Izolacja neuronów z Caenorhabditis elegans poprzez sortowanie komórek aktywowane fluorescencją

Streszczenie

Źródło: Niemcy, E. M., et al. Izolacja określonych populacji neuronów od glisty Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film pokazuje izolację fluorescencyjnie znakowanych neuronów od Caenorhabditis elegans. Zawiesinę komórkową uzyskuje się z transgenicznych robaków zaprojektowanych do ekspresji fluorescencyjnych, połączonych z białkiem transbłonowym transporterów pęcherzykowych w neuronach cholinergicznych. Znakowane fluorescencyjnie neurony są następnie izolowane za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją (FACS) i utrzymywane w hodowli.

Protokół

1. Przygotowanie i zbieranie starych robaków do izolacji komórek

1. Zbierz robaki i przygotuj do izolacji komórek.
   1. Zbierz robaki do stożkowej probówki o pojemności 15 ml. Umyć robaki z płytki 1,5 ml buforu M9 (1 mM MgSO₄, 85 mM NaCl, 42 mM Na₂HPO₄·7H₂O, 22 mM KH₂PO₄, pH 7,0) i wirować przez 5 minut przy 1,600 x g. Odrzucić supernatant i przemyć robaki 1 ml buforu M9. Powtórz wirowanie i umyj w sumie pięć razy, aby usunąć jak najwięcej zanieczyszczeń Escherichia coli.
      UWAGA: Dodanie antybiotyków (50 μg/ml), takich jak ampicy....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Płytka 6-dołkowa	Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 12-556-004
Agar, klasa biologii molekularnej	Firma VWR	Nr kat. A0930
CaCl2	Sigma	Zobacz materiał C5670
Contess Automatyczny licznik komórek	Invitrogen	Z359629
Naziemna telewizja	USBiological	Zobacz materiał D8070
FBS (Sieć Usługowa	Omega Naukowa	FB-02
HEPESY	Sigma	H3375
Kcl	Amresco (angielski)	O395
KH2PO4	USBiological	Zobacz materiał P5110
Chusteczki Kimwipes	Profesjonaliści Kimberly-Clark	7552
L-15 Średni Leibovitz	Gibco (firma Gibco)	21083027
MgCl2	Sigma	Zobacz materiał M8266
MgSO4	USBiological	Zobacz materiał M2090
Na2HPO4·7H2O	USBiological	Zobacz materiał S5199
Zawartość NaCl	Firma VWR	Zobacz materiał X190
NaOCl (wybielacz)	Clorox
NaOH	Amresco (angielski)	Numer telefonu O583
Penicylina-Streptomicen	Fisher Naukowy	15140122
Pepton Y	USBiological	Zobacz materiał P3306
Pronase E	Sigma	7433	mieszanina proteaz ze Streptomyces griseus
Sds	Amresco (angielski)	O227
Stereoskopowy mikroskop fluorescencyjny SMT1-FLQC	Badania Tritech
sacharoza	USBiological	Zobacz materiał S8010

cyfrowa powiedział: powiedział: Pokój powiedział: powiedział: Pokój powiedział: