Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Znieczulenie i przygotowanie
- Umieścić zwierzę w komorze anestezjologicznej i wywołać znieczulenie ogólne za pomocą 1,8% izofluranu i 0,9 l/min tlenu.
- Potwierdź odpowiednią płaszczyznę znieczulenia poprzez ocenę spontanicznego oddychania i ocenę świadomości, oceniając reakcję grymasu zwierzęcia na uszczypnięcie palca u nogi.
- Smar do oczu nakładać obustronnie, aby chronić przed podrażnieniem lub wysuszeniem rogówki.
- Ogolić miejsce (miejsca) operacyjne maszynką do golenia lub maszynką do strzyżenia.
- Ustal metodę identyfikacji szczurów w tym czasie, za pomocą kolczyka w uchu lub etykiety/oznakowania na ogonie.
- Należy podać podskórne wstrzyknięcie 0,05 mg/kg buprenorfiny wzdłuż grzbietu zwierzęcia w celu profilaktyki bólu pooperacyjnego.
2. Podejście chirurgiczne i wzorce urazów
- Przenieś zwierzę na stół operacyjny i kontynuuj przepływ gazu przez stożek. Upewnij się, że pod zwierzęciem i sterylnym polem znajduje się podkładka rozgrzewająca, aby utrzymać temperaturę ciała.
- Umieść wysterylizowaną gazę (zwiniętą i przymocowaną taśmą) na szyi szczura, aby użyć jej jako rolki na szyję; zwiększy to ekspozycję pola operacyjnego. Należy pamiętać, że odpowiednie ułożenie zwierzęcia ma kluczowe znaczenie dla skutecznej identyfikacji i rozwarstwienia nerwów.
- Przygotuj skórę twarzy zwierzęcia do zabiegu. Aby zapewnić dezynfekcję, należy trzykrotnie wyszorować miejsce operacyjne chlorheksydyną lub roztworem na bazie jodu na przemian z 70% etanolem.
- W razie potrzeby zaplanuj i zaznacz nacięcie chirurgiczne. Manipuluj uchem ipsilateralnym w kierunku przednim i tylnym, aby określić naturalne fałdowanie skóry zausznej.
- Wykonaj 4-5 mm nacięcie w zagięciu zausznym za pomocą ostrych nożyczek do tęczówki lub ostrza numer 15. W razie potrzeby można to rozszerzyć w dalszej części procedury.
- Tępo przeprowadź sekcję przez bezpośrednią powięź podskórną i umieść mikro-retraktor Weitlanera, aby zwiększyć ekspozycję. Należy pamiętać, że w tym obszarze mogą znajdować się naczynia krwionośne małego kalibru; Najlepiej tego uniknąć, chowając się w górę lub w dół za pomocą zwijacza Weitlanera.
- Zidentyfikuj przedni mięsień dwubrzuścowy, gdy porusza się w kierunku od niższego do wyższego w kierunku jego przyczepu wzdłuż podstawy czaszki.
- Delikatnie rozprowadź mięśniowy brzuch wzdłuż jego punktu przyczepu, aby odsłonić ścięgno przedniego brzucha dwubrzuścowego. Zauważ, że ścięgno wygląda jak biały wyrostek emanujący z mięśnia z solidnym przyczepem do podstawy czaszki.
- Po zidentyfikowaniu mięśnia dwubrzuścowego przedniego i jego ścięgna, wyreguluj retraktor Weitlander, aby jeszcze bardziej cofnąć brzuch mięśniowy. Zauważ, że następnie odsłonięty obszar jest trójwymiarową przestrzenią, w której znajduje się główny pień nerwu twarzowego.
nuta: Obszar ten jest ograniczony górnie i przyśrodkowo przez podstawę czaszki, bocznie przez przedni mięsień dwubrzuścowy, tylno-przyśrodkowo przez kanał słuchowy, a niżej przez struktury szyi, w tym tętnicę skroniową powierzchowną.
- Po odpowiedniej ekspozycji zidentyfikuj główny pień nerwu twarzowego, który przemieszcza się niżej od spodu ścięgna mięśnia dwubrzuścowego, gdzie wychodzi z otworu rylcowo-sutkowego z podstawy czaszki. Zauważ, że nerw wygląda jak perłowo-biały sznur otoczony powięzią przyuszno-żwaczową zwierzęcia. Zachowaj ostrożność podczas dalszego odsłaniania nerwu z następujących powodów.
- Unikaj agresywnego rozwarstwiania lub prostopadłych rozsiewów, aby uchronić się przed uszkodzeniem neuropraksji zależnym od rozciągania.
- Unikaj agresywnego rozwarstwiania skierowanego do tyłu i przyśrodkowo, aby zapobiec naruszeniu cienkich tkanek pokrywających kanał słuchowy, ponieważ może to wprowadzić florę ucha środkowego do pola operacyjnego.
- Unikaj uszkodzenia powierzchownej tętnicy skroniowej poprzez szerokie rozwarstwienie przyśrodkowe i skierowane niżej. Należy pamiętać, że uraz zostanie zidentyfikowany przez energiczne, pulsujące krwawienie.
- Jeśli tętnica jest uszkodzona, natychmiast uciskaj aplikatorem z bawełnianą końcówką lub sterylną gazą za pomocą kleszczy. Środki hemostatyczne lub płynny uszczelniacz fibrynowy można umieścić w pobliżu. Należy pamiętać, że zwierzę może wymagać podskórnego wstrzyknięcia 0,9% sterylnego roztworu soli fizjologicznej w celu stabilizacji płynów.
- Prześledź główny pień dystalnie, preparując wzdłuż nerwu w dolnym kierunku, dystalnie od wyjścia otworu rylcowo-sutkowego.
- Przedłuż pierwotne nacięcie, aby całkowicie odsłonić nerw i jego gałęzie. Unikaj przerywania pracy ślinianki przyusznej, ponieważ może to spowodować pooperacyjne sialocele.
- Wywołaj pożądane wzorce urazów w następujący sposób.
- W przypadku zmiażdżenia użyj kleszczy jubilerskich o gładkiej powierzchni, aby mocno chwycić nerw i ścisnąć go9. Wywieraj stały i powtarzalny nacisk na nerw przez 30 sekund, aby zapewnić odpowiedni uraz zmiażdżenia.
- Aby uzyskać prostą transsekcję, chwyć powięź leżącą nad nerwem lub bezpośrednim epineurium kleszczami o drobnych zębach i użyj ostrych mikronożyczek, aby czysto przeciąć nerw w żądanym miejscu za pomocą jednego cięcia. Uważaj, aby nie dopuścić do nadmiernego naciągnięcia nerwu za pomocą kleszczy.
- W przypadku modelu przerwy nerwowej należy utworzyć pożądaną przerwę nerwową, stosując podobną metodę jak w przypadku prostego uszkodzenia przecięcia. Użyj wysterylizowanego trzonka aplikatora z bawełnianą końcówką, przyciętego śródoperacyjnie do żądanej długości szczeliny nerwowej, aby zapewnić podobieństwo wzoru obrażeń między zwierzętami.
3. Zamykanie ran
- Przepłukać ranę sterylną solą fizjologiczną i osuszyć sterylną gazą.
- Przybliż krawędzie skóry w prosty, podskórny sposób za pomocą wchłanialnych szwów lub użyj kleju do skóry lub klipsów do ran, które są również dopuszczalne do zamykania ran. Umieść zakopany ścieg, biorąc głęboki lub powierzchowny gryzienie jednej krawędzi skóry, a następnie kolejne powierzchowne lub głębokie ugryzienie przeciwległej krawędzi skóry.
