Izolacja komórek Schwanna z korzeni rdzeniowych myszy

Streszczenie

Źródło: He, Q., et al., & Ding, F. Oczyszczanie fibroblastów i komórek Schwanna z nerwów czuciowych i ruchowych in vitro. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film przedstawia izolację i hodowlę komórek Schwanna z korzeni rdzeniowych myszy. Wyizolowane komórki są następnie hodowane w określonych pożywkach. Komórki Schwanna są izolowane poprzez zróżnicowane trawienie i przyleganie. Następnie są przenoszone do szkiełek nakrywkowych pokrytych macierzą zewnątrzkomórkową w celu przyczepienia i proliferacji.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Izolacja i hodowla fibroblastów nerwów ruchowych i czuciowych oraz SC (komórki Schwanna)

1. Użyj siedmiodniowych szczurów Sprague-Dawley (SD) (n=4) z Centrum Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Nantong w Chinach. Umieść szczury w zbiorniku zawierającym 5% izofluranu na 2-3 minuty, pozwól zwierzętom oddychać powoli i nie mieć samodzielnej aktywności, a następnie zdezynfekuj je przy użyciu 75% etanolu przed dekapitacją.
2. Za pomocą nożyczek przeciąć ty....

Wyniki

Rysunek 1: Schemat ideowy przedstawiający etapy separacji i oczyszczania fibroblastów sensorycznych i motorycznych oraz SC.

....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zrównoważony roztwór soli D-Hanka	Gibco (firma Gibco)	14170112
DMEM (DMEM)	Corning	10-013-CV
Mikroskop preparacyjny	Olympus	SZ2-ILST
Surowica płodowa bydlęca (FBS)	Gibco (firma Gibco)	10099-141C
Forskolina	Sigma	F6886-10MG
0,25% (m/v) trypsyna	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy 25200-072
Potrawy kulturowe
Probówki wirówkowe
Szkiełka nakrywkowe
Poli-L-lizyna
Inkubator CO2