Method Article

Kwantyfikacja rozmieszczenia białka presynaptycznego w mózgu myszy za pomocą immunofluorescencji

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Wallrafen, R., et al. Quantifying the heterogeneous distribution of a synaptic protein in the mouse brain using immunofluorescence. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne wycinka mózgu myszy w celu ilościowego określenia rozkładu określonego białka presynaptycznego. Proces ten polega na blokowaniu miejsc niespecyficznych, zastosowaniu pierwszorzędowych przeciwciał dla białka docelowego i markera referencyjnego, a następnie wtórnym znakowaniu przeciwciał i przeciwbarwieniu jądrowym. Marker referencyjny zapewnia dokładną kwantyfikację, zapewniając spójną linię wyjściową, a dystrybucja białka presynaptycznego jest analizowana w regionach mózgu za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały sprawdzone i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Immunofluorescencja

  1. Przygotować roztwory zawierające bufor blokujący, bufor przeciwciał, bufor płuczący 1 i bufor płuczący 2 (patrz Tabela 1).
  2. Raz opłucz plastry buforem fosforanowym (PB), aby usunąć nadmiar związku o optymalnej temperaturze cięcia (OCT).
    1. Usuń roztwór plastikową pipetą bez zasysania plasterków mózgu. Dodać 250 μl świeżego PB za pomocą pipety 1000 μL.
      ostrożność: Plastry nie powinny wysychać, wi....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Probówki reakcyjne 1,5 mlEppendorf30120094
50 ml probówek reakcyjnychGreiner Bio-One227261
Multiwell 24 dołkiFisher NaukowyNumer katalogowy: 087721H
Pipeta plastikowa (jednorazowa)Sarstedt8 61 176
Pipeta 1000 mlRainin17014382
Pipeta 2 mlEppendorf3123000012
Geniusz wiru 3Międzynarodowa3340001
Szkiełka mikroskopowe MenzelFisher Naukowy10144633CF
StereoskopKsięga Leica
Zobacz materiał LSM800ZeissMikroskop konfokalny
PBS (10x)Roche11666789001
Tka tkankowaSakura SakuraNumer katalogowy: 4583Paź
Na2HPO4BioFroxxNumer katalogowy: 5155KG001
NaH2PO4Merck1,06,34,60,500
normalna kozia surowicaMerck MilliporeS26-100ML
normalna surowica osłaMerckS30-100ML
Tryton X-100Merck1,08,60,31,000
królik anty-MoverUkłady synaptyczneRRID: AB_10804285
Anty-synaptofizyna świnki morskiejUkłady synaptyczneRRID: AB_1210382
osioł anty-królik AF647Jackson ImmunoResearch (badania immunologiczne Jacksona)RRID: AB_2492288
kozioł anty-myszy AF488Jackson ImmunoResearch (badania immunologiczne Jacksona)RRID: AB_2337438
Mowiol4-88Calbiochem (Elektrownia Jądrowa)475904
Oprogramowanie ZEN2 blueZeissOprogramowanie do mikroskopii
FidżiObrazJOprogramowanie analityczne
Program Microsoft ExcelFirmy Microsoft
powiedział: powiedział: osób powiedział: analiza ryzyka (IKA) powiedział: powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Presynaptic ProteinImmunofluorescence StainingMouse BrainConfocal MicroscopyFluorescence IntensityPrimary AntibodiesSecondary AntibodiesNuclear CounterstainingBrain Slice PreparationImage Analysis Fiji

Related Articles