Iniekcja doplastycznej w głąb ciała szklistego w celu ustanowienia modelu chorób oczu

Podsumowanie

Iniekcja doszklistkowa jest powszechnie stosowaną techniką w badaniach nad naukami o widzeniu w kontekście chorób oczu lub jako metoda bezpośredniego zastosowania miejscowego leczenia. W tym filmie zaprezentowano protokół iniekcji doszklistkowej z użyciem strzykawki o pojemności 1ml z szklaną pipetą. Przedstawiono praktyczne wskazówki dotyczące unikania masywnych krwawień oraz uszkodzeń soczewki.

Streszczenie

Iniekcja domacicza jest powszechnie stosowaną techniką w badaniach nad naukami o wzroku. Może być wykorzystywana do tworzenia modeli zwierzęcych chorób oczu lub jako bezpośrednia aplikacja miejscowej terapii. W niniejszym filmie przedstawiono sposób wykorzystania prostych i niedrogich narzędzi do przeprowadzenia procedury iniekcji domaczycznej. Zastosowano strzykawkę o pojemności 1 ml zamiast strzykawki Hamiltona. Przedstawiono praktyczne wskazówki dotyczące przygotowania odpowiednich igieł do iniekcji z pipet szklanych o idealnych końcówkach oraz sposobu szczelnego i łatwego połączenia igły strzykawki z pipetą szklaną.

Aby prawidłowo przeprowadzić zastrzyk domacicowy, należy przestrzegać trzech aspektów: 1) miejsce wstrzyknięcia nie powinno naruszać struktury siatkówki; 2) należy unikać krwawienia, aby zmniejszyć ryzyko infekcji; 3) soczewka nie powinna zostać dotknięta, aby uniknąć zaćmy pourazowej. Krótko mówiąc, najważniejszym punktem jest zminimalizowanie naruszenia prawidłowej struktury oka. Aby uniknąć uszkodzenia siatkówki, wybrano górny nosowy region oka szczura. Ponadto punkt nakłucia igłą znajdował się na poziomie płaszczyzny równoległej, około 1,5 mm od regionu limbalnego oka szczura. Przed wstrzyknięciem, poprzez otwór nakłucia, delikatnie usuwa się niewielką ilość ciała szklistego, aby obniżyć ciśnienie wewnątrzgałkowe. Kąt wstrzyknięcia wynoszący 45° zmniejsza prawdopodobieństwo wystąpienia zaćmy pourazowej w oku szczura, co pozwala uniknąć związanych z nią powikłań oraz wpływu czynników soczewkowych. Podczas tego zabiegu nie dochodzi do przecięcia spojówki ani mięśni oka, ani do krwawienia. Dzięki szybkości i minimalnemu zakresowi urazu, udany zastrzyk domacicowy można wykonać w ciągu kilku minut.

Zestaw do iniekcji opisany w tym konkretnym protokole jest przeznaczony do iniekcji do ciała szklistego. Przedstawione tutaj metody i materiały mogą być jednak wykorzystane również w innych procedurach podawania leków do mózgu, rdzenia kręgowego lub innych narządów u małych ssaków.

Protokół

1. Przygotować szklane pipety za pomocą wyciągacza do pipet, podłączyć je do strzykawki 1 ml i uszczelnić połączenie parafilmem. Nabrać 2 µl roztworu do końcówki pipety i przygotować do wstrzyknięcia.
2. Zanestezjować szczura poprzez podanie doszprysowe ketaminy (80 mg/kg) i ksylazyny (8 mg/kg) (stosunek objętości 2:1).
3. Przed wstrzyknięciem do ciała szklistego nanieść jedną kroplę 0,5% alkainy do oczu szczura jako znieczulenie miejscowe.
4. Ustawić szczura i odsłonić górny obszar nosowy oka.
5. Używając igły o rozmiarze 30 G, nakłuć górną część twardówki od strony nosowej na poziomie pars plana. Należy unikać dotykania mięśni ocznych i naczyń krwionośnych.
6. Wywrzeć lekki nacisk na gałkę oczną, aby usunąć niewielką ilość ciała szklistego z tylnej komory przez otwór nakłucia.
7. Wprowadzić końcówkę szklanej pipety przez otwór nakłucia pod kątem 45° przez twardówkę do ciała szklistego. Wstrzyknąć 2 µl roztworu do tylnej komory i pozostawić w tym miejscu przez kilka sekund, a następnie delikatnie wyciągnąć igłę. Należy unikać dotykania soczewki i naczyń wewnątrzgałkowych.
8. Po wstrzyknięciu do ciała szklistego nanieść na oko szczura maść okulistyczną Tobrex w celu zapobiegania infekcji.

Dyskusja

Prawidłowe wstrzyknięcie domaciczyście jest przydatne zarówno przy tworzeniu modeli zwierzęcych, jak i w bezpośrednim leczeniu wewnątrzgałkowym. Po pierwsze, miejsce wstrzyknięcia nie powinno naruszać struktury siatkówki. Po drugie, należy unikać krwawienia, aby zmniejszyć ryzyko infekcji. Po trzecie, soczewka nie powinna zostać dotknięta, aby uniknąć traumatycznej zaćmy. Najważniejsze jest zminimalizowanie zakłócenia prawidłowej budowy oka.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Mikroskop operacyjny	Olympus Corporation	OME
Pipety szklane	World Precision Instruments, Inc.
Wytciągacz pipet	David Kopf Instruments
Strzykawki 1ml			jednorazowe
Igły 30G			jednorazowe
Ketamina	Aldasan		środek znieczulający
Ksylazyna	Aldasan		środek znieczulający
Alcaine	Alcon		0.5% chlorowodorek proparakainy
Tobrex	Alcon		maść, 3% tobramycyna