$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Rejestracja słuchowej odpowiedzi pnia mózgu (ABR)
- Szczury Sprague Dawley (SD) (1-14-dniowe szczenięta i 2-miesięczne dorosłe osobniki, obu płci) należy znieczulić pojedynczym wstrzyknięciem 1,5% pentobarbitalu sodu (22 mg/kg dla młodych i 30 mg/kg dla dorosłych, dootrzewnowo (i.p.).
- Umieść znieczulone zwierzę w formie z pianki polietylenowej, aby unieruchomić ciało zwierzęcia. Umieść zwierzę na stole antywibracyjnym w pomieszczeniu tłumiącym dźwięk. Utrzymuj temperaturę ciała zwierzęcia na poziomie 37,5 °C za pomocą poduszki grzewczej.
- Przetrzyj obszar głowy 70% (vol/vol) etanolem. Za pomocą cienkich nożyczek wykonaj 1-2 mm nacięcie brzuszno-boczne do zewnętrznej małżowiny usznej, aby umieścić elektrodę odniesienia lub masę. Podskórna elektroda igłowa (elektroda rejestrująca) znajduje się nad wierzchołkiem czaszki (ryc. 1A).
- Korzystając z generatora funkcyjnego, generuj skalibrowane impulsy tonów (narastanie/opadanie 1 ms, plateau 3 ms) o różnych częstotliwościach (2, 4, 8, 16, 24 i 32 kHz) i natężeniach (zmniejszone z 85 do 10 dB SPL w kroku 5 dB). Zmieniaj częstotliwość i amplitudę ręcznie lub za pomocą komputera. Dostarczaj bodźce dźwiękowe przez głośnik elektrostatyczny umieszczony w odległości 10 cm w kierunku głowy zwierzęcia.
- Filtruj (100-1,000 Hz), wzmacniaj i uśredniaj (256 razy) potencjał generowanego dźwięku za pomocą wielofunkcyjnego procesora, aby uzyskać ABR. Ślady ABR są monitorowane online i przechowywane do analizy w trybie offline. Wykonanie nagrania ABR z jednego zwierzęcia zajmuje około 40 minut.
nuta: Zwykle można zidentyfikować od trzech do siedmiu szczytów (od fali I do fali VII) z opóźnieniami mniejszymi niż 15 ms (rysunek 1B). Próg ABR definiuje się jako minimalny poziom dźwięku, przy którym można wykryć falę I i II.
- Poddaj się eutanazji, zanim zwierzęta obudzą się ze znieczulenia (z dootrzewnowym wstrzyknięciem 0,3 ml 1,5% pentobarbitalu sodu).
