Neuropatologia

Aby wykryć atrofię mózgu, zacznij od szkiełek zawierających odparafinowane fragmenty mózgu z neurodegeneracyjnych modeli myszy w różnym wieku.

Aby uwidocznić te NP, weź zdeparafinowaną, nieruchomą sekcję ludzkiego mózgu.

Dodaj podwójnie destylowaną wodę, aby umyć sekcje.

Potraktuj tkankę tetratlenkiem osmu, aby ustabilizować struktury komórkowe, w tym lipofuscynę.

Homogenizuj tkankę, aby uwolnić białka do buforu. Inhibitory proteazy blokują aktywność proteazy, zapobiegając degradacji białek.

Dodaj bufor ładujący zawierający detergent, środek redukujący i barwnik śledzący.

Inkubuj z enzymem proteolitycznym w celu trawienia normalnych prionów, pozostawiając nienaruszone odporne agregaty.

Inkubować w roztworze nadtlenku wodoru, aby zahamować endogenne peroksydazy i zapobiec niespecyficznemu barwieniu.

Sekcje te zawierają splątki neurofibrylarne - nieprawidłowe agregaty białka tau znajdujące się w neuronach hipokampa.

Aby uwidocznić siarczan heparanu, zacznij od chorego ludzkiego wycinka tkanki hipokampa zawierającego blaszki amyloidowe.

Odwirować próbkę w celu osadzenia szczątków komórkowych i zebrania supernatantu.

Ten protokół opisuje ekstrakcję białek z komórek raka neuronów. Komórki są myte buforem i poddawane lizie poprzez rozerwanie enzymatyczne i mechaniczne. Wyekstrahowany supernatant bogaty w białko zbiera się po odwirowaniu.

Ten film demonstruje procedurę fluorescencyjnego barwienia neuronów korowych szczurów do mikroskopii. Jest ukierunkowany na F-aktynę i białka dendrytyczne w celu analizy integralności strukturalnej i obliczenia gęstości F-aktyny, co ma kluczowe znaczenie dla badania funkcji i zdrowia neuronów.

Ten film demonstruje protokół izolacji włókienek amyloidu z ekstraktu tkanki mózgowej myszy za pomocą wirowania gradientu gęstości i trawienia białek nieamyloidowych.

Ten film przedstawia generowanie modelu uszkodzenia neuronów przy użyciu reaktywnych form tlenu (ROS) w pierwotnych neuronach ziarnistych móżdżku myszy. Szczegółowo opisuje proces wywoływania stresu oksydacyjnego poprzez dodawanie wysokich stężeń nadtlenku wodoru. Narażenie na ROS powoduje pęknięcia nici DNA i niestabilność genomu. Dodatkowo utlenianie białek komórkowych upośledza ich funkcje, podczas gdy peroksydacja lipidów narusza integralność błony. Ta kaskada prowadzi do uwalniania...

Ten film demonstruje metodę oceny neurotoksycznych efektów nanocząsteczek za pomocą mikrogleju. Przedstawiono w nim etapy aktywacji mikrogleju za pomocą nanocząstek, filtrowania kondycjonowanych pożywek w celu wyizolowania cytokin prozapalnych pochodzących z mikrogleju oraz testowania toksyczności neuronów podwzgórza za pomocą kondycjonowanych pożywek.

Film pokazuje wywoływanie neurodegeneracji w nerwach segmentowych larw Drosophila poprzez uraz mechaniczny. Brzuszny naskórek znieczulonych larw jest ściskany za pomocą kleszczy, aby spowodować uszkodzenie nerwów segmentowych. Uszkodzone larwy są utrzymywane z pożywieniem, co pozwala na uszkodzenie powoduje zwyrodnienie neuronów ruchowych w nerwach, powodując zakłócenie ich połączeń nerwowo-mięśniowych (NMJ).

Ten film demonstruje procedurę tworzenia szczurzego modelu choroby Parkinsona poprzez wstrzyknięcie neurotoksyny 6-hydroksydopaminy (6-OHDA) do mózgu. Wlew neurotoksyny do przyśrodkowego pęczka przodomózgowia (MFB) jest specyficznie ukierunkowany na neurony dopaminergiczne odpowiedzialne za kontrolę motoryczną, prowadząc do ich zniszczenia i powielania objawów choroby Parkinsona.

W tym filmie pokazany jest krok po kroku protokół przekształcania ludzkich embrionalnych komórek macierzystych w organoidy nerwowe. Metoda polega na indukowaniu tworzenia rozety neuronalnej, a następnie kontrolowanej dojrzałości i końcowej hodowli na błonie hydrofobowej w celu uzyskania w pełni rozwiniętych organoidów nerwowych.

Ten film demonstruje różnicowanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) w neurony dopaminergiczne, aby dostarczyć modelu do badania choroby Parkinsona. HESC są hodowane w pożywce do indukcji neuronalnej na płytce mikrodołkowej w celu utworzenia neurosfer 3D. Są one następnie hodowane w pożywce do indukcji neuronalnej, aby promować różnicowanie w dopaminergiczne neurony progenitorowe. Końcowe dojrzewanie neuronów zachodzi we wstawce hodowlanej w warunkach granicy faz...

Ten film pokazuje ocenę in vitro zapadania się stożka wzrostu neuronów przez agregaty amyloid-β (Aβ). Traktowanie neuronów agregatami Aβ powoduje destabilizację cytoszkieletu, prowadzącą do zapadnięcia się stożków wzrostu na końcach aksonów. Leczone komórki porównuje się z komórkami kontrolnymi w celu oceny stopnia zapadania się stożka wzrostu.

Film demonstruje procedurę przygotowania ludzkich wycinków mózgu od pacjentów z chorobą Alzheimera do analizy depozycji peptydów beta-amyloidu (Aβ) za pomocą spektrometrii mas wspomaganej matrycą desorpcji/jonizacji laserowej (MALDI-IMS). Kroki obejmują przygotowanie szkiełek, leczenie tkanki w celu zwiększenia jonizacji oraz analizę przestrzennego rozkładu peptydów beta amyloidu.

Ten film demonstruje immunologiczne barwienie neuronów leczonych agregatami alfa-synukleiny (αS). Neurony są najpierw traktowane agregatami αS. Następnie są one utrwalane, przepuszczalne i traktowane roztworem blokującym. Dodaje się przeciwciała pierwszorzędowe, a następnie znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe i barwienie jądrowe. Próbka jest następnie montowana i obserwowana pod mikroskopem.

Ten film demonstruje procedurę wywoływania zwyrodnienia siatkówki u dorosłych ryb pręgowanych za pomocą uszkodzenia laserowego. Laser celuje w komórki fotoreceptorowe w siatkówce, wywołując śmierć komórki i proces zwyrodnieniowy. To uszkodzenie aktywuje komórki glejowe Müllera (MG), prowadząc do ich odróżnicowania w komórki progenitorowe komórek macierzystych, które pomagają w regeneracji siatkówki.

Ten film demonstruje procedurę wstrzykiwania monomerycznych peptydów amyloidowych do przodomózgowia dorosłego danio pręgowanego w celu wytworzenia toksyczności amyloidu, naśladując uszkodzenia neuronów obserwowane w chorobie Alzheimera.

Ten film demonstruje protokół pomiaru aktywacji receptora zapachowego w transfekowanych komórkach za pomocą cyklicznego biosensora adenozynomonofosforanu (cAMP) i detekcji luminescencji. Metoda ta jest stosowana do badania interakcji receptor-ligand i szlaków sygnałowych w neuronach węchowych.

Ten film demonstruje procedurę wstrzykiwania peptydów beta amyloidu, chlorku glinu i neurozapalnego czynnika wzrostu, które wspólnie pomagają w tworzeniu toksycznych blaszek amyloidowych w okolicy hipokampa. Powoduje to upośledzenie pamięci u szczura, charakterystyczne dla choroby Alzheimera.

Ten film demonstruje precyzyjną stereotaktyczną infuzję beta amyloidu do zakrętu zębatego w celu stworzenia mysiego modelu choroby Alzheimera. Dokładne określenie współrzędnych i kontrolowane dostarczanie białek beta amyloidu powoduje degradację neuronów, zakłócając przetwarzanie pamięci i przyczyniając się do rozwoju choroby Alzheimera.

Ten film pokazuje wstrzyknięcie włókienek alfa-synukleiny myszowi w celu wywołania zapalenia nerwów. Włókienka są wstrzykiwane dootrzewnowo transgenicznej myszy wykazującej ekspresję zmutowanych białek alfa-synukleiny. Po dotarciu do ośrodkowego układu nerwowego fibryle wnikają do neuronów i indukują agregację zmutowanych białek. Agregaty rozprzestrzeniają się na sąsiednie neurony, mikroglej i astrocyty. Rozpoznanie agregatów powoduje, że mikroglej indukuje zapalenie nerwów, uszkadzając neurony.

Ten film demonstruje procedurę obrazowania in vivo C. elegans wyrażającego białka podobne do prionów oznaczone białkiem czerwonej fluorescencji. Protokół polega na unieruchomieniu nicieni na podkładce agarozowej w celu poklatkowej mikroskopii konfokalnej, ujawniając agregację i transport białek w obrębie komórek i między nimi. Technika ta ma kluczowe znaczenie dla badania agregacji białek związanych z chorobami neurodegeneracyjnymi.

Ten film pokazuje proces wstrzykiwania wektora wirusowego do istoty czarnej szczura w celu modelowania choroby Parkinsona. Przedstawiono w nim etapy przygotowania szczura, mikrowstrzyknięcia wektora wirusowego do istoty czarnej oraz procedury odzyskiwania.

Ten film wyjaśnia proces izolowania i wzbogacania nierozpuszczalnych w detergentach agregatów białkowych z zamrożonej pośmiertnej ludzkiej tkanki mózgowej. Demonstruje kluczowe etapy, w tym homogenizację, obróbkę detergentami, sonikację i ultrawirowanie w celu oddzielenia i oczyszczenia nierozpuszczalnych agregatów. Ostatnim etapem jest solubilizacja agregatów w buforze mocznikowym w celu dalszej analizy.

Ten film demonstruje obrazowanie i kwantyfikację agregatów białkowych w genetycznie zmodyfikowanych mózgach Drosophila. Mózgi są naprawiane, myte i traktowane środkiem zapobiegającym blaknięciu przed zamontowaniem. Obrazy są rejestrowane za pomocą mikroskopu konfokalnego i oznaczane ilościowo w celu obserwacji transmisji zmutowanych agregatów białkowych.

Ten film demonstruje protokół badania kolokalizacji receptorów oreksyny i kannabinoidów w tkance mózgowej dorosłego danio pręgowanego z normalną i wywołaną dietą (DIO) za pomocą immunofluorescencji.

Ten film pokazuje proces ilościowego określania akumulacji alfa-synukleiny w embrionalnych mysich neuronach dopaminowych wstępnie potraktowanych wstępnie uformowanymi włókienkami alfa-synukleiny. Przedstawia etapy utrwalania, barwienia i ilościowego oznaczania neuronów dopaminowych zawierających agregaty alfa-synukleiny za pomocą immunofluorescencji.

Ten film pokazuje, jak mierzyć aktywność proteasomu w różnych subkomórkowych przedziałach bocznego ciała migdałowatego z mózgów szczurów kondycjonowanych strachem i kontrolnych za pomocą testu peptydów fluorogennych. Proteasom rozszczepia substrat peptydu fluorogenicznego, uwalniając cząsteczki fluorescencyjne, które są oznaczane ilościowo za pomocą czytnika płytek w celu oceny aktywności proteasomu we frakcjach białek jądrowych i synaptycznych. Zwiększona aktywność jądrowa sugeruje zmiany w...

