Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
1.1K wyświetleń
⸱
8 lipca 2025
Źródło: Baker, G. J., et al., Lowenstein, P. R. Izolacja i analiza cytometryczna przepływowa komórek jednojądrzastych krwi obwodowej naciekającej glejak. J. Vis. Exp. (2015)
Film pokazuje izolację komórek jednojądrzastych krwi obwodowej z mózgu myszy za pomocą mechanicznej dysocjacji i trawienia enzymatycznego. Następnie następuje wirowanie w gradiencie gęstości w celu zebrania komórek odpornościowych do dalszej analizy.
Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.
Przygotuj roztwór mieszania pożywek do wirowania gęstości, umieszczając 90 ml 10x PBS w 264 ml ultraczystej wody dejonizowanej (3.93x) w sterylnym plastikowym pojemniku. Miareczkować do pH 7,0-7,2 za pomocą HCl i sterylizować przez filtr 0,22 μm. Przechowywać w temperaturze 4 °C.
Przygotuj pożywkę wirową o gęstości 70%, łącząc 18 ml roztworu mieszanki pożywki do wirowania o gęstości z 30 ml pożywki wirowej o gęstości (szczegóły na liście materiałów) w probówce wirówkowej z polipropylenu o pojemności 50 ml.....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Rycina 1: Izolacja PBMC naciekających glejaka. (A) Strategia preparacji tkanki mózgowej myszy zawierającej implanty glejaka ortotopowego we wczesnym stadium. Górny panel przedstawia strzałkową bisekcję półkuli ipsilateralnej z dala od półkuli przeciwległej. Dolny panel pokazuje dwa dodatkowe nacięcia koronalne niezbędne do wyizolowania tkanki docelowej zawierającej implant nowotworo.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Modyfikacja Dulbecco Orła Medium | Gibco (firma Gibco) | 12430-054 | Zawiera 4,5 g/l D-glukozy, L-glutaminę, 25 mM HEPES i czerwień fenolową |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami firmy Dulbecco | Gibco (firma Gibco) | Nr kat. 14190-144 | Bez chlorku wapnia i chlorku magnezu |
| Surowica bydlęca płodu | Omega Scientific Inc. | FB-11 | |
| Penicylina Streptomycyna | Gibco (firma Gibco) | Rozdział 15140-122 | 10 000 j./ml penicyliny; 10 000 μg/ml streptomycyny |
| 0,6 ml stożkowe mikroprobówki polipropylenowe | Genesee Scientific | 22-272 | |
| Poliuretanowe wiadro na lód | Marka rybacka | Numer katalogowy: 02-591-45 | Pojemność: 0.152 uncji (4.5L) |
| Kolagenaza (typ I-S) | Sigma Aldrich | Zobacz materiał C1639 | Z Clostridium histolyticum |
| Deoksyrybonukleaza I | Worthington Biochemical Corp. | LS002007 | >2 000 jednostek Kunitz na mg suchej masy |
| Duże nożyczki preparacyjne | Ted Pella Inc. | 1316 | |
| Małe nożyczki preparacyjne | Certyfikat FST | Numer katalogowy: 14094-11 | |
| Kleszcze z końcem | Ted Pella Inc. | Numer katalogowy: 13250 | |
| Szklany młynek do tkanek o pojemności 7 ml | Kontes | KT885300-0007 | |
| Media do wirowania o gęstości Percoll | GE Opieka zdrowotna | Galaktyka GE17-0891-01 | |
| Pipety serologiczne 10 ml | Genesee Scientific | 12-104 | Jednorazowego użytku; sterylne |
| 70μm sterylne sitka do komórek z siatki nylonowej | Marka rybacka | 22363548 | |
| 15 ml polipropylenowe probówki wirówkowe | Genesee Scientific | 21-103 | Stożkowe dno |
| 50 ml polipropylenowe probówki wirówkowe | Genesee Scientific | 21-108 | Stożkowe dno |
| Rurki polipropylenowe FACS 12x75mm z okrągłym dnem | Marka rybacka | 14-956-1B |
