Różnicowanie indukowanych przez człowieka pluripotencjalnych komórek macierzystych w komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu

Streszczenie

Źródło: Pong, S. et al., Wyprowadzanie, ekspansja, kriokonserwacja i charakterystyka komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film demonstruje wieloetapowy proces różnicowania ludzkich iPSC w mikronaczyniowe komórki śródbłonka mózgu. Powstałe w ten sposób zróżnicowane komórki ściśle naśladują komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu, charakteryzujące się ścisłymi połączeniami, co czyni je idealnymi do badań nad chorobami mózgu.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

UWAGA: Krótko mówiąc, fibroblasty zostały przeprogramowane na iPSC poprzez genetyczne przeprogramowanie oparte na mRNA. iPSC utrzymywano w pożywce z komórek macierzystych (SCM) (patrz lista materiałów) i przechowywano w gęstości ~1,2 x 10² komórek/ml z 1 ml SCM, 10 μM z inhibitorem kinazy białkowej związanej z rho (ROCKi) Y-27632 i 10% (v/v) siarczkiem dimetylu (DMSO), w kriokonserwowanych fiolkach w ciekłym azocie w temperaturze -160 °C. Wszystkie poniższe procedury są przeprowadzane w komorze bezpieczeńs....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Dokładności	Sigma Aldrich	A6964-100 ml
Suplement B27	Thermo Fisher Naukowy	17504044
Kolagen IV z ludzkiego łożyska	Sigma Aldrich	C5533-5mg
Corning 2 ml fiolka kriogeniczna z polipropylenu z gwintem wewnętrznym	Corning	Numer katalogowy: 8670
Płytki do hodowli komórkowych Corning Costar z płaskim dnem (6-dołkowe)	Corning	353046
DMEM/F12 (bez czerwieni fenolowej)	Thermo Fisher Naukowy	A1413202
Dmso	Sigma Aldrich	D2438-50 ml
DPBS (+/+)	Gibco/Thermo Fisher Scientific	Nr kat. 14040-117
Essential 6 Średni (Thermo Fisher)	Thermo Fisher Naukowy	A1516401
Fibronektyna	Sigma Aldrich	F2006-2mg
Geltrex Matryca membrany podstawnej o zredukowanym współczynniku wzrostu bez LDEV	Thermo Fisher Naukowy	A1413202
Roztwór soli Hanks' Balance z wapniem i magnezem	Thermo Fisher Naukowy	24020-117
Pożywka wolna od ludzkiej surowicy śródbłonka	Thermo Fisher Naukowy	11111044
Invitrogen Countess Automatyczny licznik komórek	Thermo Fisher Naukowy	N/a
Kwas retinowy	Sigma Aldrich	Czynnik chłodniczy R2625-100MG
Dichlorowodorek Y-27632 (inhibitor ROCK)	Tocris/Thermo Fisher Scientific	1254
Trypan Blue Stain (0,4%) do stosowania z automatycznym licznikiem komórek Countess	Thermo Fisher Naukowy	Zobacz materiał T10282

szt.