Techniki hodowli neuronów

Film demonstruje metodę hodowli neuronów z mysich hipokampów. Początkowo hipokampy przechodzą trawienie enzymatyczne w celu rozbicia zewnątrzkomórkowej macierzy tkankowej. Następnie strawiona tkanka jest mechanicznie rozrywana w celu wyizolowania pojedynczych neuronów. Wreszcie, neurony te są hodowane na komórkach glejowych.

Ten film demonstruje metodę hodowli kriokonserwowanych neuronów embrionalnych, obejmującą kontrolowane rozmrażanie, rozcieńczanie pożywką neurobazalną i wysiewanie na płytkę pokrytą poli-L-lizyną. Późniejsza inkubacja wspomaga wzrost i utrzymanie połączeń neuronalnych.

Wideo ilustruje technikę hodowli fluorescencyjnych neuronów GABA-ergicznych i glutaminergicznego z kory mózgowej i tkanek hipokampa transgenicznych szczeniąt myszy. Proces ten obejmuje uzyskanie oczyszczonych zawiesin pojedynczych komórek neuronów, sortowanie neuronów GABA-ergicznych na podstawie ich ekspresji białek fluorescencyjnych oraz umieszczanie ich na płytkach pokrytych poli-L-lizyną w celu ułatwienia przyczepiania i proliferacji komórek.

Film demonstruje technikę hodowli pierwotnych astrocytów z kory szczura. Kora jest mechanicznie dysocjowana w celu uzyskania jednorodnej zawiesiny komórek glejowych, która jest następnie powlekana na płytkach pokrytych polipeptydami w celu promowania selektywnej proliferacji astrocytów. Następnie astrocyty są enzymatycznie dysocjowane od płytek i przenoszone na świeże podłoża, co pozwala na hodowlę czystych astrocytów.

Film demonstruje technikę izolowania mikrogleju z kory mózgowej dorosłej myszy. Po pierwsze, kora przechodzi segmentację i homogenizację w celu usunięcia neuronów i innych komórek glejowych, zachowując mikroglej. Następnie zawiesina komórkowa jest poddawana działaniu mikrokulek magnetycznych antymieliny i pola magnetycznego, skutecznie oddzielając komórki mikrogleju i szpiku od resztek mieliny i komórek zawierających mielinę.

Film pokazuje prostą metodę hodowli mysich astrocytów w izolacji od innych komórek mózgowych. Podczas hodowli, przy użyciu pożywek specyficznych dla astrocytów i hamowaniu przylegania komórek nieastrocytowych, metoda selektywnie hoduje astrocyty. Te hodowane astrocyty wykazują gwiaździstą morfologię z drobnymi wyrostkami.

Film demonstruje metodę generowania pobudzających neuronów korowych z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (hiPSC). Po indukcji doksycykliny hiPSC wykazują nadekspresję neurogeniny-2, czynnika transkrypcyjnego specyficznego dla neuronów. Dzięki zastosowaniu specyficznych pożywek i wspólnej hodowli z astrocytami, proces ten ułatwia różnicowanie się hiPSC w neurony z połączeniami synaptycznymi.

Ten film demonstruje technikę generowania pierwotnej kultury neuronów i gleju z pęcherza moczowego szczura. Przedstawiono w nim etapy przygotowania tkanek, trawienia enzymatycznego w celu uzyskania pojedynczych komórek oraz hodowli komórek w pożywce specyficznej dla neuronów w celu ustanowienia pierwotnej kultury neuronalnej i glejowej.

Ten film demonstruje wykorzystanie wstępnie zmontowanego plastikowego chipa mikroprzepływowego do podzielonej na przedziały hodowli pierwotnych neuronów hipokampa szczura. Neurony są umieszczane w jednym z przedziałów mikroprzepływowych, gdzie przyczepiają się i rosną, przedłużając swoje aksony przez mikrorowki chipa do sąsiedniego przedziału. Wąskie mikrorowki zapobiegają przedostawaniu się ciał komórek neuronalnych, umożliwiając w ten sposób fizyczną separację między przedziałami somatycznymi...

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli pierwotnych neuronów ziarnistych móżdżku myszy. Komórki są traktowane antymetabolitem w celu wyeliminowania proliferujących komórek glejowych i wytworzenia czystej kultury neuronów ziarnistych móżdżku.

Ten film demonstruje proces izolowania eksplantatów spiralnych zwojów z ucha wewnętrznego i ich wspólnej hodowli z organem Cortiego na matrycy wieloelektrodowej. Spiralne zwoje są ostrożnie ekstrahowane i dzielone na mniejsze skrawki tkanek lub eksplantaty. Te eksplantaty są hodowane w obszarze aktywnym matrycy wieloelektrodowej, aby promować wzrost procesów neuronalnych.

Film demonstruje metodę hodowli pierwotnych komórek zwojowych siatkówki z zarodków danio pręgowanego. Zarodki we wczesnym stadium są poddawane sekcji w celu wyizolowania oczu, które są następnie mechanicznie dysocjowane w zawiesinę komórek zwojowych siatkówki. Ta zawiesina komórkowa jest hodowana na szkiełkach nakrywkowych pokrytych białkami adhezyjnymi, aby ułatwić rozwój aksonów.

Ten film demonstruje technikę generowania komórek neuronalnych z pluripotencjalnych komórek macierzystych pochodzących z krwi (BD-PSC). BD-PSC uzyskuje się poprzez przeprogramowanie komórek progenitorowych krwi. Niezróżnicowane BD-PSC są hodowane na szkiełkach nakrywkowych pokrytych substratem do hodowli komórkowych przy użyciu pożywki do indukcji neuronalnej i pożywki do różnicowania neuronalnego, wywołując różnicowanie w komórki o fenotypie neuronalnym.

Ten film demonstruje metodę izolowania i hodowli mikrogleju z mózgów szczurów. Polega ona na oddzieleniu mikrogleju od innych komórek neuronalnych i nieneuronalnych za pomocą płytek pokrytych przeciwciałem monoklonalnym specyficznym dla mikrogleju.

Film pokazuje proces izolacji i hodowli nerwowych komórek macierzystych ze strefy podmodzelowej mózgu myszy. Polega na rozwarstwieniu tkanek, dysocjacji enzymatycznej i wyhodowaniu ich za pomocą czynników różnicujących, aby rozwinęły się w dojrzałe komórki nerwowe.

Film pokazuje różnicowanie się embrionalnych komórek macierzystych myszy (mESC) do ciał embrionalnych (EB) metodą wiszącej kropli. Po zawieszeniu mESC w wiszących kroplach i inkubacji, komórki agregują się, tworząc EB, które są dalej różnicowane w neuronalne komórki progenitorowe (NPC) za pomocą pożywki różnicującej uzupełnionej kwasem retinowym (RA).

Ten film demonstruje szczegółowy protokół izolowania ścian bocznych komór od mózgu dorosłej myszy i przeprowadzania enzymatycznej dysocjacji tkanek w celu uzyskania pojedynczych komórek. Komórki te są następnie poddawane specyficznym warunkom hodowli, które selektywnie zwiększają proliferację nerwowych komórek macierzystych i promują ich różnicowanie w kokultury oligodendrocytów i astrocytów.

Ten film demonstruje technikę izolowania indukowanych nerwowych komórek progenitorowych (iNPC) pochodzących z dorosłych ludzkich fibroblastów. Przedstawiono w nim etapy związane z izolacją kolonii iNPC i hodowlą ich w wielodołkowych dołkach płytkowych pokrytych lamininą w obecności odpowiednich pożywek hodowlanych, które ułatwiają ciągłą proliferację i ekspansję populacji iNPC.

Ten film demonstruje metodę hodowli neuronów o ultra niskiej gęstości w obecności warstwy zasilającej neurony o dużej gęstości. Ustanawia wspólną kulturę neuronów o różnej gęstości, zapewniając bliską bliskość fizyczną. Czynniki wzrostu wydzielane przez neurony o dużej gęstości pomagają w przetrwaniu i wzroście neuronów, utrzymując neurony o ultraniskiej gęstości przez dłuższy czas.

Ten film demonstruje technikę przekształcania niezróżnicowanych komórek nerwiaka zarodkowego SH-SY5Y w pełni zróżnicowane dojrzałe neurony za pomocą techniki systematycznego pasażowania. Polega to na hodowli komórek w serii pożywek ze stopniowo zmniejszającymi się poziomami w surowicy w celu zahamowania proliferacji komórek podobnych do nabłonka, jednocześnie promując różnicowanie i proliferację komórek podobnych do neuronów. Dodatkowo pożywka jest uzupełniana kwasem retinowym i specyficznymi...

Ten film pokazuje izolację komórek ze zwojów czuciowych myszy. Zwoje są poddawane trawieniu enzymatycznemu w celu rozpuszczenia macierzy zewnątrzkomórkowej. Pojedyncze komórki są następnie zbierane poprzez filtrowanie przez sitko do komórek, a następnie wirowanie w gradiencie gęstości w celu usunięcia zanieczyszczeń. Na koniec wykonuje się mycie i odwirowanie w celu zebrania izolowanych komórek do przyszłej analizy.

Ten film demonstruje dysocjację i kulturę neuronów hipokampa z próbek tkanek hipokampa za pomocą dysocjacji enzymatycznych i mechanicznych. Leczenie Ara-C hamuje wzrost komórek nieneuronalnych, ułatwiając selektywny wzrost neuronów hipokampa.

Ten film przedstawia metodę hodowli neuronów dopaminergicznych z embrionalnej tkanki mózgowej myszy. Proces ten obejmuje leczenie śródmózgowia enzymem proteolitycznym, odłączenie komórek i wyhodowanie ich na pokrytych polimerem szkiełkach nakrywkowych w pożywce bogatej w składniki odżywcze z antybiotykami dla ich wzrostu i długoterminowej żywotności.

Ten film pokazuje izolację i hodowlę komórek progenitorowych móżdżku z móżdżku móżdżku. Progenitorzy neuronów ziarnistości móżdżku są izolowane i oczyszczane poprzez adhezję różnicową, skutecznie usuwając astrocyty. Ci wyhodowani przodkowie następnie różnicują się w neurony ziarniste móżdżku.

Ten film demonstruje metodę izolowania fluorescencyjnie znakowanych neuronów z mózgu myszy.

Ten film pokazuje konstruowanie trzykomorowego systemu hodowli komórkowej przy użyciu kolagenu i niereaktywnego smaru. System ten służy do obserwacji interakcji między komórkami glejaka a aksonami w czasie rzeczywistym.

Ten film prezentuje metodę izolowania neuronów przedsionkowych od wewnętrznego ucha szczeniaka myszy. Skrupulatnie przedstawia etapy związane z preparacją ucha wewnętrznego, pobraniem zwoju przedsionkowego, a następnie dysocjacją zwoju na pojedyncze komórki. Komórki te są następnie hodowane na szalkach ze szklanym dnem w celu ustanowienia hodowli neuronów przedsionkowych.

Ten film demonstruje technikę izolacji i hodowli komórek prekursorowych oligodendrocytów (OPC) z kory mózgowej szczeniąt myszy.

Ten film demonstruje metodę rozwoju zwojów korzenia grzbietowego lub hodowli eksplantatów DRG i modeli komórek zdysocjowanych DRG przy użyciu izolowanych tkanek DRG myszy. Modele te pomagają badać różne mechanizmy interakcji neuron-glej w kontrolowanym środowisku.

Film pokazuje przygotowanie kolikulo-wzgórzowo-korowych wycinków mózgu z mózgów mysich szczeniąt. Izolowany mózg jest ustawiany na zaznaczonym slajdzie i cięty pod kątem, aby wyrównać słuchowe śródmózgowie i przodomózgowie w tej samej płaszczyźnie. Mózg jest następnie krojony za pomocą wibratomu, a wycinki zawierające główne struktury słuchowe śródmózgowia i przodomózgowie są przenoszone do komory przetrzymywania w celu konserwacji.

Ten film demonstruje metodę pobierania neuronów z grzbietowych zwojów korzeniowych (DRG). DRG z kręgosłupa szczura jest izolowany, traktowany enzymami, a następnie mechanicznie dysocjowany w celu uzyskania zawiesiny jednokomórkowej. Neurony są oddzielane od komórek glejowych za pomocą wirowania w gradiencie gęstości i hodowane w pożywce wzrostowej.

Ten film przedstawia metodę izolowania nerwowych komórek macierzystych/progenitorowych z tkanki okołokomorowej rdzenia kręgowego u dorosłych szczurów. Technika ta obejmuje inkubację fragmentów tkanek w roztworze zawierającym enzymy proteolityczne w celu zakłócenia macierzy zewnątrzkomórkowej i uwolnienia komórek. Następnie uwolnione komórki są siane w pożywce zawierającej specyficzne czynniki wzrostu, które zwiększają proliferację neuronalnych komórek macierzystych / progenitorowych i promują...

Ten film demonstruje protokół uzyskiwania wysoce żywotnej zawiesiny jednokomórkowej z hipokampa mózgu myszy przy użyciu kombinacji automatycznej dysocjacji mechanicznej i mieszaniny enzymów wspomagających trawienie enzymatyczne.

Film demonstruje przygotowanie jednokomórkowej zawiesiny komórek odpornościowych z mysiej tkanki mózgowej. Obejmuje trawienie enzymatyczne w celu uwolnienia komórek z tkanki mózgowej, a następnie wirowanie w gradiencie gęstości w celu wyizolowania komórek odpornościowych na podstawie ich gęstości w celu uzyskania zawiesiny pojedynczej komórki.

Ten film demonstruje metodę izolowania pierwotnych komórek oligodendrocytów z zawiesiny komórek nerwowych uzyskanej od mysiego szczeniaka za pomocą separacji magnetycznej. Technika ta wykorzystuje kulki magnetyczne pokryte przeciwciałami specyficznymi dla antygenów oligodendrocytów, co umożliwia selektywną izolację tych komórek.

Ten film przedstawia izolację i hodowlę komórek Schwanna z korzeni rdzeniowych myszy. Wyizolowane komórki są następnie hodowane w określonych pożywkach. Komórki Schwanna są izolowane poprzez zróżnicowane trawienie i przyleganie. Następnie są przenoszone do szkiełek nakrywkowych pokrytych macierzą zewnątrzkomórkową w celu przyczepienia i proliferacji.

Ten film demonstruje szczegółowy protokół przygotowania poziomych wycinków mózgu hipokampa od myszy, skupiając się na zachowaniu integralności szlaków włókien hipokampa. Proces ten polega na starannym przecięciu i zabezpieczeniu mózgu, użyciu wibratomu do krojenia i utrzymaniu optymalnych warunków tkanek za pomocą płynu karbogenicznego, w wyniku czego powstają wycinki mózgu hipokampa gotowe do dalszych eksperymentów.

Film pokazuje generowanie pochylonych wycinków ciała migdałowatego z mózgu myszy. Mózg jest umieszczony pod kątem na etapie próbki wibratomowej, aby uzyskać wycinki zawierające ciało migdałowate i aksony z przyśrodkowej kory przedczołowej, które tworzą połączenia synaptyczne z ciałem migdałowatym. Wycinki mózgu są utrzymywane w temperaturze fizjologicznej, aby zachować tkankę do dalszych eksperymentów.

Ten film pokazuje przygotowanie cienkich wycinków koronalnych mózgu z mysiego mózgu, odsłaniając obszary ciała migdałowatego bogate w połączenia synaptyczne z przyśrodkowej kory przedczołowej. Wycinki są następnie odzyskiwane w natlenionym sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym w celu utrzymania żywotności neuronów.

Ten film demonstruje protokół ekstrakcji komórek mikrogleju ze zmian demielinizacyjnych w mózgach myszy za pomocą magnetycznego sortowania komórek. Protokół obejmuje preparację uszkodzonej tkanki mózgowej zawierającej komórki mikrogleju, potraktowanie tkanki określonymi enzymami w celu uzyskania zawiesiny pojedynczej komórki oraz wykorzystanie kulek magnetycznych specyficznych dla receptora mikrogleju do wyizolowania komórek mikrogleju.

Ten film pokazuje izolację wielu typów komórek z tkanki mózgowej myszy. Tkanka jest najpierw mechanicznie ścinana za pomocą młynka do tkanek w roztworze soli, aby utrzymać równowagę osmotyczną. Homogenat tkankowy jest następnie poddawany wirowaniu w gradiencie gęstości w celu usunięcia resztek komórkowych. Komórki są następnie ponownie zawieszane w roztworze w celu dalszej analizy.

Ten film demonstruje procedurę izolowania komórek odpornościowych od mysich splotów naczyniówkowych. Ta procedura jest stosowana w badaniach neuroimmunologicznych, aby zrozumieć, w jaki sposób komórki odpornościowe w splocie naczyniówkowym wpływają na zdrowie mózgu i różne choroby neurologiczne.

Film demonstrował metodę izolowania i hodowli komórek z mózgu noworodka myszy. Polegało to na enzymatycznej i mechanicznej dysocjacji mózgu, a następnie hodowli w pożywkach wzrostowych pozbawionych neuronalnego czynnika wzrostu w celu uzyskania mieszanej populacji glejowej.

Ten film demonstruje procedurę izolowania i sortowania jąder ze świeżo zamrożonej ludzkiej tkanki mózgowej za pomocą sortowania jąder aktywowanych fluorescencją (FANS), które umożliwia badanie różnych populacji komórek dla różnych zastosowań neurologicznych.

Ten film demonstruje protokół izolowania komórek z hipokampów szczurów, w tym neuronów, astrocytów i mikrogleju.

Ten film pokazuje izolację fluorescencyjnie znakowanych neuronów od Caenorhabditis elegans. Zawiesinę komórkową uzyskuje się z transgenicznych robaków zaprojektowanych do ekspresji fluorescencyjnych, połączonych z białkiem transbłonowym transporterów pęcherzykowych w neuronach cholinergicznych. Znakowane fluorescencyjnie neurony są następnie izolowane za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją (FACS) i utrzymywane w hodowli.

Film pokazuje przygotowanie plastrów móżdżku. Przedstawia szczegółową procedurę izolowania móżdżku od zarodka pisklęcia. Plastry są następnie przygotowywane z wypreparowanego móżdżku za pomocą rozdrabniacza tkanek do dalszej analizy eksperymentalnej.

Ten film demonstruje procedurę izolowania mysich pierwotnych komórek zwojowych siatkówki (RGC) za pomocą cytometrii przepływowej. Metoda ta pozwala na przyszłe badania RGC, w celu lepszego zrozumienia poważnego spadku ostrości wzroku, który wynika z utraty funkcjonalnych RGC w chorobach neurodegeneracyjnych.

Ten film przedstawia izolację mysiego narządu lemieszowo-nosowego (VNO) i przygotowanie tkanek do cięcia wibratomem. Sekcje służą do scharakteryzowania biofizycznych i fizjologicznych atrybutów określonej grupy neuronów czuciowych.

Ten film demonstruje protokół izolacji i hodowli pierwotnych komórek kory mózgowej z grzbietowo-bocznego kresomózgowia embrionów myszy.

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli komórek zwojów korzenia grzbietowego (DRG) z kręgosłupa szczura. DRG wycięte z kręgosłupa są traktowane enzymami i mechanicznie dysocjowane w celu uzyskania zawiesiny jednokomórkowej. Komórki są hodowane w pożywce zawierającej inhibitory i czynniki wzrostu, które odpowiednio ograniczają proliferację komórek glejowych i promują wzrost neuronów.

Wideo pokazuje proces izolacji i hodowli neuronów dopaminowych ze śródmózgowia embrionów myszy. Izolowane brzuszne dno śródmózgowia jest dysocjowane za pomocą enzymów. Powstałe neurony dopaminowe są zbierane i przenoszone do mikrowysp wewnątrz płytek wielodołkowych. Komórki są inkubowane z pożywką neuronów dopaminowych, aby utrzymać komórki w dużej gęstości wewnątrz mikrowysp.

Ten film demonstruje metodę różnicowania ludzkich neuronalnych komórek progenitorowych (NPC) w neurony. NPC są wprowadzane do ustalonej kokultury neuronów korowych astrocytów myszy i szczurów, promując różnicowanie NPC w neurony. Różnicowanie potwierdza się poprzez wizualizację komórek pod mikroskopem konfokalnym.

Ten film prezentuje technikę ko-hodowli neuronów glutaminergicznego i pediatrycznych komórek glejaka wysokiego stopnia (pHGG) w urządzeniu mikroprzepływowym. Ludzkie indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste są wprowadzane do układu mikroprzepływowego i inkubowane w celu promowania ich różnicowania w dojrzałe korowe neurony glutaminergiczne. Następnie komórki pHGG są wprowadzane do dojrzałych neuronów, ustanawiając kokulturę i umożliwiając interakcje między neuronami a komórkami pHGG.

Ten film ilustruje metodę ustanawiania pośredniej kokultury neuronów i astrocytów przy użyciu podejścia opartego na podziałach. W tej konfiguracji neurony i astrocyty są przestrzennie oddzielone, ale mają wspólne uwarunkowane podłoże. Czynniki neurotroficzne uwalniane przez astrocyty sprzyjają różnicowaniu neuronów i tworzeniu połączeń synaptycznych, co sugeruje interakcje neuron-glej.

Ten film pokazuje współhodowlę neuronów zwojowych i makrofagów mysiego korzenia grzbietowego. Neurony wysiewa się na powlekanej płytce, podczas gdy makrofagi są pobierane od myszy poddanej eutanazji, poddawane obróbce i dodawane do wkładki hodowlanej. Leczenie db-cAMP aktywuje neurony i skłania makrofagi do przyjęcia fenotypu proregeneracyjnego w celu wsparcia wzrostu neuronów.

Ten film demonstruje test wspomagający wzrost projekcji neuronów, znany jako wzrost neurytów przy użyciu pożywki kondycjonowanej makrofagami. Współhoduj neurony i makrofagi za pomocą cAMP i zbieraj kondycjonowaną pożywkę pochodzącą z makrofagów. Hodowla neuronów za pomocą kondycjonowanej pożywki sprzyja wyrostkom neurytów. Te wyrostki są znakowane fluorescencyjnie i wizualizowane za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.

Ten film pokazuje proces przygotowania tkanek brzusznego hipokampa i jądra półleżącego z mózgów myszy do wspólnej hodowli. Neurony wydłużają projekcje, tworząc połączenia synaptyczne między tkankami brzusznego hipokampa i jądra półleżącego. Metoda ta pozwala na badanie interakcji neuronalnych między tymi dwoma regionami mózgu, oferując wgląd w funkcje poznawcze, zachowanie i zaburzenia neurologiczne.

Ten film prezentuje technikę tworzenia wspólnej kultury neuronów trójdzielnych i pierwotnych komórek miazgi zębowej za pomocą filtra transwell. W tym fizycznie oddzielonym stanie komórki mezenchymalne uzyskane z tkanki miazgi zęba wydzielają parakrynne cząsteczki sygnałowe, które przechodzą przez pory, promując różnicowanie i migrację neuronów w kierunku komórek mezenchymalnych, tworząc system kohodowli.

Ten film demonstruje technikę tworzenia wspólnej kultury interneuronów z komórkami śródbłonka okołonaczyniowego. Komórki dodaje się do jednodołkowej wkładki umieszczonej w naczyniu hodowlanym. Po tym, jak komórki przylgną do naczynia, wkładka jest usuwana, umożliwiając komórkom namnażanie się i interakcję oraz tworzenie kokultury.

Ten film pokazuje rozwój systemu kokultury 3D. Wycinki mózgu myszy umieszcza się na błonie, a znakowane fluorescencyjnie ludzkie komórki guza mózgu mogą na niej rosnąć. Gdy system jest gotowy, jest barwiony do obrazowania.

Film demonstruje funkcjonalną regenerację połączeń propriordzeniowych za pomocą testu opartego na matrycy wieloelektrodowej (MEA). Wycinki rdzenia kręgowego umieszcza się na MEA i pozostawia się do połączenia. Połączone plastry są mechanicznie oddzielane poprzez tworzenie zmiany, indukując neurony propriordzeniowe do wzrostu nad zmianą i łączenia plasterków. Aktywność elektryczna warstw jest oceniana w celu identyfikacji regeneracji połączeń funkcjonalnych.

Film pokazuje izolację komórek jednojądrzastych krwi obwodowej z mózgu myszy za pomocą mechanicznej dysocjacji i trawienia enzymatycznego. Następnie następuje wirowanie w gradiencie gęstości w celu zebrania komórek odpornościowych do dalszej analizy.

Ten film demonstruje technikę selektywnego usuwania mikrogleju z pierwotnej hodowli neuronów szczura. Neurony ziarniste móżdżku są traktowane antymetabolitem w celu wyeliminowania proliferujących komórek glejowych. Dodatkowo są one traktowane środkami ukierunkowanymi na lizosomy w celu usunięcia mikrogleju z hodowli.

Ten film demonstruje procedurę kokulturacji astrocytów i neuronów w celu utworzenia sfer 3D. Te sfery 3D stanowią odrębną platformę do badania tworzenia synaps i integracji sieci neuronowych, służąc tym samym jako potencjalny model do badań w neuronauce rozwojowej, chorobach neurodegeneracyjnych i interwencjach neurofarmakologicznych.

Ten film demonstruje procedurę izolowania neuronów zwoju korzenia grzbietowego (DRG) od zarodków szczurów i współhodowli ich z prekursorami komórek Schwanna w celu wytworzenia dojrzałych komórek Schwanna. Wyizolowane DRG są przetwarzane w celu wyizolowania neuronów i komórek glejowych. Wyizolowane komórki są hodowane w celu oczyszczenia neuronów, które są następnie hodowane wspólnie z komórkami podobnymi do komórek Schwanna (SCLC) w pożywce do wspólnej hodowli. Interakcja z neuronami DRG...

Ten film pokazuje współhodowlę komórek ludzkiego mózgu perycytów, astrocytów i śródbłonka. Każda warstwa komórkowa jest tworzona oddzielnie, a następnie hodowana razem, tworząc trójwarstwowy system, który naśladuje układ komórkowy bariery...

Ten film demonstruje ustanowienie kokultury ludzkich neuronów indukowanych (iN) i indukowanych komórek prekursorowych oligodendrocytów (iOPC). iN są mieszane z iOPC w kokulturze, a następnie inkubowane, aby wspierać dojrzewanie zarówno iN do neuronów, jak i iOPC do oligodendrocytów. Neurony tworzą połączenia synaptyczne z innymi neuronami i oligodendrocytami, podczas gdy oligodendrocyty rozwijają osłonki mielinowe wokół aksonów neuronów.

Ten film demonstruje wykorzystanie urządzenia mikroprzepływowego do badania interakcji między miazgą zarodkową zęba a zwojami nerwu trójdzielnego. Pokazuje rozmieszczenie tkanek wewnątrz urządzenia mikroprzepływowego i zapewnia szczegółową wizualizację wzrostu neurytu nerwu trójdzielnego w kierunku zarodka zęba przez mikrorowki urządzenia. Dodatkowo podkreśla rolę czynników molekularnych pochodzących z zębów w promowaniu lub hamowaniu rozszerzania się neurytów do miazgi zarodkowej zęba, co ma...

Ten film pokazuje procedurę izolacji neuronów zwojowych siatkówki (RGN) z siatkówki szczura i kohodowli ich z komórkami glejowymi otoczki węchowej (OEG). Metoda ta pozwala na badanie potencjału neuroregeneracyjnego OEG po uszkodzeniu neuronalnym.

Ten film demonstruje metodę różnicowania ludzkich nerwowych komórek macierzystych z neurosfer na progenitory neuronalne i astrocyty za pomocą leczenia enzymatycznego i hodowli w pożywce bogatej w czynniki wzrostu, co ostatecznie prowadzi do dojrzewania do wyspecjalizowanych komórek progenitorowych.

Ten film przedstawia tworzenie organoidów typu przodomózgowia z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC), demonstrując postęp od agregatów komórek macierzystych do złożonych struktur, które naśladują korę mózgu i różnicują się w różne typy neuronów.

Wideo pokazuje współtworzenie neuronów zwoju korzenia grzbietowego (DRG) z komórkami Schwanna. Neurony DRG są najpierw hodowane na wstępnie rozciągniętej błonie w celu wyrównania wzrostu aksonów. Następnie wprowadzane są komórki Schwanna, które przyczepiają się do aksonów, izolując je i promując przeżycie i funkcję komórek nerwowych.

Ten film demonstruje protokół wzbogacania kultur neuronalnych z grzbietowych zwojów korzeniowych poprzez immunopanning, poprawiając w ten sposób ich czystość i użyteczność dla badań neurologicznych.

Ten film demonstruje protokół do identyfikacji czynników egzogennych, które inicjują reaktywację nerwowych komórek macierzystych mózgu Drosophila ze stanu spoczynku. Świeżo wyklute larwy są preparowane w celu wyizolowania ich mózgów, które są następnie hodowane w pożywce z lub bez hormonu testowego w celu oceny potencjału hormonu do indukowania reaktywacji i proliferacji nerwowych komórek macierzystych.

Ten film demonstruje protokół wspólnego hodowania komórek śródbłonka mózgu myszy i pierwotnych korowych komórek macierzystych oraz znakowania glikoprotein na powierzchni komórki za pomocą Ac4ManNAz (azydocukier per O-acetylowany N-azydoacetylomannosamin). Metoda ta pozwala na selektywne wzbogacanie i identyfikację białek powierzchniowych komórek w komórkach pierwotnych.

Ten film demonstruje model kokulturacyjny eksplantacji zwoju korzenia grzbietowego i komórek Schwanna. W warunkach kokultury kwas askorbinowy sprzyja różnicowaniu komórek Schwanna w formy mielinizujące. Mielinizujące się komórki Schwanna wielokrotnie owijają aksony, aby utworzyć osłonkę mielinową, która jest niezbędna do funkcjonowania nerwów.

Ten film opisuje izolację neuronów DRG poprzez trawienie enzymatyczne, dysocjację mechaniczną i wirowanie gradientowe. Komórki DRG są hodowane wspólnie z komórkami NK na macierzy zewnątrzkomórkowej w celu zbadania interakcji między komórkami odpornościowymi a neuronami czuciowymi.

Ten film demonstruje technikę oceny aktywności kwasu retinowego w zarodkach myszy. Po wyizolowaniu komórek z zarodków myszy, komórki są hodowane wspólnie z komórkami reporterowymi kwasu retinowego (RA). Komórki embrionalne wytwarzają RZS, który indukuje ekspresję beta-galaktozydazy w komórkach reporterowych, wskazując na aktywność RA w komórkach embrionalnych.

Ten film demonstruje technikę generowania trójwymiarowego systemu modeli wspólnej hodowli pierwotnych ludzkich fibroblastów rogówki i zróżnicowanych komórek neuronalnych. Ten system kohodowli może być wykorzystany do badania interakcji zrębu i nerwów.

Film demonstruje protokół, który wykorzystuje pożywki bez surowicy do generowania neuronalnych komórek progenitorowych z embrionalnych komórek macierzystych myszy. Pożądane stężenie embrionalnych komórek macierzystych, zawieszonych w podłożu niezawierającym surowicy, jest posiewane na szkiełkach nakrywkowych pokrytych żelatyną. Przy optymalnym zagęszczeniu komórek komórki wytwarzają autokrynne czynniki sygnalizacyjne, które wraz z czynnikami indukującymi różnicowanie neuronalne w pożywce wolnej...

Ten film pokazuje rozwój i różnicowanie ludzkich nerwowych komórek macierzystych w trójwymiarowym rusztowaniu. Powłoka lamininowa na rusztowaniu sprzyja przyczepianiu się komórek, podczas gdy pożywka nerwowa wolna od czynnika wzrostu indukuje różnicowanie komórek w neuronalne komórki progenitorowe, które rozszerzają swoje procesy w porowatej architekturze w wielu kierunkach, tworząc trójwymiarową...

Ten film demonstruje metodę in vitro do generowania postganglionowych neuronów współczulnych z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC). hPSC są różnicowane w komórki grzebienia nerwowego (NCC) na podporze macierzy błony podstawnej za pomocą pożywki różnicującej. NCC są następnie dysocjowane i formowane w sferoidy za pomocą innego ośrodka różnicującego. Wreszcie sferoidy są przekształcane w pozazwojowe neurony współczulne za pomocą współczulnego ośrodka neuronowego.

Ten film pokazuje powstawanie i różnicowanie pierwotnych neurosfer. Nerwowe komórki macierzyste danio pręgowanego, w obecności czynników wzrostu, namnażają się w swobodnie unoszące się neurosfery ze zdolnością do samoodnawiania, które później różnicują się w komórki glejowe i neurony.

Film demonstruje metodę generowania organoidów ludzkiego mózgu z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych. Pokazuje, w jaki sposób neurosfera tworzy warstwę neuroektodermalną, która hamuje tworzenie się innych listków zarodkowych. Neurosfery są osadzone w matrycy żelowej 3D i tworzą zawiązki neuronabłonkowe. Podczas inkubacji z pożywkami organoidowymi te pąki neuroepitelialne różnicują się w określone obszary mózgu, co powoduje tworzenie dojrzałych organoidów mózgowych.

Ten film demonstruje użycie mikroprzepływowego chipa pokrytego macierzą zewnątrzkomórkową do różnicowania nerwowych komórek macierzystych i progenitorowych lub NPC za pomocą stymulacji elektrycznej. Po wysianiu i przyleganiu do pokrytego obszaru NPC rosną, a zastosowanie prądu stałego wyzwala ich różnicowanie w neurony, astrocyty i oligodendrocyty.

Ten film demonstruje test do generowania organoidów mózgowych z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC). Ludzkie komórki iPS są indukowane do tworzenia ciał embrionalnych (EB). EB są hodowane na rusztowaniu polimerowym przy użyciu pożywki indukcyjnej, co sprzyja różnicowaniu się w nerwowe komórki macierzyste, komórki progenitorowe i niedojrzałe neurony. Na koniec EB są osadzane w matrycy i przenoszone do pożywki podtrzymującej w celu tworzenia organoidów mózgowych.

Film pokazuje tworzenie połączeń nerwowo-mięśniowych za pomocą urządzenia mikroprzepływowego. Neuronalne komórki prekursorowe i komórki progenitorowe mięśni są umieszczane w różnych studzienkach w urządzeniu i pozostawiane do dojrzewania odpowiednio w neuronach ruchowych i miotubach. Stworzenie gradientu objętościowego i chemicznego prowadzi do rozwoju aktywnych połączeń nerwowo-mięśniowych.

Ten film pokazuje rozwój hodowli neuronów 3D połączonej z planarnym układem mikroelektrod z neuronami hipokampa. Izolowane neurony tworzą sieć 2D w obszarze aktywnym układu mikroelektrod i przylegają do szklanych mikrokulek w wielodołkowej płytce z wkładką membranową. Po przeniesieniu tych pokrytych neuronami mikrokulek do elektrody, organizują się one w połączoną sieć neuronową 3D.

Ten film pokazuje proces generowania kulek neuronów za pomocą techniki hodowli wiszącej kropli. W wiszących kroplach komórki przemieszczają się w kierunku dołu, samoorganizując się w trójwymiarowe struktury tworzące kule neuronów, które można wykorzystać do badań neurobiologicznych.

Ten film demonstruje metodę śledzenia transportu aksonalnego w neuronach ruchowych za pomocą systemu komór mikroprzepływowych. Polega na hodowli tkanek embrionalnych rdzenia kręgowego myszy w studzienkach pokrytych polimerem z pożywką w celu wywołania wzrostu aksonów. Ruch organelli barwionych barwnikiem fluorescencyjnym w obrazowaniu na żywo potwierdza dwukierunkowy transport aksonalny.

Ten film pokazuje bezpośrednie przeprogramowanie astrocytów wyrażających czynniki transformujące w neurony. Czynniki transformacyjne uruchamiają kaskadę zdarzeń molekularnych ułatwiających konwersję astrocytów w neurony. Proces ten jest dodatkowo wspierany przez dostarczanie określonych środków i suplementów za pośrednictwem pożywki różnicowania neuronów.

Ten film pokazuje proces przygotowywania wycinków mózgu w kształcie klina w warunkach laboratoryjnych. Za pomocą wibratomu wytwarzany jest plasterek w kształcie klina z mózgu myszy o różnej grubości. Ten wycinek zawiera korzeń nerwu słuchowego umieszczony na grubszym końcu, podczas gdy neurony związane ze słuchem znajdują się na cieńszym końcu.

Ten film demonstruje technikę promowania różnicowania neuronów poprzez wystawienie komórek nerwowych na działanie złotych nanoprętów i światła laserowego, które tworzy projekcje komórkowe wspierane przez βIII-tubulinę. Barwienie i obserwacja tubuliny i jądra komórkowego za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej ujawnia wyrostki komórkowe, co wskazuje na skuteczność nanopręcików w różnicowaniu neuronów.

Ten film demonstruje pobieranie fluorescencyjnych nanocząstek magnetycznych (MNP) przez komórki neuronalne poprzez endocytozę. Hodowanie tych neuronów obciążonych MNP na podłożu o magnetycznym wzorze umożliwia przyłączanie komórek. Dodanie czynnika wzrostu zawierającego pożywkę pomaga we wzroście rozszerzeń neuronów, podczas gdy pole magnetyczne podłoża kieruje orientacją przedłużenia.

Ten film pokazuje różnicowanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych, czyli hESC, bezpośrednio w neuronalne komórki progenitorowe bez użycia komórek zasilających lub jakichkolwiek etapów pośrednich. Selektywne hamowanie szlaków sygnałowych białka morfogenetycznego kości lub BMP i transformacji czynnika wzrostu-beta lub TGF-β prowadzi do różnicowania hESC w nerwowe komórki progenitorowe lub NPC.

Ten film demonstruje technikę przygotowywania swobodnie pływających kultur warstwowych z mózgu dorosłego człowieka. Cienkie plasterki są generowane z części mózgu za pomocą wibratomu. Wycinki te są następnie zawieszane w pożywce hodowlanej uzupełnionej czynnikami wzrostu w celu utrzymania żywotności tkanek.

Ten film demonstruje metodę przygotowania organotypowych kultur wycinków hipokampa z mózgu szczeniaka szczura. Przedstawia etapy związane z sekcją hipokampa, krojeniem i warunkami hodowli wymaganymi do promowania żywotności i wzrostu komórek w wycinkach hipokampa, ostatecznie generując organotypowe kultury warstwowe.

Ten film opisuje protokół uzyskiwania wycinków mózgu za pomocą metody odzyskiwania ochronnej opartej na N-metylo-D-glukaminie (NMDG). Wypreparowany mózg jest inkubowany w aCSF z NMDG i HEPES w celu zminimalizowania śmierci i uszkodzenia komórek neuronalnych podczas sekcji. Sekcja może zostać zregenerowana w aCSF w celu przywrócenia aktywności...

Ten film demonstruje metodę długotrwałej inkubacji tkanki neuronalnej siatkówki. Muszle oczne zawierające siatkówkę uzyskuje się z oka myszy; wewnętrzna błona ograniczająca (ILM) jest trawiona enzymatycznie w celu odsłonięcia komórek nerwowych siatkówki, a leczona muszla oczna lub izolowana siatkówka jest przenoszona do specjalistycznego inkubatora w celu przedłużonej inkubacji w niskiej temperaturze.

Ten film demonstruje technikę generowania dojrzałych organoidów móżdżku z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC) za pomocą jednorazowego bioreaktora 3D. Bioreaktor ułatwia tworzenie agregatów iPSC, które następnie poddawane są działaniu szeregu pożywek hodowlanych wzbogaconych w czynniki wzrostu i chemokiny, które indukują różnicowanie agregatów iPSC w dojrzałe organoidy móżdżku. Następnie organoidy są zbierane i kriokonserwowane do dalszej analizy.

Ten film demonstruje technikę tworzenia trójwymiarowej hodowli komórek glejowych. Komórki glejowe pochodzące z mózgu szczura są zamknięte w fotosieciowalnej matrycy polimerowej zawierającej składniki macierzy zewnątrzkomórkowej. Po inkubacji w pożywce wzrostowej komórki glejowe namnażają się w macierzy nośnej, tworząc trójwymiarową kulturę.

Film demonstruje metodę generowania astrosfer z komórek progenitorowych z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych. Polega na wzroście i proliferacji komórek macierzystych z pożywkami zawierającymi czynniki wzrostu i inhibitory kinaz. Komórki te następnie agregują się i różnicują w astrocyty, tworząc astrosfery.

Ten film pokazuje generowanie nerwowych komórek progenitorowych z nietransgenicznych i transgenicznych ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC). hPSC są różnicowane w neuronalne komórki progenitorowe za pomocą neuronalnej pożywki różnicującej. Podczas gdy różnicowanie jest indukowane w komórkach nietransgenicznych za pomocą małych cząsteczek, transgeniczne hPSC są różnicowane przez dodanie antybiotyku, który indukuje promotor dla czynnika transkrypcyjnego specyficznego dla...

Ten film demonstruje metodę uzyskiwania komórek podobnych do komórek Schwanna z multipotencjalnych komórek zrębu szpiku kostnego (BMSC). Początkowo BMSC poddawane są leczeniu hipoksji, a następnie ukierunkowanemu różnicowaniu do neuronalnych komórek progenitorowych. Następnie stosuje się określone pożywki i warunki hodowli, aby indukować transformację tych komórek progenitorowych w komórki podobne do komórek Schwanna.

Ten film demonstruje metodę generowania trójwymiarowych rusztowań astrocytów w mikrokolumnach hydrożelowych. Wnętrze mikrokolumn pokryte jest kolagenem. Wprowadzane są astrocyty, które przylegają do kolagenu i przy dalszej inkubacji samoorganizują się w trójwymiarowe rusztowanie.

Ten film prezentuje tworzenie 3D spolaryzowanego modelu tkanki nerwowej z wykorzystaniem rusztowań jedwabno-kolagenowych. Szczegółowo opisuje proces wysiewania komórek neuronalnych na porowatych rusztowaniach z jedwabiu, inkubacji w celu przyczepienia komórek, osadzania rusztowania kolagenem i podkreśla znaczenie wspierającej macierzy kolagenowej w tworzeniu spolaryzowanego modelu tkanki nerwowej 3D.

Film prezentuje metodę oddzielania i ponownego sadzenia ludzkich pluripotencjalnych neuronów pochodzących z komórek macierzystych za pomocą łagodnego enzymu proteolitycznego. Po filtracji i odwirowaniu neurony są ponownie powlekane na powlekanej płytce wielodołkowej w celu inkubacji, co sprzyja przyczepianiu i dojrzewaniu.

Ten film demonstruje metodę tworzenia organoidów nerwów ruchowych poprzez najpierw hodowlę ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych w specjalnym podłożu w celu utworzenia sferoid, następnie różnicowanie ich w neurony ruchowe za pomocą specyficznych inhibitorów, a na końcu hodowanie ich w mikroprzepływowym chipie w celu rozszerzenia aksonów i utworzenia organoidów nerwów ruchowych.

Ten film przedstawia metodę wywoływania różnicowania w nerwowych komórkach macierzystych za pomocą zimnego plazmy atmosferycznej. Generuje to promieniowanie UV i reaktywne cząsteczki, które stymulują komórki nerwowe do wytwarzania wypustek, wskazujących na różnicowanie komórek neuronalnych.

Ten film przedstawia metodę generowania prekursorów interneuronów korowych z embrionalnych komórek macierzystych myszy. Protokół zakłada hodowlę komórek macierzystych w pożywkach zawierających specyficzne inhibitory małocząsteczkowe, które ułatwiają proliferację i agregację komórek macierzystych w ciała zarodkowe (EB). Następnie EB są dysocjowane z enzymami i siane na płytkach hodowlanych pokrytych białkami adhezyjnymi, aby promować ich różnicowanie w prekursory interneuronów korowych.

Ten film pokazuje bezpośrednie przeprogramowanie genetycznie zmodyfikowanych hematopoetycznych komórek progenitorowych na neuronalne komórki macierzyste. Czynniki transkrypcyjne ulegające ekspresji przez krwiotwórcze komórki progenitorowe wywołują kaskadę zdarzeń molekularnych ułatwiających ich transformację. Dalsze specyficzne pożywki są używane do selekcji i wzrostu indukowanych neuronalnych komórek macierzystych.

