Artykuł metodologiczny

Różnicowanie indukowanych nerwowych komórek progenitorowych w astrocyty

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Derywacja dorosłych ludzkich fibroblastów i ich bezpośrednia konwersja w rozszerzalne neuronalne komórki progenitorowe. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film pokazuje proces różnicowania indukowanych komórek progenitorowych neuronów (iNPC) w neurony i astrocyty za pomocą specjalistycznych pożywek.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Zróżnicowanie iNPC

  1. Różnicowanie w kierunku linii neuronalnej
    1. Hodowle komórek na płytkach pokrytych lamininą, jak opisano powyżej. Zmień pożywkę na neuro-diff-media (DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300 ng/ml cAMP, 200 μM witamina C, 10 ng/ml BDNF, 10 ng/ml GDNF), gdy komórki są w około 70% zlewne. Zmieniaj multimedia co drugi dzień przez trzy tygodnie. Nie dziel komórek podczas różnicowania.
    2. Po trzech tygodniach komórki powinny wyrażać marker neuronalny TUJ1. Aby uzyskać bardziej dojrzałe neurony i podtypy neuronów, kontynuuj różnicowanie do 3 miesięcy.
  2. Różnicowanie w kierunku linii glejowej
    1. Zmień pożywkę na pożywkę do indukcji glejowej (1:1 DMEM/F-12: Neurobasal, 1x N2, 1x B27, 10 μM β-merkaptoetanolu, 100 μM aminokwasów endogennych, 1,5 mM L-glutamina, 5 μg/ml insuliny, 40 ng/ml T3), w tym 20 ng/ml EGF, aby indukować różnicowanie w komórki prekursorowe gleju. Usuń połowę pożywki i zastępuj ją nową co drugi dzień przez około 2 tygodnie. W tym okresie komórki należy podzielić 1:3 w obecności inhibitora 10 μM ROCK Y27632 po osiągnięciu 100% konfluencji.
    2. Po 2 tygodniach zróżnicuj komórki dalej w astrocyty: gdy komórki są prawie zlewne, zmień pożywkę na dostępną na rynku pożywkę astrocytów, zmieniaj pożywkę co drugi dzień. Po około 7 dniach komórki zaczynają wyrażać markery astrocytów (np. GFAP). Jeśli komórki uzyskają 100% zlewanie się podczas protokołu różnicowania, podziel je w stosunku 1:2 w obecności inhibitora 10 μM ROCK Y27632.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Pożywki astrocytówKomórka ScienCellRok 1801
B27Technologie życioweNumer katalogowy: 17504-044
BDNF powiedział:PeprotechRozdział 450-02
obózSigmaNr kat. A6885
DMEM (DMEM)Technologie życioweNumer katalogowy: 41966-029
DMEM F12Technologie życioweNumer katalogowy: 11320-033
DmsoRothNumer katalogowy: 4720
DPBS (Polskie Biuro ObsługiTechnologie życioweNumer katalogowy: 14190-094
EFG (EFGTechnologie życiowePHG0313
FcsBiochrom AGNumer katalogowy: 50115
Certyfikat GDNFPeprotech450-10
insulinaSeralab (Seralab)GEM-700-112-P
L-glutaminaTechnologie życiowe25030-024
LamininaSigmaL2020
N2Technologie życioweNumer katalogowy: 17502-048
NeuropodstawowyTechnologie życiowe21103-049
Aminokwasy endogenneTechnologie życioweNumer katalogowy: 11140-050
kwas askorbinowySigmaA4544
β-merkaptoetanolTechnologie życiowe21985023
Klienta ) szt. (wersja angielska)

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

R nicowanie astrocyt wpo ywka indukuj ca glejmarker neuronalny TuJ1inhibitor kinazy Rhoczynnik wzrostu nask rkapowlekanie macierz zewn trzkom rkprotok wymiany po ywkiproliferacja kom rekkom rki prekursorowe gleju

Powiązane artykuły