Generowanie hodowli neuronów pierwotnych o niskiej gęstości z zamrożonych neuronów embrionalnych

Streszczenie

Źródło: Koganezawa, N. et al., Łatwa i odtwarzalna hodowla pierwotna o niskiej gęstości przy użyciu zamrożonych zasobów embrionalnych neuronów hipokampa.J. Vis. Exp. (2023)

Ten film demonstruje metodę hodowli kriokonserwowanych neuronów embrionalnych, obejmującą kontrolowane rozmrażanie, rozcieńczanie pożywką neurobazalną i wysiewanie na płytkę pokrytą poli-L-lizyną. Późniejsza inkubacja wspomaga wzrost i utrzymanie połączeń neuronalnych.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Powłoka płyty

1. Pokryć 96-dołkową mikropłytkę poli-L-lizyną (1 mg/ml, rozcieńczony w 0,1 M buforze boranowym [pH: 8,5]; 100 μl/basenik) i inkubować przez noc w temperaturze 37 °C.
   nuta: Pokryj tylko te studzienki, które mają być używane. W przeprowadzanych tu eksperymentach wykorzystuje się środkowe 60 studzienek. Bufor boranowy przygotowuje się przez zmieszanie 50 mM kwasu borowego i 12 mM boranu w wysterylizowanej wodzie.
2. Umyć płytkę dwukrotnie wysterylizowaną wodą (25....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Płytka 96-dołkowa	Korporacja Zeon		utalentowany
Płytka 96-dołkowa	Greiner	655986
B-27	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy: 17504-044	2 v/v% dla płyt MEA; 50x dla płyt normalnych
boraks	Sigma	B-9876	Stężenie końcowe 12 mM
Kwas borowy	WAKO	Numer katalogowy: 021-02195	Stężenie końcowe 50 mM
Albumina surowicy bydlęcej	Milipory	12659-100G	Stężenie końcowe: 3% w PBS
GlutaMAX	Gibco (firma Gibco)	Numer telefonu 35050-061	2,5 mM dla płyt MEA; 400x dla płyt normalnych
W analizatorze komórek 2200	Cytiva (Cytiwa)		Obrazy fluorescencyjne
Neuropodstawowy	Gibco (firma Gibco)	21103-049
Penicylina/Streptomycyna	Gibco (firma Gibco)	Rozdział 15140-122	100 U/ml dla normalnych płytek
Penicylina/Streptomycyna	Nacalai Teskajska	26253-84	100 μg/ml dla płytek MEA
Poli-L-lizyna	Sigma	Zobacz materiał P2636	Rozcieńczony w buforze boranowym (stężenie końcowe: 1 mg/ml)
Neuron NIEBA	AlzMed , Inc.	ARH001	1,0 x 106 ogniw/probówkę

powiedział: powiedział: