Method Article

Generowanie połączeń nerwowo-mięśniowych za pomocą urządzenia mikroprzepływowego

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Stoklund Dittlau, K. et al., Generacja ludzkich jednostek motorycznych z funkcjonalnymi połączeniami nerwowo-mięśniowymi w urządzeniach mikroprzepływowych.J. Vis. Exp. (2021)

Film pokazuje tworzenie połączeń nerwowo-mięśniowych za pomocą urządzenia mikroprzepływowego. Neuronalne komórki prekursorowe i komórki progenitorowe mięśni są umieszczane w różnych studzienkach w urządzeniu i pozostawiane do dojrzewania odpowiednio w neuronach ruchowych i miotubach. Stworzenie gradientu objętościowego i chemicznego prowadzi do rozwoju aktywnych połączeń nerwowo-mięśniowych.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

Wszystkie odczynniki i sprzęt używany w tym protokole są wymienione w Tabeli Materiałów i powinny być używane w sterylnych warunkach. Media należy podgrzać do temperatury pokojowej (RT) przed użyciem, chyba że określono inaczej. Przegląd protokołu wspólnej hodowli znajduje się na rysunku 1.

1. Różnicowanie progenitorów neuronów ruchowych od indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC)

  1. Postępuj zgodnie z protokołem różnicowania n....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rysunek 1: Schematyczny przegląd protokołu jednostki silnikowej w urządzeniach mikroprzepływowych.Oś czasu różnicowania i przegląd kokultury od dnia 0 do dnia 28 zgodnie z osią czasu protokołu różnicowania neuronów ruchowych. Różnicowanie neuronów ruchowych od iPSC rozpoczyna się w dniu 0 i odbywa się zgodnie z wcześniejszymi opisami przez kolejne 10 dni. W 9 dniu urządzenie jest sterylizowane i pow.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
kwas octowyCHEM-Lab NVCL00.0116.1000Składnik powłoki. H226, H314. Zobacz materiał P280
Agrin (rekombinowane białko ludzkie)Systemy badawczo-rozwojowe6624-AG-050Dodatek medialny
kwas askorbinowySigmaNr kat. A4403Komponent Media
βIII-tubulina (Tubulina)Księga Abcamab7751Przeciwciała (1:500)
β-merkaptoetanolThermo Fisher Naukowy31350010Komponent Media. H317. P280.
B-27 bez witaminy AThermo Fisher NaukowyNumer katalogowy: 12587-010Komponent Media
BDNF (neurotroficzny czynnik pochodzenia mózgowego)Peprotech450-02BCzynnik wzrostu
bFGF (rekombinowany ludzki zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów)Peprotech100-18 mldCzynnik wzrostu
Kolagen ze skóry cielęcejThermo Fisher Naukowy17104019Składnik powłoki
CNTF (rzęskowy czynnik neurotroficzny)Peprotech450-13 mldCzynnik wzrostu
DAPT (JęzykTocris Bioscience2634Dodatek medialny
DMEM/F12Thermo Fisher Naukowy11330032Komponent Media
DmsoSigmaD2650-100MLKomponent kriokonserwacji. H315, H319, H335. P280.
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (DPBS) firmy DulbeccoThermo Fisher Naukowy14190250bez wapnia, bez magnezu
etanolFirma VWR20.821.296sterylizacja. H225. Zobacz materiał P280
Surowica bydlęca płoduThermo Fisher Naukowy10270106Komponent Media
Fluorescencyjny nośnik montażowyDako DakoZobacz materiał S3023Składnik immunocytochemiczny
GDNF (czynnik neurotroficzny pochodzący z linii komórek glejowych)Peprotech450-10 mldCzynnik wzrostu
Surowica koniaThermo Fisher Naukowy16050122Komponent Media
IMDM (Międzynarodowa Organizacja ZarządzaniaThermo Fisher Naukowy12440053Komponent Media
Insulina transferyna selenThermo Fisher Naukowy41400045Komponent Media
Wymiana surowicy nokautującejThermo Fisher NaukowyNumer katalogowy: 10828-028Komponent kriokonserwacji
Laminina z błony podstawnej mięsaka myszy Engelbreth-Holm-SwarmSigmaL2020-1MGSkładnik powłokowy i dodatek do podłoża
L-glutaminaThermo Fisher Naukowy25030-024Komponent Media
Suplement N-2Thermo Fisher NaukowyNumer katalogowy: 17502-048Komponent Media
Podłoże nerwowo-podstawoweThermo Fisher Naukowy21103049Składnik powłoki i mediów
Aminokwasy endogenneThermo Fisher Naukowy11140050Komponent Media
Parafilm MSigmaZobacz materiał P7793-1EAPrzechowywanie sprzętu
Penicylina/Streptomycyna (5000 U/ml)Thermo Fisher Naukowy15070063Komponent Media
szalka Petriego (3 cm)Nunc153066Średnica: 3 cm
szalka Petriego (10 cm)SarstedtNumer katalogowy: 833.902Średnica: 10 cm
Talerz (6-dołkowy)Cellstar Greiner bio-oneNumer katalogowy: 657160Płytka hodowlana
Poli-L-ornityna (PLO)SigmaZobacz materiał P3655-100MGSkładnik powłoki
Kwas retinowySigmaCzynnik R2625Dodatek medialny. H302, H315, H360FD, H410. P280.
Suplement komórkowy RevitaThermo Fisher NaukowyA2644501Roztwór inhibitora ROCK
Wygładzony agonistaTowar MilliporeNumer katalogowy: 566660Dodatek medialny
Pirogronian soduTechnologie życioweNumer katalogowy: 11360-070Komponent Media
Kolba T75SigmaCLS3276Płytka hodowlana
TrypLE ekspresowyThermo Fisher Naukowy12605010Rozwiązanie dysocjacji MAB
Chlorowodorek tubocyryryny pentahydratSigmaT2379-100GBloker receptora acetylocholiny. H301. P280.
Wstępnie zmontowane urządzenie mikroprzepływowe XonaChipsXona MicrofluidicsZobacz materiał XC150Długość mikrorowka: 150 μm
powiedział: angielski) TGL T powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

Related Articles