Selektywna manipulacja oscylacjami theta w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Bender, F. et al., Optogenetyczne porywanie oscylacji theta hipokampa u zachowujących się myszy. J. Vis. Exp (2018)

Ten film demonstruje protokół modulacji oscylacji theta w genetycznie zmodyfikowanym modelu myszy z światłoczułymi kanałami jonowymi w neuronach przegrody przyśrodkowej GABA-ergiczne. Dostarczając impulsy świetlne do hipokampa, protokół ma na celu synchronizację aktywności neuronalnej i generowanie oscylacji theta, które są rejestrowane jako lokalne potencjały pola.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

PV-Cre użyto samców myszy w wieku 10-25 tygodni. Myszy trzymano w standardowych warunkach w pomieszczeniu dla zwierząt i utrzymywano w cyklu 12 światła/ciemności.

1. Przygotowanie układów z drutu wolframowego do nagrań LFP

1. Przyklej jedno włókno światłowodowe do układu drutów tak, aby końcówka światłowodu znajdowała się na poziomie najkrótszego drutu, a końcówka światłowodu znajdowała się w bliskiej odległości, ale nie dotykała drutów wolframowych. Utrzymuj kąt włókna tak mały, jak to możliwe, aby zapobiec uszkodzeniu tkanki podczas implantacji.

2. Stymulacja optogenetyczna i akwizycja danych elektrofizjologicznych

1. Sprawdź moc światła z krosowego. Oszacuj strumień świetlny z końcówki światłowodu po podłączeniu w zależności od szybkości transmisji wszczepionego włókna. Upewnij się, że strumień świetlny z końcówki światłowodu wynosi od 5 do 15 mW, aby umożliwić niezawodne porywanie.
2. Podłącz przedwzmacniacz czołowy do przewlekle wszczepionego złącza. Podłącz patchcord światłowodowy do przewlekle wszczepionego włókna hipokampa w celu przeprowadzenia eksperymentów ze stymulacją optogenetyczną. W eksperymentach ze stymulacją światłem kontrolnym światłowód jest podłączony do atrapy tulejki podłączonej do zestawu słuchawkowego.
3. Umieść mysz w komorze nagrywania.
4. Otwórz oprogramowanie, aby sterować generatorem bodźców w celu wygenerowania protokołu stymulacji.
5. Wybierz kanał, który steruje laserem DPSS 473 nm.
6. Otwórz oprogramowanie systemu nagrywania. Kliknij "ACQ", aby uzyskać i "REC", aby nagrać. Poczekaj przed rozpoczęciem stymulacji świetlnej, aby zarejestrować zachowanie linii bazowej (np. 2 minuty, aby uzyskać prędkość linii bazowej lub 30 minut, aby wyodrębnić pola miejsca linii bazowej).
7. Otwórz oprogramowanie, aby sterować generatorem bodźców. Kliknij "File > Open" i wybierz plik protokołu. Kliknij "Pobierz i Start", aby rozpocząć stymulację światłem.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Myszy PV-Cre	Laboratorium Jacksona	B6; 129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J
Laser DPSS 473 nm	Laserglow Technologies, Toronto, ON, Kanada	R471005FX	Seria LRS-0473
Laser DPSS 593 nm	Technologie Laserglow	R591005FX	Seria LRS-0594
MC_Stimulus II	Multichannel Systems, Reutlingen, Niemcy	Zobacz materiał STG 4004
Druty wolframowe	Kalifornijska firma zajmująca się cienkim drutem, Grover Beach, Kalifornia, Stany Zjednoczone	CFW0010954	40 μm, 99,95%
Scena czołowa	Neuralynx, Bozeman, Montana, Stany Zjednoczone	Zobacz materiał HS-8	Miniaturowe przedwzmacniacze o wzmocnieniu jedności w headstage
Led	Neuralynx (Neuralynx)	HS-LED-Czerwony-omni-10V
MATLAB (MATLAB)	Mathworks, Natick, MA, Stany Zjednoczone
MC_Stimulus oprogramowanie	Wielokanałowy, Systemy
Światłowód wielomodowy	ThorLabs, Dachau, Niemcy	FG105LCA	0,22 NA, Low-OH, rdzeń Ø105 μm, 400 - 2400 nm
Łącznik światłowodowy wielomodowy	Tholabs powiedział:	FCMM50-50A-FC	Łącznik 1x2 MM, współczynnik podziału 50:50, włókna GI 50 μm, FC/PC