$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Kraniektomia i kontrolowane oddziaływanie na korę mózgową
- Przygotowanie urządzenia do kontrolowanego uderzenia kory mózgowej i materiałów chirurgicznych.
- Załadować strzykawkę o pojemności 1 ml z końcówką ślizgową z 0,5 ml sterylnego soli fizjologicznej do irygacji ran. Podłączyć igłę 25 G do strzykawki, aby kontrolować irygację.
- Przygotować rozcieńczony roztwór cyklosporyny A (CsA) w dimetylosulfotlenku (DMSO) do końcowego stężenia 1 mg/ml. Załadować drugą strzykawkę o pojemności 1 ml z końcówką ślizgową z 0,5 ml roztworu CsA do immunosupresji. Do strzykawki CsA przymocować igłę o długości 25 G lub większą.
- Przymocuj kontrolowany korowy tłok uderzeniowy do ramienia na ramie stereotaktycznej i ustaw go pod kątem 15 °. Przymocować sondę udarową 3 mm do tłoka.
- Ustaw prędkość uderzenia na 1,5 m/s, a czas trwania uderzenia na 0,1 s, aby spowodować łagodne uszkodzenie kory mózgowej.
- Wykonaj jednostronną kraniektomię
- Umieść mysz w komorze indukcyjnej znieczulenia podłączonej do parownika izofluranu ze źródłem sprężonego tlenu. Wywołaj znieczulenie ~3% izofluranem o stężeniu tlenu ~0,7 l/min. Sprawdź głębokość znieczulenia przez brak reakcji na uszczypnięcie palca u nogi.
- Ogol skórę głowy za pomocą elektrycznych maszynek do strzyżenia i zetrzyj luźne futro.
- Umieść mysz w stereotaktycznej ramce z dołączonym stożkiem do znieczulenia.
- Umieść podkładkę rozgrzewającą o temperaturze 37 °C na ramce stereotaktycznej pod myszą, aby utrzymać temperaturę ciała w znieczuleniu. Przymocuj głowę na miejscu za pomocą nauszników i pręta do gryzienia i ustaw głowę tak, aby kość czołowa czaszki była pozioma. Utrzymuj znieczulenie na poziomie ~1,5%-2% izofluranu przez cały czas trwania zabiegu.
- Aby przeprowadzić opiekę przedoperacyjną i aseptyczne przygotowanie chirurgiczne, nałóż antybiotykową maść okulistyczną na oczy za pomocą sterylnego wacika. Nałóż roztwór na bazie jodu na ogoloną skórę głowy. Usuń to za pomocą 70% etanolu. Przykryj zwierzę zasłoną chirurgiczną z fenestracją tak, aby czubek głowy był widoczny, ale oczy były zakryte.
- Wykonaj nacięcie w linii środkowej (1,5-2 cm) na skórze głowy za pomocą skalpela lub nożyczek. Użyj sterylnych bawełnianych wacików, aby oczyścić ranę i oczyścić powięź na lewo od linii środkowej w bregma.
- Użyj sondy impaktorowej, aby zidentyfikować miejsce kraniektomii.
- Ustaw stereotaktyczny punkt odniesienia (X = 0, Y = 0) na bregma. Ustaw sondę na boki do 2 mm na lewo od linii środkowej. Obrysuj okrąg o średnicy 5 mm wokół sondy za pomocą markera chirurgicznie bezpiecznego z cienką końcówką. Podnieś i obróć impaktor z pozycji.
- Użyj narzędzia ręcznego z zestawem mikrosilnika obrotowego o dużej prędkości, aby wykonać otwarty otwór w czaszce za pomocą wiertła do zadziorów o średnicy 0,6 mm lub 0,8 mm z okrągłą końcówką przy maksymalnej prędkości ~70%-80%. Lekko dociśnij czaszkę, wiercąc wzdłuż obrysu 5 mm, aby rozrzedzić tę granicę.
- Nie wywieraj nadmiernego nacisku podczas wiercenia. Wibracje, kompresja lub przypadkowa penetracja mogą spowodować uszkodzenie kory mózgowej. Zamiast tego pozwól, aby prędkość wiertła wykonała pracę.
- Nie wiercić w żadnym miejscu zbyt długo, aby uniknąć nadmiernego nagrzewania się czaszki w wyniku tarcia. Od czasu do czasu należy przepłukać kraniektomię sterylną solą fizjologiczną, aby usunąć zanieczyszczenia i zmniejszyć nagrzewanie się narzędzia obrotowego.
- Zachowaj szczególną ostrożność podczas wiercenia nad linią szwu koronalnego, ponieważ punkty te są podatne na krwotok.
- Użyj cienkiej pęsety, aby usunąć płat czaszki, gdy kontur kraniektomii jest wystarczająco cienki. Chwyć klapkę przyśrodkowo i delikatnie podnieś i pociągnij na boki ruchem promieniowym.
- Nie uszkadzaj opony twardej podczas podnoszenia klapki; może to spowodować poważne obrażenia i krwotok.
- Wykonaj łagodne, kontrolowane uderzenie w korę mózgową
- Wyczyść sondę impaktora sterylnym wacikiem nasączonym alkoholem. Przesuń sondę impaktora z powrotem na miejsce nad odsłoniętą korą. Opuść sondę, aż dotknie powierzchni opony twardej. Oznacz tę pozycję jako Z = 0.
- Wycofaj tłok i przesuń do Z = -1,0 mm. Rozładuj tłok, aby uderzyć w korę.