Budowa humanizowanego modelu myszy z inżynieryjną odpornością na HIV

Abstract

Źródło: Zhen, A., et al. Inżynierska odporność oparta na komórkach macierzystych przeciwko zakażeniu wirusem HIV w humanizowanym modelu myszy. J. Vis. Exp. (2016).

Wideo demonstruje technikę generowania humanizowanego modelu myszy z opartą na komórkach macierzystych odpornością przeciwko ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności (HIV). Ludzka tkanka grasicy płodu i zmodyfikowane hematopoetyczne komórki macierzyste (HSC) są wszczepiane do torebki nerkowej myszy z poważnie obniżoną odpornością. HSC, które wyrażają chimeryczne receptory antygenowe (CAR) przeciwko wirusowi HIV, są mieszane w galaretowatej mieszaninie białek, która sprzyja ich kolokalizacji z tkanką grasicy. Po zabiegu HSC różnicują się w różne ludzkie komórki odpornościowe, w wyniku czego powstaje humanizowany model myszy z funkcjonalnym ludzkim układem odpornościowym przeciwko HIV.

Protocol

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB. Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Budowa humanizowanych myszy z Chimerycznym Receptorem Antygenowym CD4

1. Przetwarzanie grasicy płodu i izolowanie HSC CD34+ z wątroby płodu
   1. Przetwarzanie grasicy
      1. Delikatnie umyj grasicę w roztworze soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS), pH ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Zestaw mikrokulek CD34	miltenyi powiedział:	Numer katalogowy: 130-046-702	Do sortowania ludzkich komórek progenitorowych CD34+
Bambanker (Bambanker)	Wako	302-14681	do zamrażania komórek
Zestaw QIAamp Viral RNA	Qiagen powiedział:	Numer katalogowy: 52904	Do pomiaru wiremii w surowicy
Cytometr przepływowy MACSQuant	Miltenyi Miltenyi		Do analizy przepływu
BD LSRFortessa™	BD nauki biologiczne		Do analizy przepływu
Hialuronidazy	Sigma	H6254-500MG	Do trawienia tkanek
Deoksyrybonukleaza I	Worthington	LS002006	do trawienia tkanek
Kolagenaza	Technologia życiowa	Numer katalogowy 17104-019	do trawienia tkanek
System detekcji CFX Real Time PCR	Biorad		Do pomiaru wiremii i ekspresji genów
Myszy, szczep NOD. Cg-prkdcscid il2rgtm1Wjl/SzJ	Laboratorium Jacksona	5557	Do konstruowania humanizowanych myszy
Penicylina Streptomycyna (paciorkowca pióra)	Thermo Fisher Naukowy	10378016	Do hodowli komórek
piperacylina/tazobaktam	Pfizer	Zosyn	Działa przeciwgrzybiczo
Amfoterycyna B (grzybozon przeciwgrzybiczy)	Thermo Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 15290-018	Działa przeciwgrzybiczo
AUTOCLIP Klipsy do nawijania, 9 mm - 1000 sztuk	Becton Dickinson	427631	Do zabiegu chirurgicznego
Sterylne fartuchy chirurgiczne Aurora wzmocnione poliamidem, 30 sztuk w opakowaniu	Linia medline	DYNJP2707	Do zabiegu chirurgicznego
Szwy, 4-0, vicryl	Owens i Minor	23000J304H	Do zabiegu chirurgicznego
Wkładki nasączone alkoholem	Owens i Minor	3583006818	Do zabiegu chirurgicznego
Rękawice chirurgiczne, 6 1/2	Owens i Minor	4075711102	Do zabiegu chirurgicznego
Pożywka z limfocytów T bez serum firmy Yssel	Produkty Bio-Gemini	400-102	Do transdukcji komórek CD34+
Albumina surowicy ludzkiej	Sigma-Aldrich	A9511	Do transdukcji komórek CD34+