$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Implantacja elektrody VEP
- Znieczulić zwierzę dootrzewnowym wstrzyknięciem ketaminy (75 mg/kg) i medetomidyny (0,5 mg/kg).
nuta: Po indukcji znieczulenia należy obserwować odruchy odstawienia (próba szczypania, odruch rogówkowy i powiekowy itp.) oraz ich brak jako wskazanie do rozpoczęcia operacji. Stale monitoruj zwierzęta przez cały czas trwania operacji i podawaj dodatkowe leki znieczulające (10% początkowej dawki ketaminy na uzupełnienie), jeśli występują odruchy. W eksperymentach wykorzystuje się dorosłe szczury (>12 tygodni).
- Ogolić skórę w obszarze operacyjnym. Umieść zwierzę na podkładce rozgrzewającej (37 °C), aby utrzymać temperaturę ciała podczas zabiegu. Przygotuj skórę poprzez miejscowe stosowanie jodu powidonu. Zastosuj obłożenie chirurgiczne. Stosuj miejscowo maść okulistyczną, aby zapobiec wysuszeniu rogówki w znieczuleniu ogólnym. Utrzymuj aseptykę za pomocą sterylnych narzędzi.
- Wykonaj podłużne nacięcie skóry na linii środkowej skóry głowy. Oczyść tkankę łączną, aby uzyskać dobrą odsłonę czaszki.
- Ostrożnie wywierć małe otwory po zadziorach ręcznie za pomocą mikrowiertarki ręcznej na wysokości 7 mm za bregmą i 3 mm z boku do linii środkowej.
- Implant wkręca elektrody przez czaszkę do kory mózgowej (obszar 17), wnikając w korę na głębokość około 0,5 mm. Wszczepić referencyjną elektrodę śrubową na linii środkowej 3 mm rostral do bregma. Nałóż cement dentystyczny, aby otoczyć i przykręcić (nie zawsze jest to wymagane).
- Zszyj skórę głowy, nałóż maść z antybiotykiem na skórę i pozwól zwierzęciu dojść do siebie po znieczuleniu na podkładce rozgrzewającej.
Uwaga: Alternatywnie, elektrody mogą pozostać odsłonięte, aby nie trzeba było ponownie otwierać skóry przy każdym nagraniu. Natychmiast po zaprzestaniu operacji, ale przed rekonwalescencją anestezjologiczną, należy podać niesteroidowy lek przeciwzapalny (NLPZ) (jeśli nie został podany przed operacją) lub opioidowy lek przeciwbólowy. Stale monitoruj zwierzęta, aż w pełni wyzdrowieją po znieczuleniu i będą w stanie chodzić.
- Należy odczekać co najmniej 1 tydzień, aby zwierzęta doszły do siebie po operacji przed rejestracją VEP.
2. Nagrywanie VEP
- Znieczulić zwierzę i przygotować skórę jako 1,1 i 1,2.
Uwaga: Do zapisu elektrofizjologicznego można zastosować niższą dawkę środków znieczulających (ketamina 40 mg/kg i medetomidyna 0,25 mg/kg).
- Umieść szczura w ciemnym pomieszczeniu i pozwól mu przystosować się do ciemności przez 5 - 30 minut. W niektórych przypadkach szczury mogą być przystosowane do ciemności O/N dla skotopowych lub przystosowanych do światłoczułych zapisów VEP.
- Utrzymuj temperaturę ciała na poziomie 37 ± 0,5 °C za pomocą systemu homeotermicznych z sondą termometru doodbytniczego.
- Rozszerz źrenice za pomocą 1,0% kropli do oczu z tropikamidu. Otwórz skórę nad czaszką, aby uzyskać dostęp do wstępnie umieszczonych elektrod śrubowych in situ.
- Podłącz nad przeciwległą korą wzrokową stymulowanego oka i odniesienia do amplifier. Włóż elektrodę igłową do ogona jako masę. Zmierz i utrzymuj impedancję elektrody poniżej 5 kΩ.
- Umieść mini-stymulator Ganzfelda bezpośrednio na skórze wokół powiek, aby zapewnić doskonałą izolację oczu. Oświetlenie stymulatora należy wcześniej skalibrować za pomocą fotometru.
- Dostarczaj stymulację fototyczną poprzez błyski światła 100 razy z częstotliwością 1 Hz, z ustawieniami filtra pasmowoprzepustowego o niskim i wysokim poziomie odpowiednio 1 i 100 Hz. Częstotliwość próbkowania sygnału wynosi 5 kHz.
Uwaga: Próbki sygnałów należy pobierać co najmniej z częstotliwością około 250–300 Hz, aby zapewnić pobranie więcej niż dwóch próbek podczas każdego cyklu.
- Zszyj skórę z powrotem i trzymaj zwierzęta na podkładce rozgrzewającej, aby dojść do siebie po znieczuleniu. Zapis może być wielokrotnie nagrywany na poszczególnych zwierzętach w celu monitorowania zmian funkcjonalnych w danym okresie czasu.