Neurogeneza indukowana kwasem retinowym przy użyciu mysich komórek raka embrionalnego

Streszczenie

Źródło: Leszczyński, P., et al., Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje prostą technikę neurogenezy wywołanej kwasem retinowym w komórkach raka embrionalnego myszy P19. Kwas retinowy aktywuje czynniki transkrypcyjne i wyzwala ekspresję genów w celu różnicowania neuronów.

Protokół

1. Generowanie agregatów

1. Dodać 5 μl RA (kwas retinowy) (1 mM bulionu rozpuszczonego w 99,8% etanolu, przechowywanego w temperaturze -20 °C) do 10 ml pożywki różnicującej i dobrze wymieszać (końcowe stężenie 0,5 μM RA).
   nuta: RZS jest wrażliwy na światło. Niskie stężenie etanolu nie wpływa na różnicowanie komórek.
2. Dodać 10 ml pożywki różnicującej (z RA) do niepoddanego działaniu substancji naczyń hodowlanych o średnicy 100 mm (przeznaczonej do hodowli zawiesinowych).
3. Wysiewaj 1 x 10⁶ komórek w naczyniu o średnicy 100 mm (powierzchnia naczynia 56,5 cm2).
4. Umieścić kolbę z komórk....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
DMEM wysoka glukoza (4,5 g/L) z L-glutaminą	Lonza	BE12-604Q
Etanol 99,8%	Chempur	CHEM*613964202
Płodowa surowica bydlęca (FBS)	Kwoty w europieniach	E5050-03
Penicylina/Streptomycyna 10K/10K	Lonza	DE17-602E
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS), 1x zatężona bez jonów wapnia i magnezu	Lonza	BE17-517Q
Kwas retinowy	Sigma- Aldrich	Czynnik chłodniczy R2625-50MG	Rozpuszczony w 99,8% etanolu; przechowywać w temperaturze -20 °C do 6 miesięcy
Trypsyna 0,25% - EDTA w HBSS, bez jonów wapnia i magnezu, z czerwienią fenolową	Surowice biologiczne	LM-T1720/500
1 ml pipet serologicznych	Profilab	515.01
Pipety serologiczne 10 ml	Profilab	515,1
Czasza 100 mm dedykowana do hodowli zawiesiny	Corning	C351029
Probówki wirówkowe 15 ml	Sigma- Aldrich	CLS430791-500EA
Pipety serologiczne 5 ml	Profilab	515.05
Płytka 6-dołkowa	Corning	CLS3516
Kolby do hodowli komórkowych o powierzchni 25 cm kwadratowych	Sigma- Aldrich	CLS430639-200EA

powiedział: powiedział: szt. powiedział: KM powiedział: TGL