Hodowla i utrzymanie neuronów dopaminergicznych z embrionalnej tkanki mózgowej myszy

Streszczenie

Źródło: Weinert, M. et al., Izolacja, hodowla i długoterminowa konserwacja pierwotnych śródmózgowiowych neuronów dopaminergicznych z embrionalnych mózgów gryzoni. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film przedstawia metodę hodowli neuronów dopaminergicznych z embrionalnej tkanki mózgowej myszy. Proces ten obejmuje leczenie śródmózgowia enzymem proteolitycznym, odłączenie komórek i wyhodowanie ich na pokrytych polimerem szkiełkach nakrywkowych w pożywce bogatej w składniki odżywcze z antybiotykami dla ich wzrostu i długoterminowej żywotności.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Dysocjacja komórek brzusznego śródmózgowia

1. Przenieś kawałki brzusznej części śródmózgowia pod kaptur z przepływem laminarnym. Usuń zrównoważony roztwór soli Hanksa (HBSS) i dodaj 1 ml wstępnie podgrzanego (37 ºC) 0,05% kwasu trypsyno-etylenodiaminotetraoctowego (trypsyna-EDTA) do stożkowej rurki (objętość wystarczająca na 12 kawałków brzusznego śródmózgowia). Inkubować tkankę w temperaturze 37 °C przez 5-10 minut.
2. Usuń trypsynę-ED....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zmodyfikowana mieszanka składników odżywczych Eagle firmy Dulbecco F-12	Invitrogen	Numer katalogowy: 11330
Zrównoważony roztwór soli Hanksa (HBSS) (1X), płyn	Invitrogen	24020-117
Surowica bydlęca płodu, aktywowana termicznie (FBS)	Invitrogen	Numer katalogowy: 16140
Suplement N2 (100X), płynny	Invitrogen	Numer katalogowy: 17502-048
D-(+)-roztwór glukozy (45% (wt/vol) w wodzie	Sigma	G8769
Albumina surowicy bydlęcej BSA	Sigma	Ciągnik siodłowy A9430
Laminin z błony podstawnej mięsaka mysiego Engelbreth-HolmSwarm	Sigma	L2020
Penicylina/streptomycyna	Invitrogen	Numer katalogowy: 15070
Trypsyna (0,05% (wag./obj.)	Invitrogen	Numer katalogowy: 25300
Badana hodowla komórkowa albuminy surowicy bydlęcej (BSA)	Sigma	Nr kat. A9418
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)	Sigma	Zobacz materiał P3813
Poli-L-ornityna, roztwór 0,01%	Sigma	Zobacz materiał P4957
Roztwór błękitu trypanowego (0,4% (wag./ob.))	Biowhittaker powiedział:	17-942E

powiedział: