Izolowanie komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej myszy okołoortowej

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Qi, Y., et al. Izolacja, hodowla i indukcja adipogenna oryginalnych komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej grzbietu nerwowego z okołoortycznej tkanki tłuszczowej. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film demonstruje technikę izolowania i hodowli fluorescencyjnie znakowanych komórek macierzystych pochodzących z grzebienia nerwowego (ADSC) z mysiej tkanki tłuszczowej łuku okołoaortalnego. Po wyizolowaniu NCADSC są wykrywane, sortowane za pomocą sortowania komórek aktywowanego fluorescencją, a następnie hodowane na płytce, co sprzyja proliferacji komórek.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Izolacja frakcji zrębowej (SVF)

Zbierz tkankę tłuszczową łuku okołoaortalnego (PAAT) 5-6 myszy do jednej probówki mikrowirówki o pojemności 2 ml zawierającej 1 ml świeżo przygotowanej pożywki do trawienia i zmiel tkankę za pomocą nożyczek chirurgicznych w probówce Eppendorfa w temperaturze pokojowej (RT).

Przenieść mieszaninę do probówek o pojemności 50 ml zawierających 9 ml pożywki wytrawiającej. Homogenizować tkanki, pipetując w górę i w dół za pomocą pipety 1 ml 10x.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rycina 1: Adipogenne różnicowanie NCADSC wyizolowanych z PAAT. (A) Ogólny schemat bramkowania do charakteryzowania i sortowania populacji NCADSC (RFP). (B) Obrazy z mikroskopu fluorescencyjnego pokazują, że NCADSC przylegały i rozszerzały się po 96 godzinach wysiewu na 12-dołkowej płytce hodowlanej. (C–G) Reprezentatywne obrazy pokazujące, że czerwi.......