Izolacja wielu typów komórek z mózgu myszy przez homogenizację mechaniczną

Abstract

Źródło: Molina Estevez, F. J., et al. Jednoczesna charakterystyka cytometryczna przepływu wielu typów komórek pobranych z mózgu myszy / rdzenia kręgowego za pomocą różnych metod homogenizacji. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film pokazuje izolację wielu typów komórek z tkanki mózgowej myszy. Tkanka jest najpierw mechanicznie ścinana za pomocą młynka do tkanek w roztworze soli, aby utrzymać równowagę osmotyczną. Homogenat tkankowy jest następnie poddawany wirowaniu w gradiencie gęstości w celu usunięcia resztek komórkowych. Komórki są następnie ponownie zawieszane w roztworze w celu dalszej analizy.

Protocol

Zastrzeżenie: Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Mechaniczna homogenizacja mózgu i rdzenia kręgowego

UWAGA: Objętości opisane w tej sekcji są wystarczające do homogenizacji połowy mózgu lub rdzenia kręgowego.

1. Wstępnie schłodzić szklaną zaprawę młynka do tkanek Dounce (tabela materiałów) ustawionego na lodzie.
2. Dodaj 3 ml wstępnie schłodzonego 1x zbilansowanego roztworu soli Hanka (HBSS) do moździerza.
3. Przenieś tkankę (mózg lub rdzeń kręgow....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
10X HBSS (bez wapnia, chlorku magnezu i siarczanu magnezu)	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy: 14185-052
Sitko do komórek 70 mm	Corning	431751
Rurki stożkowe (15 ml)	Preparat CellTreat	229411
Probówki stożkowe (50 ml)	Preparat CellTreat	229422
Zestaw młynka do tkanek Dounce (zawiera moździerz oraz tłuczki A i B)	Sigma-Aldrich	D9063-1 ZESTAW
Percoll	GE Opieka zdrowotna	10266569	sprzedawany jako odczynnik niesterylny
Percoll	Sigma	65455529	sterylny odczynnik (do stosowania w zastosowaniach wymagających sterylności)
Percoll PLUS	Sigma	Przekaźnik GE17-5445-01	odczynnik zawierający bardzo mało śladowych ilości endotoksyny