Ten film pokazuje proces wywoływania dyskinez wywołanych lewodopą w modelu szczurzym z chorobą Parkinsona poprzez podawanie lewodopy wraz z inhibitorem konwersji dopaminy. Powtarzające się zastrzyki nadmiernie stymulują neurony mózgu, powodując dysfunkcję motoryczną.

Ten film pokazuje indukcję bólu neuropatycznego ustno-twarzowego w modelu szczurzym poprzez podwiązanie nerwu podoczodołowego. Powoduje to uszkodzenie nerwów i stan zapalny, powodując nieprawidłową sygnalizację bólu i naśladując przewlekłe stany bólowe, które można wykorzystać do badania testu bólu ustno-twarzowego.

Ten film pokazuje metodę wykrywania starzejących się neuronów w korowych odcinkach organoidów poprzez barwienie aktywności beta-galaktozydazy, która jest podwyższona w komórkach starczych. Enzym rozszczepia substrat w celu wytworzenia niebieskiego produktu, a następnie następuje obserwacja mikroskopowa barwionych neuronów.

Ten film przedstawia generowanie ogniskowego modelu myszy demielinizacji przy użyciu dwupunktowego wstrzyknięcia lizofosfatydylocholiny (LPC). Czaszka znieczulonej myszy jest odsłonięta. Określane są współrzędne iniekcji i wiercony jest otwór, aby umożliwić wstrzyknięcia LPC w docelowych miejscach. LPC indukuje ogniskową demielinizację neuronów poprzez stan zapalny, podczas gdy dwupunktowe wstrzyknięcie zapewnia jego trwałość.

Ten film pokazuje proces wizualizacji interneuronu wypełnionego biocytyną w sekcji hipokampa szczura, podkreślając jego tożsamość neurochemiczną dzięki zastosowaniu specyficznych przeciwciał i mikroskopii fluorescencyjnej.

Ten film przedstawia barwienie immunohistochemiczne białka S-100 w sekcjach biopsji ssącej odbytnicy. Skrawki pobrane z antygenu są blokowane i leczone pierwotnymi, a następnie drugorzędowymi przeciwciałami przeciwko S-100, markerowi choroby Hirschsprunga. Do docelowego komórki dodaje się substrat chromogenny. Próbki są odwadniane i montowane przed wizualizacją pod mikroskopem.

Ten film przedstawia metodę indukowania demielinizacji w neuronach rdzenia kręgowego myszy za pomocą wstrzyknięć lizolecytyny, a następnie remielinizacji poprzez migrację i różnicowanie komórek prekursorowych oligodendrocytów. Proces ten upośledza, a następnie stopniowo przywraca transmisję sygnału neuronalnego.

Ten film pokazuje proces transdukcji ludzkich komórek nerwowych za pomocą lentiwirusa kodującego zmutowane ludzkie białko tau oznaczone żółtym białkiem fluorescencyjnym (YFP) w celu zbadania agregacji białek. Przedstawia etapy od wniknięcia wirusa do ekspresji zmutowanego tau, których kulminacją jest tworzenie widocznych cytoplazmatycznych agregatów tau w neuronach.

Ten film pokazuje znakowanie komórek neuronalnych przeciwciałami dla mitochondrialnych kompleksów łańcucha oddechowego, białka związanego z mitochondrialnym DNA i mitochondrialnego białka błony zewnętrznej, a następnie cytometrii przepływowej w celu ilościowego określenia ich poziomów.

Ten film przedstawia procedurę pomiaru aktywności γ-sekretazy w genetycznie zmodyfikowanych komórkach ludzkich przy użyciu systemu indukowanego tetracykliną. Proces ten polega na indukowaniu ekspresji genu APP za pomocą tetracykliny, generowaniu peptydów β amyloidu i aktywacji produkcji lucyferazy. Następnie mierzy się bioluminescencję wynikającą z reakcji lucyferazy-substratu, odzwierciedlającą aktywność γ-sekretazy.

Protokół ten przedstawia zastosowanie immunohistochemii do identyfikacji regionów miejsca sinawyego w sekcjach mózgu myszy. Poprzez celowanie w β-hydroksylazę dopaminy za pomocą zielonych przeciwciał znakowanych fluoroforem, neurony wytwarzające noradrenalinę są wizualizowane pod mikroskopem jako zielona fluorescencja.

Film przedstawia proces używania sondy do mikrodializy do zbierania białek zewnątrzkomórkowych z płynu śródmiąższowego (ISF) mózgu myszy. Sonda do mikrodializy, wyposażona w półprzepuszczalną membranę o dużej masie cząsteczkowej, jest wprowadzana do mózgu znieczulonej myszy za pomocą wszczepionej kaniuli prowadzącej. Sonda, podłączona do pomp, pozwala fizjologicznemu buforowi na perfuzję tkanki mózgowej i zmieszanie się z ISF. Białka w ISF dyfundują przez półprzepuszczalną błonę i są zbierane...

Ten film pokazuje metodę wywoływania przewlekłego stresu u myszy poprzez wielokrotne unieruchomienie, prowadzące do uwalniania kortykosteronu i zmniejszonej aktywności receptora glutaminianu w neuronach, co skutkuje zachowaniem podobnym do depresji.

Ten film pokazuje procedurę przygotowania i leczenia półwycinków mózgu szczura neurotoksycznym peptydem w celu naśladowania neurodegeneracji. Protokół pozwala na analizę zdarzeń neurodegeneracyjnych poprzez bezpośrednie porównanie plastrów kontrolnych i leczonych w tej samej płaszczyźnie anatomicznej.

Ten film demonstruje wykorzystanie transfekowanych komórek zwojowych korzenia grzbietowego do badania uwalniania neuroprzekaźników poprzez stymulację ich agonistą receptora neuropeptydowego.

Ten film pokazuje immunohistochemiczne barwienie włókien cholinergicznych w jądrze podstawnym regionu Meynerta w sekcjach mózgu myszy. Skrawki są blokowane i leczone pierwotną przeciwko acetylotransferazie choliny, a następnie biotynylowanym przeciwciałom drugorzędowym. Dodaje się kompleksy awidyna-biotyna-peroksydaza, które wiążą się z przeciwciałami drugorzędowymi, a następnie z substratem chromogennym. Skrawki są następnie odwadniane i montowane przed wizualizacją pod mikroskopem.

Ten film pokazuje ocenę wychwytu dopaminy w synaptosomach pobranych z mózgów myszy. Przedstawiono w nim etapy przygotowania synaptosomów do wychwytu dopaminy za pośrednictwem transporterów dopaminy, traktowania ich różnymi stężeniami dopaminy znakowanej radioaktywnie, izolowania synaptosomów i pomiaru radioaktywności w celu ilościowego określenia wychwytu dopaminy.

Ten film pokazuje procedurę barwienia utrwalonych wycinków mózgu szczura zawierających interneurony wypełnione biocytyną. Protokół obejmuje inkubację z kompleksem awidyny-biotyny (ABC), barwienie za pomocą HRP i substratu chromogennego, konserwację struktur tetratlenkiem osmu i zatopienie tkanki w żywicy w celu obrazowania.

Ten film demonstruje wykrywanie syntezy RNA receptora serotoninowego za pomocą sond oligonukleotydowych w tkance mózgowej szczura dotkniętej zespołem serotoninowym. Protokół obejmuje wstępną obróbkę tkanek, hybrydyzację sondy i detekcję enzymatyczną w celu wizualizacji i ilościowego określenia ekspresji RNA receptora serotoninowego pod mikroskopem.

W tym filmie wycinek mózgu móżdżku myszy został wykorzystany do zbadania interakcji synaptycznych między włóknami równoległymi, włóknami pnącymi i komórkami Purkinjego, które są niezbędne do kontroli motorycznej. Stymulacja włókien pnących się indukowała długotrwałą depresję (LTD) w komórkach Purkinjego, osłabiając siłę synaps i powodując zmniejszoną odpowiedź na stymulację włókien równoległych.

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne transgenicznego mózgu Drosophila do obrazowania pojedynczych komórek glejowych. Mózg wykazuje ekspresję białek ukierunkowanych na błonę, połączonych z różnymi kombinacjami epitopów antygenowych pod kontrolą specyficznego dla gleju systemu rekombinazy. Wyizolowane i utrwalone mózgi są barwione pierwszorzędowymi przeciwciałami specyficznymi dla epitopów antygenowych, a następnie przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem.

Ten film przedstawia stereotaktyczną procedurę chirurgiczną mającą na celu ablację kory słuchowej u szczura. Kroki obejmują identyfikację anatomicznych punktów orientacyjnych u znieczulonego szczura zabezpieczonego w ramie stereotaktycznej, stworzenie okna na czaszce powyżej kory słuchowej, aspirację warstw korowych i zapewnienie opieki pooperacyjnej w celu oceny wpływu ablacji na przetwarzanie dźwięku.

W tym filmie opisujemy procedurę barwienia fluorescencyjnego przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej w celu zademonstrowania barwienia falloidyną komórek grzebienia nerwowego hodowanych na hydrożelach o różnej sztywności w celu wizualizacji i analizy organizacji cytoszkieletu.

Ten film pokazuje sieciowanie białek powierzchniowych neuronów za pomocą suberanu bis-sulfosuccinimidylu lub BS3. Izolowany i schłodzony mózg myszy jest poddawany sekcji koronalnej. Żądany region jest wyodrębniany z sekcji, mielony i traktowany BS3. BS3 sieciuje białka powierzchniowe, takie jak receptory GABA, pozostawiając białka wewnętrzne niezmienione. Reakcja jest wygaszana glicyną przed przetworzeniem próbek do dalszej analizy.

Film przedstawia technikę pomiaru wychwytu glukozy w larwalnych neuronach ruchowych {{}}Drosophila za pomocą wewnątrzkomórkowego czujnika glukozy opartego na rezonansie fluorescencyjnym (FRET). Po wypreparowaniu larw w celu odsłonięcia brzusznego rdzenia nerwowego, neurony ruchowe są wizualizowane za pomocą fluorescencji emitowanej przez fluorofor dawcy czujnika. Po stymulacji glukozą, FRET między fluoroforami donorowymi i akceptorowymi czujnika wyzwala emisję fluorescencji z akceptora,...

Ten film przedstawia procedurę barwienia immunologicznego utrwalonego wycinka tkanki mózgowej myszy za pomocą fluorescencyjnie znakowanych astrocytów przy użyciu przeciwciał pierwszorzędowych i wtórnych oraz przechwytywania obrazów barwionych astrocytów za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Ten film pokazuje, jak wyizolować komórki Purkinjego z ludzkiej pośmiertnej tkanki móżdżku za pomocą mikrodysekcji laserowej.

Ten film przedstawia szczegółowy protokół krok po kroku dotyczący przygotowania zamrożonych skrawków tkanki mózgowej myszy do dalszych analiz.

Ten film pokazuje rozwój prozapalnego i zwyrodnieniowego modelu hodowli narządów we wczesnym stadium choroby krążka międzykręgowego (IVD) przy użyciu TNF-α. Przedstawiono w nim procedurę wstrzykiwania TNF-α do krążka międzykręgowego i wyjaśniono mechanizmy, za pomocą których TNF-α indukuje stan zapalny i degradację IVD.

Ten film pokazuje dysocjację zamrożonej tkanki mózgowej szczura na zawiesinę jednokomórkową przy użyciu trawienia enzymatycznego i mechanicznego rozcierania. Przygotowane komórki są utrwalane i przepuszczane etanolem do dalszych zastosowań, takich jak cytometria przepływowa lub analiza ekspresji genów.

Film przedstawia analizę stanu palmitoilacji białek błony komórkowej wyizolowanych z tkanki mózgowej myszy. Proces ten polega na wystawieniu niepalmitoilowanych cystein i zablokowaniu ich, a następnie użyciu polimeru, który wiąże się z cysteinami palmitoilowanymi, pomagając w ocenie stanu palmitoilacji wyizolowanych białek.

Ten film pokazuje metodę wytwarzania mikrogranulek polimerowych, które otaczają neurotoksyczne komórki wydzielające beta-amyloid. Zawiesina komórka-polimer jest przetwarzana przez urządzenie do wytwarzania mikrogranulek, przy czym żelowanie polimeru uzyskuje się poprzez sieciowanie wapnia, tworząc kuliste mikrokulki wokół komórek. Polimer umożliwia proliferację komórek, umożliwiając jednocześnie kontrolowane, długotrwałe uwalnianie beta-amyloidu, symulując jego akumulację w chorobie Alzheimera.

Film przedstawia krok po kroku procedurę symetrycznego preparowania ustalonego pośmiertnego ludzkiego mózgu, przygotowując mniejsze bloki tkanek do dalszej analizy.

Ten film przedstawia procedurę oceny zdolności mitochondriów do zatrzymywania wapnia poprzez monitorowanie zmian fluorescencji w czasie rzeczywistym w miarę wychwytu wapnia przez mitochondria. Ten test jest przydatny do badania funkcji mitochondriów i procesów związanych z wapniem, w tym apoptozy i chorób neurodegeneracyjnych.

Ten film pokazuje wpływ ciągłego wlewu leku do mózgu myszy na poziom glukozy we krwi. Metabolizm glukozy ocenia się poprzez pobranie krwi z ogona myszy na czczo i pomiar poziomu glukozy przed i po doustnym podaniu glukozy. Tolerancję insuliny ocenia się poprzez wstrzyknięcie insuliny myszy, przy czym poziom glukozy jest rejestrowany w określonych odstępach czasu.

W tym filmie znieczulony szczur przechodzi zabieg okulistyczny, w którym kulki magnetyczne są wstrzykiwane do przedniej komory pod wpływem pola magnetycznego w celu zablokowania kąta tęczówkowo-rogówkowego. Blokada ta blokuje siatkę beleczkową, uniemożliwiając drenaż cieczy wodnistej i prowadząc do wzrostu ciśnienia wewnątrzgałkowego, uszkadzając komórki zwojowe siatkówki i nerw wzrokowy. W ten sposób rozwija się stan podobny do jaskry.

Źródło: Kummari, E., et. al., Mikrodysekcja wychwytywania laserowego - demonstracja izolacji pojedynczych neuronów dopaminowych i całego brzusznego obszaru nakrywki., J. Vis. exp. (2015)W tym filmie demonstrujemy protokół immunohistochemiczny dla neuronów dopaminowych w skrawkach tkanki mózgowej do późniejszej mikrodysekcji wychwytu laserowego.

Źródło: Bennett, S. A., i wsp., Charakterystyka zmian modyfikacji potranslacyjnych histonów w modelach neurodegeneracyjnej proteinopatii drożdży. J. Vis. Exp. (2019). Ten film przedstawia procedurę oceny modyfikacji histonów w komórkach drożdży z nadekspresją białek neurodegeneracyjnych. Etapy obejmują lizę komórek, wirowanie, elektroforezę, transfer błonowy i wykrywanie zmodyfikowanych histonów na podstawie przeciwciał.

Źródło: Yan, Z., i wsp. Ocena działania przeciwdepresyjnego Xiaoyaosan na przewlekle zestresowane myszy. J. Vis. Exp. (2019). Film przedstawia proces tworzenia mysiego modelu przewlekłej depresji wywołanej stresem i oceny zachowań depresyjnych. Przewlekłe stosowanie różnych stresorów wyzwala uwalnianie kortykosteronu, co prowadzi do nadmiernego pobudzenia neuronów i ostatecznie śmierci neuronów, co skutkuje objawami podobnymi do depresji u myszy.

Źródło: Bétemps, D., i wsp., Wykrywanie α-synukleiny związanej z chorobą za pomocą wzmocnionego testu ELISA w mózgu myszy transgenicznych z nadekspresją ludzkiej zmutowanej α-synukleiny A53T. J. Vis. Exp. (2015). Ten film przedstawia procedurę wykrywania białka związanego z chorobą neurodegeneracyjną α-synukleiny w tkance mózgowej myszy transgenicznych za pomocą testu ELISA. Etapy obejmują homogenizację tkanek, wirowanie i wykrywanie ELISA białka α-synukleiny w celu ilościowego określenia...

Źródło: Wulf, M., et.al. Protokół oparty na mikrodysekcji laserowej do analizy LC-MS/MS profilu proteomicznego granulek neuromelaniny. J. Vis. Exp. (2021). Ten film przedstawia analizę próbek peptydów z granulek neuromelaniny (NMG) wyizolowanych z ludzkiej pośmiertnej tkanki mózgowej. Peptydy są najpierw rozdzielane za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), a następnie analizowane za pomocą spektrometrii mas w celu określenia ich stosunku masy do ładunku (m / z). Docelowe...

Źródło: Zhi, L. i wsp., Pomiar wskaźnika zużycia tlenu w ostrych plastrach prążkowia od dorosłych myszy. J. Vis. Exp. (2022). Ten film pokazuje, jak mierzyć wskaźnik mitochondrialnego zużycia tlenu (OCR) w wycinkach mózgu myszy z prążkowiem. Szczegółowo opisano w nim etapy przygotowania płytki tkankowej i wkładu czujnika, załadowania ich do analizatora strumienia oraz wyjaśniono procesy komórkowe leżące u podstaw wzorców OCR.

Źródło: Josiah, S. S., et al. Badanie funkcji i aktywności neuronalnego kotransportera K-Cl KCC2 z wykorzystaniem Western Blotting. J. Vis. Exp. (2022). Film przedstawia etapy wykrywania i ilościowego oznaczania fosforylowanego białka kotransportera chlorku potasu 2 (KCC2) w lizacie komórkowym. Proces ten obejmuje immunoprecypitację w celu wyizolowania fosforylowanego KCC2 i chemiluminescencję w celu ilościowego określenia wyizolowanego białka.

Źródło: Lani-Louzada, R., i inni. Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku jaskry wywołanej chirurgicznie u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022). Ten film pokazuje ilościowe oznaczanie komórek zwojowych siatkówki z chemicznie utrwalonych siatkówk szczurów poddanych pełnej kauteryzacji splotu naczyniowego rąbka. Proces obejmuje przenikanie, barwienie przeciwciał i barwienie przeciwjądrowe, a następnie wizualizację pod mikroskopem epifluorescencyjnym w celu oceny wpływu...

Źródło: Jensen, V. N., i inni. Wielokrotne pomiary aktywności mięśni oddechowych i wentylacji w mysich modelach choroby nerwowo-mięśniowej. J. Vis. Exp. (2017). Ten film przedstawia metodę jednoczesnego rejestrowania sygnałów pletyzmografii i elektromiografii w swobodnie poruszającym się modelu myszy ALS. Procedura polega na użyciu wszczepionych elektrod i nadajnika do rejestrowania aktywności mięśni, a także komory pletyzmograficznej do monitorowania wzorców oddychania, w celu zbadania roli...

Źródło: Jiang, X., et al. Indukcja i ocena mysiego modelu eksperymentalnej krótkowzroczności. J. Vis. Exp. (2019)Ten film przedstawia procedurę wywoływania krótkowzroczności u myszy poprzez instalację niestandardowej ramki obiektywu. Rama jest przymocowana do odsłoniętej czaszki za pomocą kleju dentystycznego, a wklęsłe soczewki są wprowadzane, aby przesunąć punkt ogniskowy za siatkówkę. Taka konfiguracja stymuluje wydłużanie gałki ocznej, co prowadzi do krótkowzroczności.

Źródło: Jolly, S., et.al. Połączenie podwójnej fluorescencji hybrydyzacji in situ z immunoznakowaniem w celu wykrycia ekspresji trzech genów w sekcjach mózgu myszy. J. Vis. Exp. (2016). Ten film demonstruje zastosowanie hybrydyzacji in situ z podwójną fluorescencją do wizualizacji ekspresji dwóch celów RNA w sekcjach mózgu myszy. Protokół obejmuje sekwencyjne wykrywanie RNA za pomocą sond znakowanych izotiocyjanianem fluoresceiny i digoksygeniną, a następnie enzymatyczne wzmacnianie sygnału w...

Źródło: Baleriola, J., et. al., Wykrywanie aksonalnie zlokalizowanych mRNA w sekcjach mózgu przy użyciu hybrydyzacji in situ o wysokiej rozdzielczości. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje wykrywanie mRNA w aksonach cholinergicznych w utrwalonych mysich wycinkach hipokampa przy użyciu fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ i barwienia przeciwciałami. Mikroskopia fluorescencyjna ujawnia przestrzenną lokalizację znakowanych sondą mRNA i acetylotransferazy choliny w neuronach cholinergicznych.

Źródło: Zhang, J., et al. Ilościowa analiza immunozłota o wysokiej rozdzielczości receptorów błonowych w synapsach wstęgowych siatkówki. J. Vis. Exp. (2016)Ten film przedstawia technikę mikroskopii elektronowej do wizualizacji lokalizacji receptora neuroprzekaźnika w synapsach siatkówki. Skrawki siatkówki zawierają komórki zwojowe siatkówki, które wykazują receptory neuroprzekaźników związane z błoną i są znakowane podjednostką B toksyny cholery (CTB). Po znakowaniu markerów przeciwciałami...

Źródło: de March, C. A. et. al., Monitorowanie in vitro w czasie rzeczywistym aktywacji receptora odorantu przez nawaniacz w fazie gazowej. J. Vis. Exp. (2019)Ten film przedstawia metodę monitorowania aktywacji receptorów zapachowych w czasie rzeczywistym w rekombinowanych komórkach ssaków za pomocą pomiaru luminescencji. Wiązanie odorantu wyzwala aktywację białka G i produkcję cAMP, aktywując białka glosensor, które emitują luminescencję po związaniu substratu, zapewniając ilościową miarę...

Źródło: Alluri, H., et al. Deprywacja tlenowo-glukozowa i reoksygenacja jako model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego in vitro do badania dysfunkcji bariery krew-mózg. J. Vis. Exp. (2015). Film pokazuje fluorescencyjną lokalizację białek połączeń ścisłych i włókien stresowych w komórkach śródbłonka mikronaczyniowego mózgu szczura (RBMEC). W zestresowanej monowarstwie przeciwciała znakowane fluorescencyjnie są używane do znakowania białek połączeń ścisłych, podczas gdy znakowana...

Źródło: Eid, L. & Parent, M. Przygotowanie tkanki mózgowej naczelnych innych niż człowiek do wstępnego osadzenia immunohistochemii i mikroskopii elektronowej. J. Vis. Exp. (2017). Ten film pokazuje przygotowanie utrwalonej w aldehydach tkanki mózgowej naczelnych innych niż ludzka przy użyciu wstępnie osadzonej immunohistochemii do mikroskopii elektronowej. Przedstawiono w nim etapy znakowania immunologicznego określonego białka neuronalnego, po których następuje reakcja peroksydazy, która...

Źródło: Evilsizor, M. N., et. al., Elementarz immunohistochemii na kriowyciętej tkance mózgowej szczura: Przykład barwienia mikrogleju i neuronów. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje krok po kroku procedurę barwienia immunohistochemicznego na kriosekcji tkanki mózgowej szczura w celu wizualizacji przestrzennego rozmieszczenia mikrogleju i neuronów.

Źródło: Kirchner, K.N., i wsp., Hydrofobowa metoda oczyszczania tkanki dla tkanki mózgowej szczura. J. Vis. Exp. (2020). Ten film pokazuje metodę hydrofobowego oczyszczania tkanki z próbki tkanki mózgowej szczura. Próbka jest sekwencyjnie odwadniana w metanolu, traktowana mieszaniną dichlorometanu i metanolu w celu rozpuszczenia lipidów i pigmentów, a następnie przenoszona do eteru dibenzylowego w celu całkowitego oczyszczenia tkanek, co umożliwia szczegółowe obrazowanie bez cienkiego cięcia.

Aby wykryć te bakterie, weź zdeparafinowaną, ponownie nawodnioną, zakażoną bakteriami sekcję ludzkiego mózgu z odsłoniętymi antygenami białkowymi i inaktywowaną endogenną fosfatazą.

Wirus infekuje neurony piramidowe w korze mózgowej, a ekspresja białek wirusowych lokalizuje się w wewnątrzcytoplazmatycznych strukturach ziarnistych znanych jako ciała inkluzyjne.

Umyj w celu usunięcia parafiny, a następnie nawodnij tkankę za pomocą zmniejszających się stężeń alkoholu.

Ten film pokazuje izolację białek powierzchniowych i wewnątrzkomórkowych z hodowli astrocytów. Hodowlę astrocytów umieszcza się na lodzie w celu zahamowania endocytozy, a następnie białka na powierzchni komórki znakuje się odczynnikiem biotynylacyjnym. Komórki są poddawane lizie w celu uwolnienia biotynylowanych białek powierzchniowych komórek i niebiotynylowanych białek wewnątrzkomórkowych. Wreszcie, kulki pokryte streptawidyną są używane do oddzielania biotynylowanych białek powierzchniowych...

Ten film demonstruje proces wstrzykiwania do komory mózgowej w celu zbadania dystrybucji mysiego wirusa cytomegalii (MCMV) w mózgu noworodka myszy. MCMV, zaprojektowany do ekspresji wzmocnionego białka zielonej fluorescencji (EGFP) zapewniającego widoczność, jest wstrzykiwany do bocznej komory mózgu szczeniaka myszy. Wstrzyknięty wirus krąży w płynie mózgowo-rdzeniowym, infekując komórki w okolicy okołokomorowej, w tym w strefie brzeżnej, splocie naczyniówkowym i strefie podkomorowej.

Ten film demonstruje stworzenie modelu in vitro infekcji wirusem Zika w rozwijającym się mózgu. Ludzkie organoidy mózgowe zawierające rozety komórek macierzystych, neuronalne komórki progenitorowe (NPC) i neurony są zakażone wirusem Zika. Wirus infekuje NPC i wywołuje apoptozę, zakłócając rozwój organoidów.

Film demonstruje mikrowstrzykiwanie lipopolisacharydów (LPS) do mózgów larw danio pręgowanego w celu wywołania zapalenia nerwów. Larwy umieszcza się na naczyniu wyłożonym agarozą, igłę wprowadza się do komór mózgu i wstrzykuje się LPS. Wstrzyknięty LPS wywołuje odpowiedź immunologiczną, która prowadzi do zapalenia nerwów.

Ten film pokazuje ocenę zdrowia mitochondriów w genetycznie zmodyfikowanych astrocytach, które wyrażają białko fluorescencyjne w swoich mitochondriach. Białko pomaga śledzić zmiany w zdrowiu mitochondriów, ponieważ jego fluorescencja zmienia się z zielonej na czerwoną, wskazując na stres lub uszkodzenie. Obrazy są rejestrowane i analizowane przy użyciu różnych parametrów.

Ten film demonstruje procedurę wstrzykiwania chimerycznych wirusów HIV do kory mózgowej szczura, gdzie RNA wirusa integruje się z genomem gospodarza, replikuje się i rozprzestrzenia, aby ustalić aktywne zakażenie wirusem HIV w modelu eksperymentalnym.

Ten film pokazuje generowanie modelu myszy z infekcją OUN. Młodemu szczeniakowi ssącemu wstrzykuje się wirusa zarówno wewnątrzczaszkowo, jak i dootrzewnowo. Wirus rozprzestrzenia się, infekując OUN, powodując śmierć komórek neuronalnych i stan zapalny. Szczenię jest oceniane pod kątem objawów infekcji w miarę postępu choroby.

Ten film pokazuje powstawanie zapalenia nerwów w modelu mysim. Pobiera się znieczuloną mysz z mikroranami, a na rany nakłada się inokulum wirusa wścieklizny rzekomej (PRV). Wirus infekuje nerwy obwodowe, rozprzestrzenia się do zwojów korzenia grzbietowego (DRG), a następnie infekuje rdzeń kręgowy i mózg. Zakażenie neuronów w układzie nerwowym prowadzi do odpowiedzi immunologicznej, która indukuje uszkodzenie neuronów, prowadząc do zapalenia nerwów.

Film demonstruje domózgowe wstrzyknięcie zawiesiny wirusa Zika dorosłej myszy w celu wywołania neurodegeneracji. Znieczuloną mysz umieszcza się w stereotaktycznej ramie, a w odsłoniętej czaszce wierci się otwór do wstrzyknięcia. Zawiesina wirusa Zika jest wstrzykiwana do tkanki mózgowej. Infekcja wirusowa powoduje stan zapalny, prowadzący do neurodegeneracji.

Ten film pokazuje ilościowe określenie obciążenia bakteryjnego z perfundowanego mózgu myszy zakażonego Listeria monocytogenes.

Ten film demonstruje metodę badania przenikania przez model bariery krew-mózg (BBB) in vitro przy użyciu astrocytów i komórek śródbłonka na wkładce membranowej, z wolnym FITC i ferrytyną obciążoną FITC. FITC-ferrytyna wiązała się z receptorami na komórkach śródbłonka i przenikała przez barierę błonową do dolnej komory, podczas gdy wolna FITC wykazywała ograniczoną przenikalność i pozostawała w górnej komorze.

Ten film pokazuje procedurę zakażenia ludzkich płodowych nerwowych komórek macierzystych wirusem Zika. Zainfekowane komórki mogą być wykorzystane do dalszych badań.

Ten film przedstawia model in vitro do badania patogenów przekraczających barierę krew-mózg (BBB). Komórki śródbłonka mikronaczyniowego, które wyrażają ścisłe połączenia, tworzą warstwę śródbłonka w górnej komorze, podczas gdy neurony, astrocyty i mikroglej reprezentują miąższ mózgu w dolnej komorze, oddzielony porowatą błoną. Zakażenie wirusem w modelu BBB naśladuje patogen przechodzący z krwi do mózgu. Po wprowadzeniu wirusa neurotropowego przenika on przez barierę krew-mózg poprzez...

Źródło: Funes, S., et. al., Ludzkie komórki podobne do mikrogleju: różnicowanie z indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych i test fagocytozy żywych komórek in vitro przy użyciu ludzkich synaptosomów. J. Vis. Exp. (2022)Ten film przedstawia test do badania zdolności fagocytarnej komórek podobnych do mikrogleju przy użyciu wrażliwych na pH synaptosomów znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym.

Zanurz tkankę w ksylenie, aby rozpuścić parafinę.

Dożylnie wstrzyknąć albuminę znakowaną fluoroforem, która przechodzi przez uszkodzoną barierę krew-mózg, docierając do mózgu.

W tkance widoczne są fibryle amyloidowe i nieprawidłowe agregaty białkowe w ścianach naczyń mózgowych, które są kluczowymi wskaźnikami zaburzeń neurologicznych.

MCCH charakteryzuje się zmniejszonym przepływem krwi do mózgu. Ogranicza to dopływ tlenu i składników odżywczych do warstwy komórek śródbłonka naczyń krwionośnych mózgu, uszkadzając komórki.

Zawiesić mieszaninę komórkową w macierzy zewnątrzkomórkowej lub roztworze ECM.

Wykonaj nacięcie szyi, aby odsłonić i luźno podwiązać obustronne tętnice szyjne wspólne.

Ten film demonstruje metodę wywoływania eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) poprzez wstrzykiwanie peptydów pochodzących z mieliny z adiuwantem w celu aktywacji autoreaktywnych limfocytów T, które migrują do mózgu. Toksyna krztuścowa jest podawana w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając tym limfocytom T i innym komórkom odpornościowym przedostanie się do mózgu. Te komórki odpornościowe powodują demielinizację, co prowadzi do...

Ten film demonstruje procedurę oceny przerwania bariery krew-mózg w mysim modelu EAE. Barwniki fluorescencyjne o różnych rozmiarach są wstrzykiwane po ortopie i krążą w naczyniach krwionośnych mózgu. Mniejszy barwnik przecieka przez szczeliny do tkanki mózgowej, podczas gdy większy barwnik dostaje się tylko wtedy, gdy zakłócenie jest poważne, co koreluje z zakresem uszkodzenia bariery.

Ten film demonstruje procedurę wywoływania uszkodzenia tkanek lub zawału w moście znieczulonego szczura za pomocą stymulacji elektrycznej.

W tym filmie zapłodnione zarodki danio pręgowanego są dechorionowane pod mikroskopem stereoskopowym, a następnie poddawane działaniu inhibitora syntezy cholesterolu, co prowadzi do rozwoju pęknięć naczyń krwionośnych i krwotoków mózgowych u larw. Larwy krwotoczne, rozpoznawalne po wyraźnych czerwonych plamach, są następnie oddzielane pod mikroskopem w celu dalszej analizy.

Ten film pokazuje proces wywoływania zaburzeń bariery krew-mózg (BBB) i mikrokrwotoków mózgowych w modelu szczurzym przy użyciu lipopolisacharydu (LPS). Podkreśla sekwencję odpowiedzi immunologicznych, które prowadzą do zwiększonej przepuszczalności BBB, a następnie uszkodzenia tkanki mózgowej.

Ten film demonstruje test do wykrywania mikrokrwotoków mózgowych (CMH) w modelu szczurzym. CMH to krwawienia do mózgu spowodowane przerwaniem bariery krew-mózg, identyfikowane przez wyciekające czerwone krwinki (RBC). W modelu szczurzym utrwalona tkanka mózgowa jest kriochroniona, cięta i barwiona hematoksyliną-eozyną dla erytrocytów, co pozwala na mikroskopową wizualizację CMH. Wyciekające erytrocyty pojawiają się pod mikroskopem jako czerwono-pomarańczowe.

Film demonstruje procedurę tworzenia modelu myszy do badania niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków. Przedstawia kroki chirurgicznego wywoływania niedokrwienia i poddawania zwierzęcia hipoksji w celu pogłębienia uszkodzenia mózgu. Na koniec pokazano, w jaki sposób można ocenić powstałe uszkodzenia mózgu, upewniając się, że model mysi jest przygotowany do dalszych badań naukowych.

Ten film pokazuje, jak scharakteryzować przestrzeń zewnątrzkomórkową w wycinku mózgu za pomocą mikroelektrod jonoselektywnych i jonoforetycznych do pomiaru i porównywania sygnałów elektrycznych. Proces ten pomaga określić objętość, frakcję przestrzeni i stopień skręcenia.

W tym filmie, matryca wieloelektrodowa (MEA) pokryta oksydazą glutaminianu jest wszczepiana do tkanki mózgowej znieczulonej myszy. Roztwór glutaminianu jest wstrzykiwany do przestrzeni zewnątrzkomórkowej, gdzie MEA wykrywa poziomy glutaminianu, umożliwiając monitorowanie wychwytu glutaminianu przez astrocyty w czasie rzeczywistym.

W tym filmie, genetycznie zmodyfikowane mysie szczenię z genem Ccm2 otoczonym miejscami loxP i rekombinazą Cre połączonej z receptorem estrogenowym jest używane do wywoływania mózgowych malformacji jamistych (CCM). Podanie 4-hydroksytamoksyfenu aktywuje Cre w komórkach śródbłonka, prowadząc do delecji Ccm2 i powstania CCM w mózgu.

Ten film demonstruje procedurę izolowania komórek mózgowych i infiltrowanych komórek odpornościowych z niedokrwionych tkanek mózgowych myszy poprzez trawienie enzymatyczne, a następnie usuwanie resztek komórek i mieliny przez wirowanie w gradiacji gęstości, w celu zbadania reakcji na stan zapalny w badaniach nad udarem.

Film pokazuje indukcję krwotoku podpajęczynówkowego poprzez perforację wewnątrznaczyniową w modelu mysim. Wykonuje się nacięcie w okolicy szyi znieczulonej myszy, aby uzyskać dostęp do wspólnej tętnicy szyjnej i jej rozwidlenia. Włókno jest wprowadzane przez tętnice w celu perforacji gałęzi tętnicy wewnątrzczaszkowej, wywołując krwotok podpajęczynówkowy.

Ten film przedstawia metodę generowania szczurzego modelu krwotoku dokomorowego u noworodków. W tej procedurze znieczulonemu szczeniakowi szczura wstrzykuje się hemoglobinę do bocznej komory mózgu. Hemoglobina powoduje stres oksydacyjny i uwalnia hem, symulując krwotok dokomorowy. Wynikające z tego uszkodzenie tkanek mózgowych, napędzane przez reaktywne formy tlenu i cytokiny zapalne, prowadzi do powiększenia komór, co jest częstą konsekwencją krwotoku dokomorowego.

Ten film przedstawia procedurę wykonywania trwałej dystalnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu lub MCAO z tętnicą szyjną wspólną lub podwiązaniem CCA u starszych szczurów w celu modelowania udaru niedokrwiennego. Blokuje to przepływ krwi do mózgu, prowadząc do śmierci neuronów i generowania modelu do badania mechanizmów udaru i potencjalnych metod leczenia.

Ten film pokazuje procedurę ustanawiania modelu szczura krwotoku podpajęczynówkowego. Znieczulonemu szczurowi wszczepia się sondy do pomiaru ciśnienia śródczaszkowego i przepływu krwi w mózgu. Miejsce docelowe jest identyfikowane, a igła jest wprowadzana w pozycji wstępnej chiazmatycznej. Krew autologiczna jest następnie wstrzykiwana do przestrzeni podpajęczynówkowej, zwiększając ciśnienie śródczaszkowe i zmniejszając przepływ krwi w mózgu, ustanawiając model.

Ten film przedstawia eksperymentalne badanie transmigracji limfocytów przez model śródbłonka bariery krew-mózg (BBB). Monowarstwa komórek śródbłonka mikronaczyniowego ludzkiego mózgu (HBMEC) jest generowana in vitro, a komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) zawierające limfocyty są dodawane do monowarstwy. Komórki są następnie inkubowane, aby umożliwić transmigrację limfocytów, a migrowane komórki są oznaczane ilościowo za pomocą cytometrii przepływowej.

Ten film pokazuje ocenę strefy zawału i obrzęku mózgu w wycinkach mózgu szczurów poddanych niedrożności tętnicy środkowej mózgu. Obszary po zawale są identyfikowane za pomocą barwienia redoks, podczas gdy niebieski filtr i funkcja progowa w oprogramowaniu do analizy obrazu określają ilościowo strefę zawału i obrzęk w dotkniętej półkuli.

Ten film przedstawia metodę oceny przezśródbłonkowego oporu elektrycznego (TEER) w komórkach śródbłonka mikronaczyniowego mózgu myszy in vitro. Wysoka wartość TEER wskazuje na nienaruszone połączenia komórek śródbłonka, podczas gdy dodanie aktywowanych limfocytów T obniża wartość TEER, odzwierciedlając przerwanie bariery połączeniowej.

Ten film przedstawia procedurę odnerwienia współczulnego tętnicy nerkowej w mysim modelu nadciśnieniowym indukowanym angiotensyną II, wykorzystującą fenol do zakłócenia funkcji nerwu współczulnego i obniżenia ciśnienia krwi.

Ten film pokazuje proces wywoływania udaru niedokrwiennego w modelu szczurzym poprzez zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej (MCA) za pomocą śruby gwintowanej. Procedura polega na podwiązaniu tętnic szyjnych, wprowadzeniu śruby gwintowanej do tętnicy szyjnej zewnętrznej i zablokowaniu przepływu krwi z MCA do mózgu, co prowadzi do śmierci neuronów i naśladuje udar niedokrwienny.

Ten film przedstawia procedurę replikacji udaru zakrzepowego w modelu mysim poprzez zablokowanie prawej tętnicy szyjnej wspólnej i wystawienie myszy na działanie środowiska o niskiej zawartości tlenu. Proces ten zmniejsza przepływ krwi i tlenu do mózgu, powodując tworzenie się skrzepów krwi i uszkodzenie mózgu.

Ten film demonstruje precyzyjną technikę wywoływania udaru istoty białej u znieczulonej myszy poprzez wstrzyknięcie inhibitora tlenku azotu do docelowych współrzędnych mózgu w istocie białej. Prowadzi to do zwężenia naczyń krwionośnych i zahamowania dopływu krwi, co prowadzi do uszkodzenia neuronów i udaru mózgu.

Źródło: Wanderer, S., i inni. Model tętniaka mikrochirurgicznego bifurkacji u królika. J. Vis. Exp. (2020)Ten film pokazuje tworzenie eksperymentalnego modelu tętniaka u królika przy użyciu torebki naczyniowej poddanej elastazie. Po wycięciu fragmentu prawego CCA, worek jest traktowany elastazą, a następnie zszywany do lewego CCA w celu przywrócenia przepływu krwi. Powstałe naprężenia na osłabionych ściankach worka indukują powstawanie tętniaka.

Źródło: Sharma, T. P., i wsp., Translaminarny model autonomicznego systemu do modulacji ciśnienia wewnątrzgałkowego i śródczaszkowego w tylnych segmentach dawcy ludzkiego. J. Vis. Exp. (2020). Ten film przedstawia procedurę przygotowania ludzkiego oka do badania wpływu ciśnienia translaminarnego na sygnalizację komórek zwojowych siatkówki poprzez symulację ciśnienia wewnątrzgałkowego i wewnątrzczaszkowego w translaminarnym układzie autonomicznym.

Źródło: Lani-Louzada, R., i wsp., Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku chirurgicznie wywołanej jaskry u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022)Ten film pokazuje indukcję i monitorowanie podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego (IOP) w modelu szczurzym. Proces ten polega na kauteryzacji rąbkowych naczyń krwionośnych, co skutkuje niedrożnością naczyń i podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym. Szczur może następnie wyzdrowieć, a ciśnienie wewnątrzgałkowe jest regularnie...

Źródło: Jungen, C., et al. Wpływ neuronów wewnątrzsercowych na elektrofizjologię serca i arytmogenezę w Ex vivo systemie Langendorffa. J. Vis. Exp. (2018). Film przedstawia technikę ex vivo stymulacji wewnątrzsercowego układu nerwowego w celu oceny podatności serca na arytmię. Za pomocą aparatu perfuzyjnego izolowane serce myszy jest perfundowane z natlenionym buforem. Wewnątrzsercowy układ nerwowy jest następnie stymulowany z dużą częstotliwością w celu wywołania arytmii.

Źródło: Hakim, M. A. i inni., Izolacja i analiza funkcjonalna śródbłonka tętniczego miąższu mózgu myszy. J. Vis. Exp. (2022). Ten film przedstawia analizę funkcjonalną śródbłonka tętniczki wyizolowanej z mózgu myszy. Przedstawiono w nim etapy pomiaru wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia i potencjału błonowego, zarówno na początku badania, jak i w odpowiedzi na stymulację farmakologiczną.

Źródło: Tang, X. et. al., Masywny krwotok z mostu przez podwójne wstrzyknięcie krwi autologicznej. J. Vis. Exp. (2021)Ten protokół opisuje kontrolowaną infuzję autologicznej krwi do obszaru mostu mózgu szczura w celu modelowania masywnego krwotoku mostowego. Celem jest symulacja miejscowego krwawienia do mózgu poprzez zwiększenie miejscowego ciśnienia.

Źródło: Alluri, H., et.al. Deprywacja tlenowo-glukozowa i redotlenowacja jako model uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego in vitro do badania dysfunkcji bariery krew-mózg. J. Vis. Exp. (2015).Film pokazuje wpływ niedoboru tlenu i glukozy oraz późniejszego dotlenienia na komórki mikronaczyniowe śródbłonka mózgu szczura (RBMEC) poprzez symulację stanu niedotlenienia i braku składników odżywczych. Warunki te powodują zubożenie ATP, zwiększenie wewnątrzkomórkowego wapnia i wytwarzanie...

Źródło: Gucciardo, E., et. al., model hodowli tkankowej ex vivo dla powikłań włóknisto-naczyniowych w proliferacyjnej retinopatii cukrzycowej. J. Vis. Exp. (2019)Ten film szczegółowo opisuje protokół barwienia immunologicznego dla hodowli ex vivo tkanki włóknisto-naczyniowej osadzonej w żelu fibryny. Umożliwia to szczegółową wizualizację zmian naczyniowych związanych z proliferacyjną retinopatią...

Źródło: Talley Watts, L., i wsp. Fotozakrzepica róży bengalskiej za pomocą konfokalnego obrazowania optycznego in vivo: model udaru pojedynczego naczynia. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje technikę wywoływania tworzenia się skrzepów krwi w mózgu myszy. Znieczulona mysz z oknem czaszkowym i ścieńczoną czaszką ulega fotozakrzepicy poprzez aktywację światłoczułego barwnika za pomocą światła o dużym natężeniu. Proces ten generuje reaktywne formy tlenu, które uszkadzają ściany naczyń i...

Źródło: Kuts, R. et al. Wywołane laserem uszkodzenie mózgu w korze ruchowej szczurów. J. Vis. Exp. (2020)Ten film przedstawia ocenę integralności bariery krew-mózg (BBB) po uszkodzeniu mózgu wywołanym laserem u szczurów. Barwnik śledzący jest wstrzykiwany do żyły ogonowej, umożliwiając mu krążenie do mózgu i wyciek do tkanki przez uszkodzoną barierę krew-mózg. Mózg jest następnie ekstrahowany i przetwarzany w celu uwolnienia barwnika. Intensywność fluorescencji barwnika jest mierzona w celu...

Astrocyty wydzielają cząsteczki sygnałowe, które przyspieszają dojrzewanie i różnicowanie komórek macierzystych w neurony i astrocyty.

Ten film pokazuje metodę testowania migracji między neuronami w odpowiedzi na chemoatrakcyjne sygnały z okołokomorowych komórek śródbłonka (PVEC). Interneurony są umieszczone w centralnym pomieszczeniu, z PVEC i komórkami kontrolnymi po obu stronach. Zwiększona migracja w kierunku PVEC wskazuje na pozytywną reakcję na ich chemoatrakcyjne sygnały.

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne wycinków organoidów móżdżku w celu identyfikacji specyficznych antygenów docelowych wyrażanych w różnych neuronach móżdżku, które wskazują na dojrzewanie organoidów.