Ten film demonstruje użycie małego interferującego RNA (siRNA) do wyciszania określonych genów w nerwowych komórkach macierzystych i różnicowania ich w pożądane typy komórek za pomocą odpowiedniego podłoża różnicującego. Procedura ta umożliwia zbadanie kluczowej roli określonych genów w procesie różnicowania nerwowych komórek macierzystych.

Ten film pokazuje proces różnicowania indukowanych komórek progenitorowych neuronów (iNPC) w neurony i astrocyty za pomocą specjalistycznych pożywek.

Ten film demonstruje metodę generowania in vitro nerwowych komórek progenitorowych (NPC) z embrionalnych komórek macierzystych myszy (mESC). MESC są hodowane w zawiesinie w celu wytworzenia ciał embrionalnych (EB), które są następnie kierowane do różnicowania się w NPC poprzez traktowanie kwasem retinowym w kulturze adherentnej.

Film prezentował metodę hodowli komórkowej do różnicowania neuronalnych komórek progenitorowych w neurony. Poprzez inkubację komórek w pożywce bogatej w składniki odżywcze uzupełnionej czynnikami wzrostu, komórki progenitorowe dojrzewały do neuronów z rozwiniętymi aksonami i dendrytami. Środek stabilizujący zapewniał żywotność komórek i chronił przed uszkodzeniami oksydacyjnymi w całym procesie różnicowania.

Ten film demonstruje zmodyfikowaną metodę rurki rolkowej do długoterminowego hodowania wycinków mózgu z modelu gryzonia. Najpierw plastry mózgu są przymocowane do szkiełek nakrywkowych. Następnie pobiera się płaskie rurki rolkowe z otworem po płaskiej stronie, a szkiełka nakrywkowe umieszcza się na otworze za pomocą krążków samoprzylepnych. Na koniec do probówki dodaje się pożywkę oraz mieszaninę dwutlenku węgla i powietrza, a probówki inkubuje się ruchem tocznym.

Ten film demonstruje technikę szybkiego inicjowania i rozszerzania neuronu oraz tworzenia nowych połączeń z neuronem docelowym za pomocą urządzenia mikroprzepływowego i mikromanipulacji. Można to wykorzystać w terapiach, które mają na celu ponowne połączenie obwodów neuronalnych po urazie lub w chorobach neurodegeneracyjnych.

Film pokazuje generowanie neuronów z dorosłych ludzkich fibroblastów skórnych (aHDF). aHDF są przeprogramowywane przy użyciu wektora lentiwirusowego przenoszącego geny neuronalnych czynników transkrypcyjnych i krótkich RNA spinki do włosów (shRNA). ShRNA hamują ekspresję neuronalnego represora transkrypcyjnego, a neuronalne czynniki transkrypcyjne aktywują geny do różnicowania aHDF w neurony. Te przeprogramowane aHDF są hodowane we wczesnej i późnej pożywce konwersji neuronalnej w celu...

Wideo pokazuje tworzenie i utrzymywanie organtypowych kultur warstwowych z tkanki glejaka. Wyizolowaną tkankę osadza się w matrycy agarozowej, a cienkie skrawki uzyskuje się za pomocą wibratomu. Sekcje te są następnie umieszczane na przepuszczalnych wkładkach membranowych w mikropłytce i hodowane w pożywce do hodowli warstwowej w celu długotrwałej konserwacji.

Ten film demonstruje protokół izolacji i hodowli komórek Schwanna z ludzkich tkanek skóry właściwej. Ludzka skóra właściwa zawiera różne typy komórek, w tym fibroblasty i komórki Schwanna. Po wyizolowaniu komórki są traktowane środkiem antymitotycznym w celu wyeliminowania proliferujących fibroblastów, w wyniku czego uzyskuje się czystą hodowlę komórek Schwanna.

Wideo pokazuje proces tworzenia biodrukowanego konstruktu 3D przy użyciu astrocytów zawieszonych w roztworze biotuszu. Biodrukowany konstrukt, po usieciowaniu, ułatwia adhezję astrocytów i ich rozprzestrzenianie się, tworząc tkankę nerwowo-podobną.

Ten film pokazuje, jak glejaki, pochodzące z guzów mózgu, są rozdzielane na pojedyncze komórki i zamykane w hydrożelu na bazie kwasu hialuronowego. Proces ten sprzyja interakcjom komórka-komórka, tworząc ustrukturyzowany, trójwymiarowy model glejaka.

Ten film ilustruje technikę uzyskiwania organotypowych wycinków móżdżku z mózgu szczeniaka myszy i hodowania tych wycinków w pożywkach uzupełnionych składnikami odżywczymi i czynnikami wzrostu, aby naśladować rozwój móżdżku in vitro. Dodatkowo określone wycinki móżdżku są traktowane badanym związkiem, a zdolność neuroprotekcyjna związku jest analizowana przy użyciu techniki barwienia immunofluorescencyjnego.

Ten film opisuje przygotowanie i hodowlę organoidów guza mózgu z zawiesiny pojedynczej komórki. Wykorzystując bogatą w lamininę macierz zewnątrzkomórkową jako rusztowanie i pożywkę hodowlaną dla składników odżywczych, komórki mają ułatwione namnażanie się i samoorganizację w organoidzie. W związku z tym generowane są organoidy ex vivo, naśladujące różnorodność komórkową i mikrośrodowisko guzów mózgu.

Ten film pokazuje proces generowania komórek prekursorowych oligodendrocytów (OPC) z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych, a następnie dojrzewania OPC do oligodendrocytów. Ten proces generowania oligodendrocytów otwiera wiele możliwości poprawy badań i leczenia chorób neurodegeneracyjnych, w tym choroby Alzheimera.

Ten film demonstruje protokół różnicowania ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych w progenitorach móżdżku. Polega ona na przeniesieniu kolonii komórek macierzystych na bardzo niską płytkę przyczepową w celu utworzenia ciał zarodkowych, promowaniu różnicowania za pomocą czynników wzrostu, a następnie przeniesieniu ciał zarodkowych na płytkę pokrytą matrycą w celu adhezji. Kolejne kroki obejmują indukcję migracji komórek i dodanie pożywki do dojrzewania, aby kierować...

Ten film pokazuje proces różnicowania ciał embrionalnych (EB) w agregaty neuroepiteliczne i ich późniejszego podziału na komórki neuronalne i glejowe. Metoda ta pozwala na efektywne generowanie komórek neuronalnych i glejowych in vitro, które służą jako systemy testowe do badania toksyczności, a także oceny różnych szlaków zaangażowanych w neurotoksyczność.

Ten film pokazuje proces izolowania i hodowli glejowych komórek progenitorowych z rozlanego wewnętrznego glejaka mostu, czyli tkanki pnia mózgu dotkniętej DIPG. Komórki glejowe wyizolowane z tkanki nowotworowej poprzez trawienie enzymatyczne są hodowane w pożywce neurobazalnej, co sprzyja ich wzrostowi i rozwojowi swobodnie unoszących się neurosfer.

Ten film prezentuje metodę różnicowania nerwowych komórek progenitorowych rdzenia kręgowego (NPC) w neurony ruchowe. Szczegółowo opisuje proces hodowli NPC na powlekanej płytce hodowlanej przy użyciu specjalistycznych pożywek wzbogaconych specyficznymi inhibitorami, których celem jest ułatwienie różnicowania NPC w dojrzałe neurony ruchowe.

Ten film pokazuje transformację ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC) w sferyczne organoidy mózgu. Stosując specyficzne inhibitory, hPSC są kierowane do różnicowania się w kierunku linii neuronalnej, tworząc kolonie neuroektodermalne. Następnie wprowadzane są specjalne czynniki wzrostu, które sprzyjają samoorganizacji i proliferacji kolonii, co ostatecznie prowadzi do powstania sferycznych organoidów mózgowych.

Film pokazuje różnicowanie nerwowych komórek macierzystych (NSC) za pomocą urządzenia mikroprzepływowego składającego się z przedziału somatycznego i aksonalnego oddzielonych barierą mikrorowkową. NSC są wprowadzane do kompartmentu somatycznego i mogą przylegać. NSC różnicują się w neurony wewnątrz przedziału somatycznego i rozciągają aksony przez barierę mikrorowkową do przedziału aksonalnego.

Ten film demonstruje metodę izolowania komórek macierzystych z móżdżku myszy po urodzeniu i różnicowania ich w komórki nerwowe. Komórki macierzyste z izolowanej zawiesiny komórkowej są oczyszczane za pomocą kulek magnetycznych pokrytych przeciwciałami i są hodowane w celu utworzenia neurosfer. Neurosfery są następnie utrzymywane w pożywce różnicującej w celu wytworzenia komórek nerwowych.

