numer telefonu O3196-500	500 gramów
Magic Media E. coli Pożywka ekspresyjna	Rybak termiczny	Zobacz materiał K6803	1 L
MilliporeSigma Millex Sterylna strzykawka 0,22 mm Filtry	Milipory	SLGV033RB	Opakowanie 250 szt.
One Shot BL21 Star (DE3) Chemicznie kompetentny E. coli	Rybak termiczny	C601003	20 fiolek
Fosforan sodu jednozasadowy	rybak	Zobacz materiał BP329-500	500 gramów
Baza Tris	rybak	Zobacz materiał BP152-1	1 kg
mocznik	rybak	Zobacz materiał BP169-500	2,5 kg
sprzęt
Fiberlite F14-14 x 50cy Wirnik o stałym kącie nachylenia	Rybak termiczny	Numer katalogowy: 096-145075	wirnik
System chromatograficzny NGC Quest 10	Przedsiębiorstwo BioRad	7880001	FPLC wspomagający oczyszczanie białek
Sonifer 450	Branson	znany również jako 096-145075	Sonifikacji