Ten film demonstruje metodę identyfikacji neuronów z mieszanej kultury ziarnistych neuronów móżdżku i komórek glejowych za pomocą podwójnego barwienia dioctanem fluoresceiny (FDA) i jodkiem propidyny (PI), gdzie żywe neurony wydają się zielone, a martwe neurony czerwone.

Ten film demonstruje szczegółowy protokół barwienia immunologicznego do wizualizacji defektów fenotypowych w ciałach grzybów zmutowanych mózgów Drosophila. Protokół polega na zastosowaniu przeciwciał przeciwko Fas2, białku biorącemu udział w prowadzeniu aksonów, które ułatwia prawidłowy rozwój morfologiczny i funkcjonalny ciała grzyba.

Ten film demonstruje procedurę barwienia nowo rozmnożonych nerwowych komórek macierzystych w skrawkach tkanki mózgowej za pomocą inkorporacji EdU, a następnie immunofluorescencji w celu wizualizacji określonych białek, zwiększając zrozumienie dynamiki i proliferacji komórek.

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne kriosekcji z embrionalnych tkanek twarzoczaszki myszy, przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej do oceny ekspresji markerów jądrowych oraz określenia proliferacji komórek i aktywności sygnalizacyjnej.

Ten film pokazuje, jak pęcherzyki neuronalne są znakowane specyficznymi białkami fluorescencyjnymi, aby uwidocznić ich ruch. Najpierw plazmid kodujący białko fluorescencyjne jest inkubowany ze środkiem transfekcyjnym, a następnie wprowadzany do kultury neuronów. Następnie pozyskiwane są obrazy neuronów i analizowane w celu śledzenia ruchu pęcherzyków.

Ten film pokazuje pomiar wydzielania kwasu retinowego (RA) przez komórki neurosfery za pomocą komórek reporterowych RA. Przedstawiono w nim etapy związane ze współhodowlą komórek neurosfery z komórkami reporterowymi RZS i wykonaniem testu kolorymetrycznego RZS w celu zmierzenia poziomów RZS.

Ten film demonstruje barwienie immunologiczne embrionalnego mysiego przewodu pokarmowego w celu wizualizacji i analizy rozmieszczenia populacji neuronów za pomocą immunofluorescencji i mikroskopii konfokalnej.

Ten film demonstruje znakowanie wirusowe i przeszczepianie komórek wyniosłości przyśrodkowej zwoju (MGE) do badań in vivo. Przedstawiono w nim etapy związane z transdukcją komórek MGE za pomocą reportera wirusa, przeszczepianiem tych transdukowanych komórek do kory młodego myszy i umożliwianiem ekspresji reporterowej w określonych podtypach interneuronów.

Ten film pokazuje izolację jąder bogatych w receptor oksytocyny z mózgu nowonarodzonego szczura. Cięcie koronalne, a następnie identyfikacja i precyzyjne wykrawanie jąder mózgowych bogatych w receptor oksytocyny, umożliwia skuteczną ekstrakcję jąder bogatych w receptor oksytocyny do dalszej analizy.

Źródło: Pericoli, G. et. al., Testy immunocytochemiczne żywych komórek 3D rozlanego glejaka linii środkowej u dzieci. J. Vis. Exp. (2021)Ten film przedstawia obrazowanie żywych komórek w celu obserwacji migracji komórek glejaka rozlanego w linii środkowej u dzieci za pomocą znakowania immunohistochemicznego przeciwciałami anty-CD44.

Źródło: Jantzie, L. L., et. al. Modelowanie encefalopatii wcześniaków za pomocą niedotlenienia prenatalnego z lipopolisacharydem owodniowym u szczurów. J. Vis. Exp. (2015)Ten film demonstruje protokół wywoływania stanów niedotlenieniowo-niedokrwiennych i zapalnych u płodów szczurów poprzez ograniczanie przepływu krwi w macicy i wstrzykiwanie LPS, modelowanie zapalenia nerwów i zaburzonego rozwoju mózgu istotne dla badań nad przedwczesnym porodem.

Źródło: Larpthaveesarp, A., et. al. Przemijający model niedrożności tętnicy środkowej mózgu udaru noworodka u szczurów P10. J. Vis. Exp. (2017)Ten film pokazuje ustanowienie modelu niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczeniaka szczura. Tętnica szyjna wewnętrzna (ICA) jest odsłonięta, a ligatura jest zabezpieczona, aby ograniczyć napływ krwi. Okluda jest wprowadzana przez ICA, aby dotrzeć do tętnicy środkowej mózgu. Szczenię może następnie dojść do siebie przed dalszą analizą.

Choroba pobudza autoreaktywne komórki odpornościowe do atakowania białek mieliny, degradując osłonkę mielinową otaczającą aksony neuronów.

W sekcji kontrolnej znajdują się aksony z ciasno upakowanymi osłonkami mielinowymi zawierającymi koncentryczne warstwy błony plazmatycznej. Uszkodzona sekcja wykazuje zdezagęszczoną mielinę z dużymi przerwami.

Stres upośledza funkcję oligodendrocytów, zaburzając bogatą w lipidy osłonkę mielinową otaczającą aksony neuronów w przyśrodkowej korze przedczołowej, regionie mózgu regulującym emocje.

Ten film demonstruje immunoprecypitację fragmentów DNA usieciowanych z białkiem docelowym z lizatów neuronów ruchowych pochodzących z komórek macierzystych za pomocą kulek magnetycznych pokrytych przeciwciałem specyficznym dla białka docelowego.

Ten film demonstruje protokół oceny integralności strukturalnej połączeń nerwowo-mięśniowych w grzbietowych mięśniach podłużnych Drosophila. Procedura polega na barwieniu neuronów i mięśni dwoma odrębnymi przeciwciałami i porównaniu wzorców fluorescencji między muchami zmutowanymi i dzikimi. Zmniejszenie barwienia neuronów u zmutowanych much wskazuje na neurodegenerację, podczas gdy struktura mięśni pozostaje nienaruszona.

Ten film demonstruje ocenę neurodegeneracyjnego wpływu badanej substancji chemicznej na Caenorhabditis elegans z fluorescencyjnie oznaczonymi neuronami. Normalne neurony wykazują jasną fluorescencję nienaruszonej somy i procesów, podczas gdy zmniejszona fluorescencja, obrzęk somy i przerywane procesy wskazują na neurodegenerację.

Ten film demonstruje metodę tworzenia modelu neuropatii małych włókien u myszy przy użyciu agonisty TRPV1 resiniferatoksyny (RTX). Przedstawiono w nim etapy związane z podawaniem RTX myszom i wyjaśniono, w jaki sposób RTX indukuje śmierć neuronów w neuronach czuciowych o małej średnicy, ustanawiając w ten sposób model neuropatii.

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Ten film demonstruje procedurę wywoływania paraliżu poprzez transfer aktywowanych komórek Th17 ukierunkowanych na akwaporynę-4 do modelu mysiego. W ośrodkowym układzie nerwowym aktywowane komórki Th17 oddziałują z astrocytami wykazującymi ekspresję akwaporyny-4, wywołując odpowiedź immunologiczną, która prowadzi do paraliżu ogona i kończyn u myszy.

Ten film pokazuje proces oceny dysfunkcji motorycznej w modelu mysim poprzez podanie toksyny krztuścowej i inokulum zawierającego peptydy naśladujące mielinę i adiuwanty, a następnie testy na bieżni w celu oceny funkcji motorycznych i oceny wynikłego uszkodzenia nerwów w wyniku aktywacji immunologicznej i demielinizacji.

Ten film przedstawia test klatki schodowej w celu oceny funkcji motorycznych u szczura z hemiparkinsonem z uszkodzeniem prawej półkuli mózgu. Zmiana zaburza sygnalizację dopaminy, upośledzając kontrolę lewej łapy, co powoduje, że na lewych schodach pozostaje więcej granulek, co wskazuje na dysfunkcję motoryczną.

Ten film demonstruje zastosowanie testu lokomocji promieniowej do oceny dysfunkcji motorycznej u C. elegans wykazujących ekspresję ludzkiego białka TDP-43 typu dzikiego lub z mutacją ALS. Robaki o różnym poziomie ekspresji TDP-43 typu dzikiego lub zmutowanego mogą pełzać, a ich ruch jest mierzony odległością promieniową przebytą od centralnego punktu na płytce testowej. Test rozróżnia łagodne, umiarkowane i ciężkie upośledzenie motoryczne na podstawie odległości przebytej przez różne szczepy C.

Ten film pokazuje ocenę mięśnia za pomocą hodowanych neuronów ruchowych, komórek Schwanna i miotubek, a następnie leczenia blokerem nerwowo-mięśniowym w celu zahamowania skurczu. Grafika w ruchu w czasie oznaczona kolorami przedstawia grafikę w ruchu w czasie oznaczoną kolorem. Czerwony oznacza najszybszy ruch, a niebieski oznacza najwolniejszy.

Ten film przedstawia wizualizację interakcji białko-białko w połączeniu nerwowo-mięśniowym Drosophila (NMJ) przy użyciu testu ligacji zbliżeniowej (PLA). Po wyizolowaniu ścian ciała, oddziałujące białka są badane za pomocą przeciwciał pierwszorzędowych i przeciwciał drugorzędowych sprzężonych z PLA. Bliskość oddziałujących białek ułatwia ligację sond z oligonukleotydami konektorowymi, tworzącymi koliste DNA, które jest następnie amplifikowane przez amplifikację toczącego się koła. Sondy...

Źródło: Wagner, K. i inni., Badanie transportu białek błonowych w komórkach fotoreceptorowych Drosophila przy użyciu białek znakowanych eGFP. J. Vis. Exp. (2022). Ten film przedstawia wizualizację transportu białek błonowych w komórkach fotoreceptorów Drosophila przy użyciu białek TRPL znakowanych eGFP. Szczegółowo opisano w nim przygotowanie transgenicznych muszek do obrazowania, przechwytywanie obrazów fluorescencyjnych komórek fotoreceptorowych oraz ilościowe określenie transportu TRPL...

Źródło: Deseure, K., i wsp. Przewlekłe uszkodzenie zwężenia nerwu podoczodołowego szczura (IoN-CCI) w celu zbadania bólu neuropatycznego nerwu trójdzielnego. J. Vis. Exp. (2015). Ten film pokazuje metodę wywoływania bólu neuropatycznego w modelu szczurzym poprzez zwężenie nerwu podoczodołowego. Po odsłonięciu nerwu podoczodołowego i zawiązaniu ligatur w celu jego zwężenia, odpowiedź immunologiczna w miejscu urazu zwiększa pobudliwość sąsiednich neuronów, które przekazują sygnały bólowe do...

Źródło: Brakkee, E. M., i wsp. Chirurgia i testy behawioralne w modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego u szczurów. J. Vis. Exp. (2023). Ten film przedstawia procedurę generowania modelu transpozycji nerwiaka piszczelowego szczura (TNT). Po odsłonięciu nerwu piszczelowego w tylnej nodze znieczulonego szczura, przeciąć nerw. Następnie utwórz tunel podskórny, przeciągnij przecięty nerw przez tunel i zszyj go na miejscu. W przypadku braku celu do reinerwacji, zdezorganizowane wyrostki...

Źródło: Lee, D. et. al., Zmodyfikowane warunki eksperymentalne dla ubytku słuchu wywołanego hałasem u myszy oraz ocena funkcji słuchu i uszkodzenia zewnętrznych komórek rzęsatych. J. Vis. Exp. (2023)Ten film przedstawia procedurę ubytku słuchu wywołanego hałasem u myszy. Głośne dźwięki uszkadzają komórki rzęsate w uchu wewnętrznym i zaburzają drogi słuchowe, powodując upośledzenie słuchu.

