Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
1K wyświetleń
⸱
8 lipca 2025
Źródło: Cosset, E., et al. Ludzkie organoidy nerwowe do badania raka mózgu i chorób neurodegeneracyjnych. J. Vis. Exp. (2019 rok)
W tym filmie pokazany jest krok po kroku protokół przekształcania ludzkich embrionalnych komórek macierzystych w organoidy nerwowe. Metoda polega na indukowaniu tworzenia rozety neuronalnej, a następnie kontrolowanej dojrzałości i końcowej hodowli na błonie hydrofobowej w celu uzyskania w pełni rozwiniętych organoidów nerwowych.
1. Utrzymanie i hodowla niezróżnicowanych ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC)
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Płytka 6-dołkowa (płytka 6-dołkowa) | Sokół / Corning | 07-201-588 | |
| Aggrewell 400 (płytki do hodowli mikrostudzienek) | Technologie komórek macierzystych | Numer katalogowy: 34421 | |
| B27 suplementy (B27) | Technologie życiowe / Invitrogen | 1238 | Dla obu protokołów, roztwór podstawowy 100x, roztwór końcowy 1x |
| Neurotroficzny czynnik pochodzenia mózgowego (BDNF) | Wskazówki dotyczące komórek | Zobacz materiał GFH1-2 | Dla obu protokołów, roztwór podstawowy 100 μg/ml w czystym H2O, roztwór końcowy 20 ng/ml |
| Związek E a inhibitor γ-sekretazy (inhibitor γ-sekretazy) | Calbiochem (Elektrownia Jądrowa) | CAS 209986-17-4 | Dla obu protokołów (inhibitor gamma-sekretazy XXI), roztwór podstawowy 5 mM w DMSO, roztwór końcowy 1 μM |
| Czysty dimetylosulfotlenek (DMSO) | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał C6164 | Związki rozpuszczalnikowe, gotowe do użycia |
| Zmodyfikowane podłoże Dulbecco Eagle (DMEM) | Technologie życiowe | Numer katalogowy: 12491-015 | Do hodowli komórkowych, gotowy do użycia |
| Zmodyfikowana mieszanka Eagle Medium F-12 firmy Dulbecco (DMEM-F12) | Gibco (firma Gibco) | 11320033 | Do hodowli komórkowych, gotowy do użycia |
| EDTA 0,1 mM (EDTA) | Technologie życiowe | Zobacz materiał AM9912 | Do hodowli komórkowych, gotowy do użycia |
| Czynnik neurotroficzny pochodzenia glejowego (GDNF) | Wskazówki dotyczące komórek | Zobacz materiał GFH2-2 | Dla obu protokołów, roztwór podstawowy 100 μg/ml w czystym H2O, roztwór końcowy 20 ng/ml |
| Hydrofilowa membrana politetrafluoroetylenowa (membrana PTFE) | Interfejs BioCell | Przerwać | |
| LDN-193189 (inhibitor BMP) | Axon Medchem /Stemgen | 04-0072-02 /1509 | Dual/Smad, roztwór podstawowy 5 mM w DMSO, roztwór końcowy 0,5 μM |
| L-glutamina (L-glutamina) | Gibco (firma Gibco) | 25030081 | L-glutamina (200 mM), roztwór podstawowy 200 mM, roztwór końcowy 2 mM |
| Matrigel (macierz zewnątrzkomórkowa) | BD Nauki biologiczne | 354277 | Matryca z kwalifikacją hESC, roztwór podstawowy 18-22 mg/ml, roztwór końcowy 180-220 μg/ml |
| Millicell-CM Wkładka do płytki hodowlanej (0,4 μm) (Wkładka do płytki hodowlanej) | Milipory | PICM03050 | |
| Przeciwciało monoklonalne anty-β-tubuliny III | Sigma | Zobacz materiał T8660 | Rozcieńczenie 1:1000 |
| Wytrząsarka orbitalna MS, MS-NOR-30 (Wytrząsarka orbitalna) | Kierunek nauki | Przekaźnik MS-NRC-30 | |
| Neuropodstawowy (Neurobazalny) | Technologie życiowe / Gibco | 21103049 | Utrzymanie i dojrzewanie embrionalnych populacji komórek neuronalnych, gotowych do użycia |
| Aminokwasy endogenne (NEAA) | Gibco (firma Gibco) | Numer katalogowy: 11140 | Aminokwasy endogenne 100X, roztwór podstawowy 100x, roztwór końcowy 1x |
| Przeciwciało Nurr1 (M-196) | Santa Cruz | SC-5568 (wersja angielska) | Rozcieńczenie 1:100 |
| Nutristem (pożywka z hESC) | Przemysł biologiczny | 05-100-1A | Pożywka z komórek macierzystych, gotowa do użycia |
| Penicilin / Streptomycyna (Penicilina / Streptomycyna ) | Technologie życiowe / Gibco | 15140122 | Do hodowli komórkowych roztwór podstawowy 5 mg/ml, roztwór końcowy 50 μg/ml |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami bez Ca2+/Mg2+ (PBS bez Ca2+/Mg2+ ) | Technologie życiowe | 14190250 | Do hodowli komórkowych, gotowy do użycia |
| Kinaza Y-27632 związana z rho (ROCK) | Abcam Biochemikalia | AB120129-1 | Inhibitor skał, roztwór podstawowy 50 mM w DMSO, roztwór końcowy 10 μM |
| SB-431542 (TGFβ/Activina/Inhibitor węzłowy) | wzniesienie | Asc- 163 | Dual-Smad, roztwór podstawowy 50 mM w DMSO, roztwór końcowy 10 μM |
| StemPro Accutase (roztwór enzymatyczny hESC) | Gibco (firma Gibco) | A11105-01 | Roztwór enzymatyczny hESC, gotowy do użycia |
| Kolba T150 (kolba T150) | sokół | 08-772-1F | |
| Transformujące czynniki wzrostu beta 3 (TGFβ3) | Wskazówki dotyczące komórek | GFH109-2 | Dla protokołu dopaminergicznego, roztwór podstawowy 100 μg/ml w czystym etanolu, roztwór końcowy 1 ng/ml |
| Trypsyna 0,25% (roztwór enzymatyczny) | Technologie życiowe | 15050065 | roztwór enzymatyczny, gotowy do użycia |
| X-vivo (pożywka wolna od surowicy) | Lonza | BE04-743Q | Serum Free Medium, gotowe dla Ciebie |