Ten film demonstruje izolację komórek satelitarnych z tkanek mięśni rozgałęzionych głowy szczura poprzez rozwarstwienie tkanek, trawienie enzymatyczne, a następnie mechaniczne i odśrodkowe oczyszczanie. Komórki są następnie wysiewane w studzienkach pokrytych macierzą zewnątrzkomórkową w celu różnicowania w mioblasty, a ostatecznie w miotubki i dojrzałe włókna mięśniowe.

Ten film demonstruje prostą technikę neurogenezy wywołanej kwasem retinowym w komórkach raka embrionalnego myszy P19. Kwas retinowy aktywuje czynniki transkrypcyjne i wyzwala ekspresję genów w celu różnicowania neuronów.

Film demonstruje metodę indukowania różnicowania komórek macierzystych w progenitory nerwowe za pomocą kwasu retinowego i metody hodowli wiszącej kropli.

Film demonstruje protokół różnicowania komórek prekursorowych oligodendrocytów (OPC) na oligodendrocyty i indukowania mielinizacji w kokulturze z neuronami zwoju korzenia grzbietowego (DRG). OPC są transdukowane za pomocą wektorów lentiwirusowych kodujących białko sygnałowe, które reguluje mielinizację. Transdukowane OPC są hodowane wspólnie z neuronami DRG w celu oceny różnicowania w oligodendrocyty i mielinizacji indukowanej białkiem sygnałowym.

Ten film demonstruje produkcję pożywki kondycjonowanej oligodendrocytami (OCM) z komórek linii oligodendrocytów poprzez ich naprężenie w celu zwiększenia ich molekularnego uwalniania do pożywki. To podłoże, które jest bogate w czynniki wzrostu, cytokiny i inne bioaktywne cząsteczki, można dodać do kultur neuronów, aby uzyskać wgląd w wpływ czynników wydzielanych przez oligodendrocyty na fizjologię i łączność neuronów.

Ten film ilustruje technikę izolowania fałdów nerwowych czaszki od śródmózgowia zarodków piskląt. Przedstawiono szczegółowy proces rozwarstwiania fałdów nerwowych, ich rozmieszczenia i mocowania na szkiełkach nakrywkowych pokrytych fibronektyną, a następnie obserwację migracji komórek grzebienia nerwowego z fałdów nerwowych.

Ten film demonstruje technikę generowania organoidów mózgowych z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC). Przylegająca hodowla kolonii hESC jest traktowana enzymami w celu oderwania i rozbicia ich na klastry. Klastry te tworzą trójwymiarowe kule w zawieszeniu, które są następnie indukowane do różnicowania się w organoidy, które naśladują korę mózgową z warstwami neuronów i komórek glejowych.

Film pokazuje izolację neuronów ruchowych okoruchowych, bloczkowych i rdzeniowych od transgenicznego zarodka myszy. Zarodek wykazuje ekspresję neuronów ruchowych znakowanych zielonym białkiem fluorescencyjnym (GFP) w celu łatwej wizualizacji i identyfikacji. Neurony ruchowe są chirurgicznie izolowane pod mikroskopem fluorescencyjnym i utrzymywane w pożywce hodowlanej.

Film przedstawia procedurę utrzymywania kontrolowanego środowiska w stacji roboczej do hodowli komórkowych dla wzrostu i utrzymania neuronalnych komórek macierzystych. Procedury te obejmują ustalenie warunków w komorze, protokoły czyszczenia i przygotowanie pożywki, dzięki czemu zachowano maksymalną sterylność i powtarzalność oraz zastąpiono tradycyjne metody.

Ten film demonstruje technikę oczyszczania komórek progenitorowych śródbłonka CD31+ (EPC) z hodowli za pomocą sortowania komórek aktywowanych magnetycznie (MACS). Zawiesinę komórkową traktuje się przeciwciałem sprzężonym z fluoroforem, które wiąże się z CD31 na EPC. Zakończenie znakowania CD31 + EPC polega na dodaniu kompleksu przeciwciał, który wiąże się z fluoroforami, oraz pokrytej polimerem nanocząstki magnetycznej, która wiąże się z kompleksem przeciwciał. Znakowane komórki są następnie...

Ten film pokazuje proces powstawania neurosfery i jej ekspansji z tkanki hipokampa. Nerwowe komórki macierzyste i progenitorowe z postnatalnej tkanki zakrętu zębatego myszy proliferują i tworzą pierwotne neurosfery, które są następnie ponownie zasiewane, tworząc neurosfery wtórne.

Ten film demonstruje protokół indukowania różnicowania indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych w komórki śródbłonka mózgu.

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli fluorescencyjnie znakowanych komórek macierzystych pochodzących z grzebienia nerwowego (ADSC) z mysiej tkanki tłuszczowej łuku okołoaortalnego. Po wyizolowaniu NCADSC są wykrywane, sortowane za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją, a następnie hodowane na płytce, co sprzyja proliferacji komórek.

Ten film demonstruje metodę izolowania komórek glejowych jelit od błony podśluzowej i blaszki właściwej jelita myszy. Przedstawiono w nim etapy ekstrakcji tkanki podśluzówkowej i blaszki właściwej, izolowania z nich komórek glejowych jelitowych i hodowli komórek na powlekanej płytce studzienkowej w celu ustanowienia hodowli komórek glejowych jelitowych.

Ten film pokazuje izolację naczyń włosowatych od świeżych mózgów świń. Proces ten polega na usunięciu opon mózgowych, wyizolowaniu istoty szarej z tkanki mózgowej, homogenizacji i filtrowaniu istoty szarej w celu wyizolowania naczyń włosowatych, a na koniec zastosowaniu trawienia enzymatycznego w celu dalszego oczyszczenia naczyń włosowatych.

Ten film pokazuje proces izolowania mikronaczyń mózgowych od szczurów poddanych eutanazji. Obejmuje preparację mózgu, oczyszczanie tkanki i trawienie mechaniczne, a następnie wielokrotne wirowanie w celu wyizolowania czystej frakcji mikronaczyń.

Ten film opisuje metodę przygotowania szklanych szkiełek nakrywkowych pokrytych poliornityną i lamininą w celu zwiększenia adhezji i wzrostu nerwowych komórek macierzystych. Technika ta obejmuje sekwencyjne inkubacje i płukanie, ułatwiając tworzenie macierzy podporowej, która wspomaga wzrost i różnicowanie komórek neuronalnych, naśladując struktury znajdujące się w neuronach.

Ten eksperyment szczegółowo opisuje metodę generowania połączeń nerwowo-mięśniowych z indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych komórek macierzystych. Wykorzystuje etapowy proces różnicowania w celu promowania rozwoju neuronów mięśniowych i ruchowych oraz tworzenia synaps, dając funkcjonalne połączenia nerwowo-mięśniowe.

Ten film demonstruje metodę zwiększania różnicowania komórek macierzystych za pomocą przejściowego leczenia DMSO, które zatrzymuje komórki w fazie G1. Po leczeniu dodaje się pożywkę różnicującą ektodermalną z inhibitorami BMP i TGF-β w celu pobudzenia tworzenia prekursorów nerwowych.

Ten film demonstruje metodę izolowania perycytów mózgowych od mózgu myszy. Wyizolowane komórki są hodowane w pożywkach specyficznych dla perycytów w celu promowania proliferacji perycytów.

Ten film prezentuje wykorzystanie techniki bocznego miękkiego oświetlenia światłem w celu poprawy wizualizacji gołym okiem ciał embrionalnych, ułatwiając tym samym ich manipulację i transfer podczas hodowli organoidów mózgowych. Wyjaśnia konfigurację miękkiego oświetlenia światłem, metody zmian w pożywce i transferu ciała zarodka, a także procedurę indukowania różnicowania neuronalnego w ciałach embrionalnych w celu rozwoju organoidów mózgowych.

Film opisuje przygotowanie mikrowzoru podłoża do badania specyfikacji fenotypu komórki. Powlekany białkiem stempel PDMS z mikrowzorem służy do przenoszenia mikrowzoru na szkiełku nakrywkowym pokrytym PDMS. Szkiełko nakrywkowe jest następnie traktowane środkiem powierzchniowo czynnym, aby utrudnić przyleganie komórek do niepożądanych powierzchni. Komórki są następnie dodawane, aby osiąść we wzorze i inkubowane w celu dalszej analizy.

Ten film demonstruje metodę izolowania przewodów śródbłonkowych od miąższu mózgu myszy. Dzięki połączeniu trawienia enzymatycznego i dysocjacji mechanicznej, proces ten daje nienaruszoną rurkę z komórkami śródbłonka.

Ten film demonstruje technikę hodowli krążków międzykręgowych bydła w bioreaktorach w celu opracowania trójwymiarowego modelu hodowli narządów. Do krążków międzykręgowych stosuje się określone pożywki pozbawione składników odżywczych i zwyrodnieniowe warunki ciśnienia, naśladując prozapalne i zwyrodnieniowe mikrośrodowisko obserwowane we wczesnym stadium choroby krążka międzykręgowego. Wysokość tarczy jest mierzona po zabiegu w celu przeanalizowania skutków niedoboru składników odżywczych i...