Źródło: Lee, D., et. al. Zmodyfikowane warunki eksperymentalne dla ubytku słuchu wywołanego hałasem u myszy oraz ocena funkcji słuchu i uszkodzenia zewnętrznych komórek rzęsatych. J. Vis. Exp. (2023)Ten film pokazuje pomiar słuchowej odpowiedzi pnia mózgu (ABR) u myszy. Elektrody umieszcza się na głowie, za uchem i w pobliżu ogona znieczulonej myszy. Dostarczane są bodźce akustyczne o różnym natężeniu, a generowane sygnały elektryczne są rejestrowane jako przebiegi.

Źródło: Olmstead, D. N., i wsp., Aksotomia nerwu twarzowego u myszy: model do badania odpowiedzi neuronów ruchowych na uraz. J. Vis. Exp. (2015). Ten film pokazuje procedurę zmiażdżenia nerwu twarzowego u myszy, w której tępe rozcięcie kluczowych punktów orientacyjnych odsłania pień nerwu twarzowego w otworze rylcowo-sutkowym. Kleszcze są następnie używane do uciskania pnia nerwowego, wywołując uszkodzenie aksonów i zakłócając przekazywanie sygnałów neuronalnych.

Źródło: Cheah, M., et al. Iniekcja ganglionu korzenia grzbietowego i uraz zmiażdżenia korzenia grzbietowego jako model regeneracji aksonów czuciowych. J. Vis. Exp. (2017). Ten film pokazuje krok po kroku procedurę wstrzykiwania zawiesiny wirusa do zwojów korzenia grzbietowego (DRG) i wywoływania kontrolowanego uszkodzenia aksonów poprzez zmiażdżenie korzenia grzbietowego u znieczulonego szczura. Protokół obejmuje odsłonięcie DRG, dostarczenie wektora wirusowego stymulującego wzrost w celu...

Aby wykryć apoptozę śmierci komórki za pomocą testu TUNEL, należy potraktować wycinek mózgu enzymem proteinazą-K.

Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej uwidocznij uszkodzony nerw, który wykazuje postępujący wzrost obrzęków i rozłączeń aksonów.

Kapsułkowanie leku zwiększa swoistość komórek nowotworowych i zmniejsza neurotoksyczność.

Ten film pokazuje przebieg urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) u myszy. Po odsłonięciu czaszki zaznacza się miejsce TBI. Mysz jest następnie umieszczana pod urządzeniem TBI. Uderzenie odbywa się poprzez podniesienie metalowego pręta i umożliwienie mu swobodnego opadnięcia na impaktor, który styka się z czaszką.

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne neuronów hipokampa szczura hodowanych w mikroprzepływowym chipie do analizy dojrzewania neuronów i połączeń.

Ten film demonstruje generowanie modelu uszkodzenia neuronów w pierwotnych neuronach ziarnistych móżdżku myszy. Przedstawiono w nim etapy związane z indukcją uszkodzenia neuronów za pomocą NMDA, agonisty receptora neuroprzekaźnika pobudzającego i glicyny, koagonisty. NMDA i glicyna wiążą się ze specyficznymi receptorami neuronalnymi, powodując ich nadmierną stymulację i powodując masowy wewnątrzkomórkowy napływ wapnia, co prowadzi do uszkodzenia i śmierci komórek neuronalnych.

Ten film demonstruje barwienie immunofluorescencyjne wycinka mózgu myszy w celu ilościowego określenia rozkładu określonego białka presynaptycznego. Proces ten polega na blokowaniu miejsc niespecyficznych, zastosowaniu pierwszorzędowych przeciwciał dla białka docelowego i markera referencyjnego, a następnie wtórnym znakowaniu przeciwciał i przeciwbarwieniu jądrowym. Marker referencyjny zapewnia dokładną kwantyfikację, zapewniając spójną linię wyjściową, a dystrybucja białka presynaptycznego...

Ten film demonstruje metodę badania uszkodzeń mózgu larw danio pręgowanego za pomocą wielkoskalowej skaningowej transmisyjnej mikroskopii elektronowej (STEM), techniki, która łączy elementy zarówno skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM), jak i transmisyjnej mikroskopii elektronowej (TEM) w celu uzyskania obrazów o wysokiej rozdzielczości. Przedstawiono w nim etapy związane z przygotowaniem próbek i pozyskiwaniem obrazów STEM o wysokiej rozdzielczości w celu identyfikacji uszkodzenia mózgu.

Ten film demonstruje protokół chirurgiczny na modelu szczurzym, szczegółowo opisując kroki od przygotowania znieczulenia do indukcji uszkodzenia nerwu twarzowego. Protokół ten jest przydatny do badania regeneracji nerwów i technik chirurgicznych w badaniach medycznych.

Ten film demonstruje procedurę wywoływania urazowego uszkodzenia mózgu u myszy w otwartej czaszce poprzez wykonanie nacięcia w linii środkowej czaszki, przewiercenie czaszki i usunięcie płata kostnego w celu odsłonięcia kory mózgowej oraz zastosowanie wysokiego ciśnienia w celu wywołania urazu. Rana jest następnie zszywana w celu przygotowania modelu myszy do kolejnych eksperymentów.

Ten film demonstruje procedurę wywoływania śmierci mózgu w modelu mysim poprzez zwiększanie kontrolowanego ciśnienia śródczaszkowego przez cewnik balonowy, naśladując naturalną śmierć mózgu.

Ten film demonstruje procedurę generowania precyzyjnego, kontrolowanego uszkodzenia mózgu w korze ruchowej szczura za pomocą lasera.

Ten film demonstruje biotynylację i fluorescencyjne znakowanie zmodyfikowanych sialoglykoprotein w pierwotnych nerwowych komórkach macierzystych i progenitorowych, a także neuronach, oraz ich wizualizację za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

W tym filmie urządzenie z rurką uderzeniową jest używane do generowania fali uderzeniowej poprzez rozerwanie membrany polimerowej poprzez kontrolowane zwiększanie ciśnienia. Fala uderzeniowa uderza w wycinki mózgu znajdujące się w zabezpieczonej torbie, wywołując urazowe uszkodzenie wycinka mózgu.

Ten film demonstruje procedurę przygotowania hodowanych neuronów do analizy optycznej przetworzonych pęcherzyków synaptycznych. Proces ten obejmuje znakowanie fluorescencyjne białek pęcherzyków synaptycznych i barwienie immunologiczne w celu oznakowania i wizualizacji pęcherzyków pochodzących z recyklingu w neuronach.

Ten film pokazuje proces wywoływania uszkodzeń rozciągających na ludzkich indukowanych pluripotencjalnych neuronach pochodzących z komórek macierzystych (hiPSCN). Komórki są pobierane na bezdennej płytce wielodołkowej z dołączoną membraną silikonową. Kontrolowane naprężenia mechaniczne są wywierane na błonę w celu wywołania rozerwania cytoszkieletu i uszkodzenia błony komórkowej, indukując fenotyp uszkodzenia rozciągającego w komórkach.

Ten film demonstruje procedurę zadawania obrażeń urazu głowy u znieczulonych muchówek Drosophila za pomocą urządzenia uderzeniowego z impaktorem napędzanym gazem. Uraz wpływa na funkcje neuronów i upośledza zdolność chodzenia.

Ten film pokazuje procedurę uszkodzenia kory mózgowej u myszy, obejmującą odsłonięcie czaszki i tworzenie uszkodzeń mózgu. Indukuje astroglejozę reaktywną, neuroprotekcyjną odpowiedź astrocytów, w celu zbadania urazu, stanu zapalnego i mechanizmów naprawczych OUN.

Film demonstruje metodę generowania mysiego modelu urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) za pomocą urządzenia do bocznego płynu perkusyjnego (LFPI). Po znieczuleniu myszy mózg jest odsłaniany, tworząc okno na czaszce. Kaniula wypełniona solą fizjologiczną jest przymocowana do okienka, a następnie jest podłączana do LFPI. Wahadło urządzenia jest zwalniane w celu wytworzenia impulsu ciśnienia, który powoduje urazowe uszkodzenie mózgu.

Ten film demonstruje procedurę wywoływania urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) w modelu mysim. Znieczulona mysz z odsłoniętą czaszką jest pobierana w celu stworzenia otworu w czaszce, a następnie wywoływane jest kontrolowane uszkodzenie kory mózgowej za pomocą urządzenia uderzeniowego. Uraz uszkadza tkankę mózgową, powodując upośledzenie funkcji poznawczych i koordynacji ruchowej.

Ten film przedstawia procedurę chirurgiczną wykonywania hemisekcji rdzenia kręgowego w klatce piersiowej u szczurów. Przedstawiono w nim kroki mające na celu odsłonięcie segmentu rdzenia kręgowego T8, wykonanie hemisekcji w celu przerwania dróg nerwowych po jednej stronie i zapewnienie opieki pooperacyjnej.

Ten film demonstruje metodę wywoływania ukierunkowanego uszkodzenia neuronów u larw Drosophila za pomocą lasera o dużej mocy. Po umieszczeniu larwy pod mikroskopem, laser o małej mocy skanuje w poszukiwaniu neuronów fluorescencyjnych, a następnie zwiększa moc lasera w celu wywołania miejscowego uszkodzenia. Uraz potwierdza zwiększona fluorescencja i krater w miejscu urazu.

Film demonstruje użycie urządzenia High-Impact Trauma (HIT) do wywołania urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową (TBI) u Drosophila. TBI powoduje mechaniczny uraz mózgu wpływający na funkcje neuronów, co z czasem prowadzi do neurodegeneracji i śmiertelności.

Ten film pokazuje indukcję penetrującego urazowego uszkodzenia mózgu w mózgu drosophila. Nowo wylęgłe muchy są selekcjonowane, znieczulane i umieszczane pod mikroskopem stereoskopowym wyposażonym we fluorescencję. Identyfikowany jest korpus grzyba wykazujący ekspresję GFP i wkładana jest szpilka Minutien w celu spowodowania obrażeń. Muchom pozwala się wyzdrowieć w celu dalszych badań.

Źródło: Shandra, O. et al., Wywoływanie padaczki pourazowej w mysim modelu powtarzalnego rozlanego urazowego uszkodzenia mózgu. J. Vis. Exp.

Ten film pokazuje indukcję urazowego uszkodzenia mózgu (TBI) u szczura za pomocą urządzenia do bocznego uszkodzenia płynu udarowego (FPI). Zabieg polega na wykonaniu otworu w czaszce znieczulonego szczura w celu odsłonięcia opony twardej, do której przymocowana jest kaniula. Szczur jest następnie podłączany do urządzenia, które generuje falę ciśnienia, która dociera do mózgu, naśladując TBI, powodując śmierć komórek nerwowych i uszkodzenie naczyń...

Źródło: Yang, Z., et.al. Model powtarzającego się wstrząsu głowy u myszy. J. Vis. Exp. (2016). Ten film demonstruje wywoływanie powtarzających się wstrząsowych urazów głowy u myszy za pomocą elektromagnetycznego urządzenia uderzeniowego. Zabieg polega na umieszczeniu końcówki uderzenia między szwami międzyczołowymi i lambdoidalnymi na czaszce znieczulonej myszy i użyciu końcówki sondy w celu precyzyjnego ustawienia głębokości uderzenia. Uderzenie jest dostarczane z kontrolowaną prędkością i...

Źródło: Logsdon, A. F., i wsp. Model fali uderzeniowej o niskiej intensywności do przedklinicznej oceny łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u gryzoni. (2020)Ten film pokazuje indukcję łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu z zamkniętą głową w modelu mysim przy użyciu rurki do wstrząsu gazowego pod ciśnieniem. Wytworzona fala ciśnienia rozrywa membranę poliestrową, dostarczając falę uderzeniową do głowy myszy, która powoduje szybki ruch mózgu w czaszce, powodując łagodne urazowe uszkodzenie...

