Badanie regeneracji funkcjonalnych połączeń między wycinkami rdzenia kręgowego przy użyciu układu wieloelektrodowego

Streszczenie

Źródło: Heidemann, M., et al. Badanie funkcjonalnej regeneracji w organotypowych kokulturach rdzenia kręgowego hodowanych na układach wieloelektrodowych. J. Vis. Exp. (2015).

Film demonstruje funkcjonalną regenerację połączeń propriordzeniowych za pomocą testu opartego na matrycy wieloelektrodowej (MEA). Wycinki rdzenia kręgowego umieszcza się na MEA i pozostawia się do połączenia. Połączone plastry są mechanicznie oddzielane poprzez tworzenie zmiany, indukując neurony propriordzeniowe do wzrostu nad zmianą i łączenia plasterków. Aktywność elektryczna warstw jest oceniana w celu identyfikacji regeneracji połączeń funkcjonalnych.

Protokół

1. Przygotowanie MEA

Uwaga: MEA składają się ze szklanego podłoża, mikro-prefabrykowanych metalowych elektrod i warstwy izolacyjnej z polimeru SU-8. Na potrzeby tego badania zamówiono dostępne na rynku MEA z niestandardowym układem matrycy elektrod (ryc. 1 A&B). 68 elektrod jest ułożonych w prostokątną siatkę, która jest podzielona na dwie strefy za pomocą rowka o szerokości 300 μm, wolnego od elektrod, przewodów elektrycznych i izolacji. Każda elektroda ma wymiary 40 x 40 μm i są one oddalone od siebie o 200 μm od środka do środka. Cztery duże elektrody uziemiające są umieszczone wokół miejs....

Wyniki

Rysunek 1. Wyświetlanie i analiza spontanicznej aktywności.(a) Schemat MEA. Elektrody pokryte platyną są przedstawione w kolorze czarnym, przezroczyste druty w kolorze czerwonym, a rowek w środku MEA w kolorze żółtym. (B) Zbliżenie na układ elektrod znajdujących się w środku MEA. Schematy są uprzejmie udostępniane przez dr M. Heuschkela. (C) Obraz w.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Planarny układ wieloelektrodowy	Nauki biologiczne Qwane		wykonane na zamówienie według projektu naszego laboratorium
Pożywka			Na 100 ml
Dulbeccos zmodyfikował podłoże Eagle's	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy: 31966-021	Pojemność 80 ml
Surowica konia	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy 26050-070	Pojemność 10 ml
woda destylowana, sterylna			Pojemność 10 ml
Czynnik wzrostu nerwów-7S [5ng / mL]	Sigma-Aldrich	N0513	200 μl
			rozpuszczony w roztworze myjącym z 1% BSA
Roztwór do powlekania
Żel do macierzy zewnątrzkomórkowej	BD Nauki biologiczne	Numer katalogowy: 356230	Musi pozostać zimny przez cały czas; rozcieńczyć w stosunku 1:50 pożywką zoptymalizowaną dla neuronów prenatalnych i embrionalnych
Pożywka zoptymalizowana pod kątem neuronów prenatalnych i embrionalnych	Gibco (firma Gibco)	21103-049
Roztwór do mycia			[mg/L]
MgCl 2-6H2 O			100
MgSO 4-7H2 O			100
Kcl			400
KH2PO4			60
Zawartość NaCl			8000
Na2HPO4 bezwodny			Rozdział 48
D-glukoza (dekstroza)			1000
			Zgodnie z protokołem w sprawie http://www.lifetechnologies.com/ch/en/home/technical-resources/media-formulation.152.html
Roztwór zewnątrzkomórkowy (pH 7,4)			[mM]
Zawartość NaCl			Rozdział 145
Kcl			4
MgCl2			1
CaCl2			cyfra arabska
HEPESY			5
Na-pirogronian			cyfra arabska
glukoza			5
Osocze z kurczaka	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał P2366	Liofilizowane, rozpuścić w roztworze myjącym
Mikropipeta	Światowe instrumenty precyzyjne, Inc.	MF28G-5
Trombiny	Merck Millipore	1123740001	Działa drażniąco, uczulająco, rozpuszcza się w roztworze myjącym
Płaska rurka do hodowli tkankowej 10 (= rurka rolkowa)	Techno Plastic Products AG	Numer katalogowy: 91243