Izolacja i hodowla pierwotnych neuronów i gleju z pęcherza moczowego szczura

Streszczenie

Źródło: Wang, R. et al., Izolacja i hodowla pierwotnych neuronów i gleju z pęcherza moczowego dorosłego szczura. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje technikę generowania pierwotnej kultury neuronów i gleju z pęcherza moczowego szczura. Przedstawiono w nim etapy przygotowania tkanek, trawienia enzymatycznego w celu uzyskania pojedynczych komórek oraz hodowli komórek w pożywce specyficznej dla neuronów w celu ustanowienia pierwotnej kultury neuronalnej i glejowej.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie materiałów

1. Wysterylizuj wszystkie narzędzia i ddH₂O za pomocą autoklawu przed wykonaniem eksperymentu. Instrumenty obejmują między innymi nożyczki chirurgiczne, nożyczki okulistyczne, kleszcze, łyżki, rozdzielacze jądra, szklane naczynia (o średnicy 60–100 mm) i szklane zlewki.
2. Przygotować roztwór Krebsa (Tabela 1): Przed użyciem rozpuścić wszystkie chemikalia za pomocą ddH₂O. R....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
0,25% trypsyna	Gibico (powiat Gibico	15050065	Trawienie enzymatyczne
48-dołkowa płytka hodowlana	Corning	3548	Naczynie do powlekania
Antybiotyk/przeciwgrzybicze	Gibico (powiat Gibico	15240062	Pożywki hodowlane/pożywki płuczące
B-27	Gibico (powiat Gibico	17504044	Pożywki hodowlane
BSA Frakcja V	Gibico (powiat Gibico	332	Trawienie enzymatyczne
Inkubator CO2	Heraeus (Heraeus)	B16UU	Hodowla komórkowa
Kolagenaza typu II	Sigma	2593923	Trawienie enzymatyczne
DMEM/F-12	Gibico (powiat Gibico	11330032	Płucz media
Surowica bydlęca płodu	Gibico (powiat Gibico	10100147	Pożywki hodowlane/pożywki płuczące
Kleszcze	Urządzenia medyczne Jin Zhong w Szanghaju	Rok 1383	10 cm; Sterylna operacja
Szklane zlewki	Urządzenia medyczne Huan Qiu	Numer katalogowy 1101	50 ml; Sterylna operacja
Szkiełka nakrywkowe szklane	WHB Naukowy	WHB-48-CS	Naczynie do powlekania
Naczynia szklane	Urządzenia medyczne Huan Qiu	Numer katalogowy 1177	100 mm; Sterylna operacja
Ławka z przepływem laminarnym	Urządzenia medyczne Su Jie	CB 1400V	Sterylna operacja
Mysi GDNF	Peprotech	AF45044	Pożywki hodowlane
Neurobasel-A Podłoże	Gibico (powiat Gibico	10888022	Pożywki hodowlane
Nożyczki okulistyczne	Urządzenia medyczne Jin Zhong w Szanghaju	Zobacz materiał J21010	12,5 cm; Sterylna operacja
Pipety	Eppendorf	3120000240	100-1000 ul; Pipetowanie odczynników i próbek
Pipety	Eppendorf	3120000267	10-100 ul; Pipetowanie odczynników i próbek
Poli-D-lizyna	Sigma	Zobacz materiał P7280	Naczynie do powlekania
Wirówka z chłodzeniem	Instrument wentylatora Ping	TGL-16A	Trawienie enzymatyczne
Inkubator z wytrząsaniem	Instrumenty laboratoryjne Haimen Kylin-Bell	Zobacz materiał T8-1	Trawienie enzymatyczne
Łyżki rozdzielacz jądra	Urządzenia medyczne Jin Zhong w Szanghaju	YZR030	12 cm; Sterylna operacja
Nożyczki chirurgiczne	Urządzenia medyczne Jin Zhong w Szanghaju	Zobacz materiał J21130	16 cm; Sterylna operacja
Ręcznik chirurgiczny	Urządzenia medyczne Fu Kang	Numer katalogowy 5002	40 x 50 cm; Sterylna operacja
Laminina	Sigma	L2020	Naczynie do powlekania
L-glutamina	Gibico (powiat Gibico	25030081	Pożywki hodowlane

) SZT. ) ) ) Rozdział ) ) ) powiedział: powiedział: powiedział: )