Źródło: Macheda, T., et. al. Elektromagnetycznie sterowany model zamkniętej głowy łagodnego urazowego uszkodzenia mózgu u myszy. J. Vis. Exp. (2022)Ten film demonstruje procedurę wywoływania urazu głowy w modelu myszy przy użyciu klatki stereotaktycznej. Kontrolowane uderzenie replikuje łagodne urazowe uszkodzenie mózgu, umożliwiając naukowcom badanie skutków neurologicznych i powrotu do zdrowia poprzez pomiar odruchów i zachowań po urazie.

Źródło: Elzat, E. Y. Y., i wsp., Ustalanie modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego u myszy w oparciu o technikę minimalnie inwazyjną. J. Vis. Exp. (2022). Ten film przedstawia metodę wywoływania kontuzji rdzenia kręgowego na poziomie T9 w modelu mysim przy użyciu platformy współosiowej urazu rdzenia kręgowego. Na rdzeń kręgowy na poziomie T9 upuszczany jest ciężar, który tworzy stłuczenie, które natychmiast powoduje przebarwienie i obrzęk tkanek.

Źródło: Lakshman, N., et al. Test neurosfery do oceny endogennej aktywacji nerwowych komórek macierzystych w mysim modelu minimalnego uszkodzenia rdzenia kręgowego. J. Vis. Exp. (2018). Ten film pokazuje aktywację i migrację nerwowych komórek macierzystych (NSC) w mysim modelu uszkodzenia rdzenia kręgowego. Aby odsłonić rdzeń kręgowy, z znieczulonej myszy usuwa się kręg z klatki piersiowej kręgosłupa. Następnie za pomocą wygiętej igły tworzy się powierzchowny uraz w istocie białej rdzenia...

Źródło: Kumar, S., et. al. Mysi model odleżyn po urazie rdzenia kręgowego. J. Vis. Exp. (2019)Ten film pokazuje szczegółową indukcję uszkodzenia rdzenia kręgowego u myszy. Znieczulona mysz jest preparowana w celu odsłonięcia kręgów T9-T10, a ich wyrostki kolczyste są usuwane. Odsłonięty rdzeń kręgowy jest następnie przecięty w celu zadania urazu. Obszar chirurgiczny jest następnie zamykany, a mysz może dojść do siebie.

Ten film demonstruje metodę oceny internalizacji docelowego białka w astrocytach korowych myszy za pomocą biotynylacji, a następnie lizy komórek, ekstrakcji białka na bazie streptawidyny, denaturacji i analizy Western blot w celu potwierdzenia udanej internalizacji.

Ten film demonstruje metodę oceny aktywności białek za pomocą neuronów hipokampa nad wzorzystymi strefami białkowymi. Neurony wykazują odpychanie w strefach białek testowych i przyłączanie się w strefach białek kontrolnych, podkreślając efekty atrakcyjnej lub odpychającej aktywności białek.

Ten film pokazuje indukcję jaskry u znieczulonego szczura poprzez wstrzyknięcie hipertonicznego roztworu soli fizjologicznej do żyły nadtwardówkowej. Sól fizjologiczna dostaje się do siatki beleczkowej przez kanał Schlemma, powodując bliznowacenie tkanek, które blokuje odpływ cieczy wodnistej i podnosi ciśnienie wewnątrzgałkowe. Podwyższone ciśnienie uszkadza komórki zwojowe siatkówki, prowadząc do jaskry.

Homogenizuj tkankę za pomocą homogenizatora, aby uwolnić białka, w tym dekarboksylazę kwasu glutaminowego lub izoformy enzymu, niezbędne do funkcjonowania mózgu.

Ten film demonstruje procedurę chirurgicznego dostępu do nerwu wzrokowego u znieczulonego zwierzęcia i precyzyjnego dostarczania lizolecytyny w celu wywołania ogniskowej demielinizacji, tworząc warunki neuropatologiczne do dalszych badań.

Inkubować wycinek w płynie CSF zawierającym fluorescencyjne fałszywe neuroprzekaźniki lub FFN.

Ten film pokazuje indukcję napadów wywołanych obsługą u myszy zakażonej wirusem mysiego zapalenia mózgu i rdzenia Theilera (TMEV). Zarażona mysz, która ma nadpobudliwe neurony, jest narażona na zewnętrzne bodźce fizyczne. To narażenie powoduje stres, co prowadzi do nieprawidłowej aktywności elektrycznej neuronów, co skutkuje drgawkami.

Ten film pokazuje procedurę wywoływania napadów wywołanych ciepłem u transgenicznej myszy z mutacjami genów związanymi z padaczką poprzez stopniowe zwiększanie temperatury ciała w kontrolowanej komorze. Protokół ten służy do badania mechanizmów napadów i potencjalnych terapii padaczki.

Ten film pokazuje indukcję zdarzeń ictal w wycinkach kory koronalnej od transgenicznej myszy eksprymującej aktywowane światłem kanały kationowe w korowych pobudzających neuronach piramidowych. Wycinek umieszcza się w komorze nagrywającej, a elektrodę rejestrującą wprowadza się do powierzchownej warstwy korowej. Po perfuzji z lekiem wywołującym drgawki, który blokuje kanały potasowe, neurony stają się nadpobudliwe i generują spontaniczne zdarzenia ictal. Aby wygenerować zdarzenia ictal na...

Ten film pokazuje proces wywoływania padaczki u myszy za pomocą zastrzyków z pentylenotetrazolu (PTZ), antagonisty receptora GABA-A. Wielokrotne dootrzewnowe podawanie PTZ stopniowo obniża próg drgawkowy poprzez hamowanie napływu jonów chlorkowych, zakłócanie hamowania neurotransmisji i prowadzenie do nadpobudliwości neuronów, które wywołują drgawki. Proces ten prowadzi do rozpalenia i rozwoju napadów samoistnych, naśladujących przewlekłą padaczkę.

Źródło: Soukupová, M., et al. Mikrodializa aminokwasów pobudzających podczas zapisów EEG u swobodnie poruszających się szczurów. J. Vis. Exp. (2018)Ten film przedstawia ocenę poziomu zewnątrzkomórkowego neuroprzekaźnika pobudzającego u szczurów z przewlekłą indukcją padaczki. Po wszczepieniu sondy do mikrodializy do mózgu i potwierdzeniu braku napadów za pomocą elektroencefalografii (EEG), pobiera się płyn zewnątrzkomórkowy w celu oceny podwyższonego poziomu neuroprzekaźników u szczurów z...

Źródło: Schönherr, S., et. al. Połączono znakowanie immunologiczne replik optogenetycznych i zamrażalniczo-łamliwych w celu zbadania specyficznego dla danych wejściowych rozmieszczenia receptorów glutaminianu w ciele migdałowatym myszy. J. Vis. Exp. (2016)Ten film demonstruje znakowanie immunologiczne pękniętych przez zamrożenie replik tkanki mózgowej myszy do mikroskopii elektronowej. Pęknięte i pokryte repliki są trawione w celu odsłonięcia receptorów. Przeciwciała pierwszorzędowe i...

Na tym filmie komórki glejaka i mikrogleju są mieszane z roztworem matrycy polimerowej i przenoszone do porowatej wkładki komory, w której tworzy się żel, osadzając komórki. Mikroglej stymuluje migrację komórek glejaka przez porowatą wkładkę, naśladując inwazję komórek nowotworowych na otaczającą tkankę, Komórki są następnie utrwalane i przygotowywane do dalszej analizy.

W tym filmie zademonstrowano metodę umożliwiającą transfer znakowanych fluorescencyjnie mitochondriów do komórek macierzystych glejaka (GSC) poprzez wirowanie. Pomyślny wychwyt i funkcjonalna integracja mitochondriów dawcy są potwierdzane przez wykrycie fluorescencji za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Źródło: Guyon, J., et al. Model sferoidalny 3D glejaka. J. Vis. Exp. (2020)Film demonstruje generowanie trójwymiarowego sferoidalnego modelu inwazji komórek nowotworowych. Sferoidy są tworzone z ludzkich komórek nowotworowych mózgu i osadzone w macierzy kolagenowej. Komórki nowotworowe na obrzeżach sferoidy przyjmują fenotyp inwazyjny, wydzielając proteazy w celu degradacji kolagenu i posuwając się do inwazji na otaczającą macierz.

Źródło: Lim, M., et al. Modelowanie przerzutów do mózgu poprzez wstrzyknięcie komórek nowotworowych do tętnicy szyjnej wewnętrznej. J. Vis. Exp. (2022)W tym filmie znieczulona mysz przechodzi zabieg chirurgiczny, w którym komórki rakowe są wstrzykiwane do wspólnej tętnicy szyjnej (CCA), aby ułatwić celowe dostarczanie do mózgu. Procedura polega na precyzyjnym zszywaniu i manipulowaniu tętnicami szyjnymi w celu skierowania wstrzykniętych komórek w kierunku tętnicy szyjnej wewnętrznej (ICA), co z...

Źródło: Ear, P. H., et. al. Ustalenie i charakterystyka sferoidów guza neuroendokrynnego jelita cienkiego. J. Vis. Exp. (2019)Ten film pokazuje barwienie immunofluorescencyjne sferoidów guza neuroendokrynnego jelita cienkiego. Sferoidy są utrwalane, przepuszczalne i blokowane, a następnie inkubowane z przeciwciałami pierwszorzędowymi i drugorzędowymi. Barwnik jest dodawany do jąder barwnika przed ich zamontowaniem i wizualizacją pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Źródło: Mudduluru, G., et. al. Oparty na impedancji pomiar migracji i inwazji komórek rakowych w czasie rzeczywistym. J. Vis. Exp. (2020)Ten film przedstawia test oparty na impedancji do pomiaru inwazji i migracji komórek glejaka. Komórki degradują macierz zewnątrzkomórkową, przemieszczają się przez mikroporowate błony i przylegają do elektrod, generując impedancję. Ta analiza w czasie rzeczywistym odzwierciedla ich potencjał inwazyjny w zastosowaniach badawczych nad rakiem.

Źródło: Bolcaen, J., et. al., Napromienianie pod kontrolą PET i MRI modelu szczura glejaka przy użyciu mikropromiennika. J. Vis. Exp. (2017)Ten film pokazuje procedurę ustanawiania szczurzego modelu glejaka poprzez stereotaktyczne wstrzykiwanie komórek glejaka powodującego guz mózgu do kory przedczołowej.

Źródło: Mendez, F. M. i inni., Natywna immunoprecypitacja chromatyny przy użyciu mysich neurosfer guza mózgu. J. Vis. Exp. (2018). Ten film pokazuje izolację kompleksów białko-DNA z komórek neurosfery pochodzących z guza mózgu myszy przy użyciu natywnej immunoprecypitacji chromatyny. Szczegółowo opisuje etapy przygotowania chromatyny, immunoprecypitacji, płukania i trawienia białek w celu uwolnienia DNA do dalszej analizy.

Źródło: Núñez, F. J., et al. Ocena biomarkerów w glejaku za pomocą immunohistochemii na zatopionych w parafinie kulturach neurosfery glejaka 3D. J. Vis. Exp. (2019). Ten film przedstawia immunohistochemiczną technikę znakowania biomarkerów nowotworowych w neurosferach guza mózgu zanurzonych w parafinie. Skrawki neurosfery poddawane są usuwaniu parafiny i nawadnianiu, a następnie leczeniu w celu odsłonięcia miejsc biomarkerów. Następnie stosuje się przeciwciała pierwszorzędowe i drugorzędowe w...