Ten film pokazuje proces indukowania ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych do różnicowania się w neurony poprzez transfekcję ich zmodyfikowanymi lentiwirusami przenoszącymi gen neurogennego czynnika transkrypcyjnego pod kontrolą elementu reagującego na tetracyklinę, a następnie leczenie pochodną tetracykliny i pożywką do dojrzewania.

Ten film demonstruje technikę różnicowania embrionalnych komórek macierzystych w połączoną w sieć populację neuronów z funkcjonującymi synapsami. Przedstawiono w nim etapy związane z różnicowaniem embrionalnych komórek macierzystych w neurony, indukcją tworzenia sieci neuronalnej i wzbogacaniem kultury w neurony połączone w sieć.

Ten film demonstruje metodę izolowania komórek Schwanna od włókien nerwu kulszowego myszy.

Film demonstruje metodę izolowania nienaruszonych jąder z komórek glejowych i macierzystych w zakręcie zębatym hipokampa myszy (DG). Tkanka DG jest mechanicznie dysocjowana w zimnym buforze homogenizacyjnym w celu uwolnienia jąder. Szczątki tkanek i inne uwolnione organelle są odrzucane, a jądra są barwione barwnikiem DNA i przeciwciałem sprzężonym z fluoroforem specyficznym dla neuronalnego antygenu jądrowego (NeuN). Sortowanie jąder aktywowanych fluorescencją jest następnie stosowane do...

Ten film pokazuje przeprogramowanie losu komórek rozrodczych nicieni na neurony. Transgeniczne larwy nicienia Caenorhabditis elegans są poddawane interferencji RNA (RNAi) w celu powalenia określonego czynnika regulującego chromatynę, co sprawia, że komórki rozrodcze ich potomstwa są bardziej podatne na przeprogramowanie losu komórki. Szok cieplny jest stosowany do potomstwa, indukując komórki rozrodcze do ekspresji specyficznego dla neuronów czynnika transkrypcyjnego, który wyzwala ich...

Ten film pokazuje procedurę różnicowania ludzkich komórek pluripotencjalnych w komórki podobne do mikrogleju. Proces ten polega na formowaniu ciał embrionalnych, przenoszeniu ich do powlekanych studzienek i wykorzystywaniu określonych czynników wzrostu do kierowania różnicowaniem w prymitywne prekursory makrofagów, które ostatecznie różnicują się w komórki podobne do mikrogleju.

Ten film pokazuje hodowlę komórek glejowych Müllera (MG) wyizolowanych z siatkówki myszy. Siatkówki są dysocjowane w zawiesinę jednokomórkową za pomocą enzymów trawiennych. Komórki są następnie hodowane w pożywce z czynnikiem wzrostu, który sprzyja proliferacji komórek MG i śmiertelności komórek neuronalnych. Martwe komórki neuronalne są usuwane podczas pasażowania, a komórki MG są hodowane w celu dalszej analizy.

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli pierwotnych mieszanych komórek glejowych z tkanki rdzenia kręgowego dorosłej myszy. Protokół obejmuje enzymatyczne trawienie tkanki, a następnie usunięcie uszkodzonych błon komórkowych i resztek mieliny w celu uzyskania populacji pojedynczej komórki. Komórki są następnie hodowane w pożywkach zoptymalizowanych pod kątem wzrostu mieszanych komórek glejowych.

Ten film pokazuje różnicowanie się unieśmiertelnionych komórek progenitorowych im. multipotencjalnych komórek otycznych (iMOP) w komórki nabłonka czuciowego. Przedstawia etapy związane z hodowlą komórek iMOP, tworzeniem otosfer, indukowaniem różnicowania oraz wizualizacją składników komórkowych i markerów różnicowania za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej w celu potwierdzenia pomyślnego różnicowania komórek.

Wideo pokazuje różnicowanie się unieśmiertelnionych multipotencjalnych komórek progenitorowych (iMOPs) w spiralne neurony zwojowe (SGN) i immunofluorescencyjne potwierdzenie różnicowania. iMOPy są siane na szkiełkach nakrywkowych pokrytych substratem hodowlanym w pożywce różnicującej neurony w celu różnicowania w SGN. Zróżnicowane komórki są znakowane przeciwciałami specyficznymi dla markerów różnicowania neuronów i analizowane pod mikroskopem w celu potwierdzenia różnicowania.

Ten film demonstruje hodowlę ex vivo i obrazowanie wycinków okoruchowych z transgenicznych embrionów myszy. Zarodki są izolowane i osadzane w agarozie. Za pomocą wibratomu uzyskuje się plastry zawierające jądra okoruchowe i oczy. Plastry są utrzymywane w kulturze i obrazowane za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.

Ten film demonstruje wieloetapowy proces różnicowania ludzkich iPSC w mikronaczyniowe komórki śródbłonka mózgu. Powstałe w ten sposób zróżnicowane komórki ściśle naśladują komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu, charakteryzujące się ścisłymi połączeniami, co czyni je idealnymi do badań nad chorobami mózgu.

Ten film demonstruje metodę izolowania neuronów z przodomózgowia zarodka pisklęcia we wczesnym stadium i hodowli ich na matrycy mikroelektrod w celu utworzenia sieci neuronalnej.

Ten film pokazuje tworzenie chipa bariery krew-mózg przy użyciu komórek prekursorowych pochodzących z iPSC. Polega na wysiewaniu nerwowych komórek progenitorowych i komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu w oddzielnych kanałach z porowatą błoną. Poprzez przepływ pożywki różnicującej komórki śródbłonka tworzą ścisłe połączenia przypominające naczynia krwionośne, a komórki nerwowe dojrzewają do różnych typów komórek mózgowych, tworząc funkcjonalną barierę krew-mózg na chipie.

Film demonstruje przygotowanie wycinków przyśrodkowej kory wzgórzowo-przedniej zakrętu obręczy (MT-ACC) z mózgów myszy. Mózg myszy jest preparowany, wykonuje się nacięcia w celu odsłonięcia szlaku MT-ACC, a plasterki są generowane za pomocą wibratomu. Plastry MT-ACC są następnie utrzymywane w natlenionym sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym.

Ten film demonstruje technikę generowania linii reporterowej komórek macierzystych glejaka w celu identyfikacji różnicowania komórek macierzystych glejaka (GSC) w astroglej. Przedstawiono w nim etapy związane z wysiewaniem GSC, transdukcją ich za pomocą lentiwirusa kodującego GFP i określaniem ekspresji reporterowej GFP za pomocą cytometrii przepływowej.

Ten film pokazuje infekowanie pierwotnych neuronów śródmózgowia myszy wirusami związanymi z adenowirusami przenoszącymi fluorescencyjny wskaźnik wapnia. Fluorescencja wskaźnika potwierdza udaną infekcję i umożliwia monitorowanie infekcji neuronalnej w czasie rzeczywistym.

Wideo demonstruje metodę uzyskiwania wycinków kory nosowej i hipokampa z mózgu szczeniaka szczura i hodowania ich w błoniastych wkładkach na wielodołkowej płytce wypełnionej pożywką do dalszej analizy.

Ten film pokazuje sekcję i montaż eksplantatów mózgowych larw Drosophila. Ośrodkowy układ nerwowy (OUN), przyczepiony do krążków oka, jest ekstrahowany z larw, a następnie umieszczany na szkiełku podstawowym w roztworze soli fizjologicznej.

Film demonstruje technikę różnicowania ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (hiPSC) w neuronalne komórki progenitorowe (NPC). Początkowo hiPSC są hodowane na warstwie zasilającej mysich fibroblastów embrionalnych (MEF). Następnie komórki są odłączane i przenoszone na płytkę pokrytą biopolimerem, aby umożliwić MEF-y przyleganie do hiPSC i oddzielenie się od nich. Zawieszone hiPSC są następnie przenoszone na płytkę z dnem w kształcie litery V i odwirowywane w celu...

Film opisuje procedurę tworzenia ciał embrionalnych wolnych od surowicy (SFEB) z komórek progenitorowych neuronów przy użyciu różnych pożywek różnicujących bez surowicy lub DM. DM-2 ułatwia dojrzewanie i układanie neuronów do tworzenia SFEB, podczas gdy DM-3 jest używany do dalszego utrzymania wzrostu.

Ten film pokazuje proces hodowli komórek neuronalnych na schemacie wieloelektrodowym (MEA) w celu stworzenia modułowych sieci neuronowych. Metoda ta pozwala na badanie transmisji sygnału neuronalnego i interakcji komórkowych.

Ten film pokazuje proces różnicowania ludzkich iPSC w neurony ruchowe. Uzasadnienie obejmuje wykorzystanie iPSC, które zostały genetycznie zmodyfikowane w celu ekspresji określonych czynników transkrypcyjnych. Po wyhodowaniu w pożywce zawierającej doksycyklinę, antybiotyk ten wyzwala ekspresję czynników transkrypcyjnych, promując w ten sposób różnicowanie iPSC w komórki progenitorowe neuronów ruchowych. Ostatecznie przodkowie są hodowani w pożywce neuronalnej, aby uzyskać dojrzałe i...