Wykonywanie uszkodzenia mózgu wywołanego laserem w modelu szczurzym

Streszczenie

Źródło: Kuts, R., et al. Laserowe uszkodzenie mózgu w korze ruchowej szczurów. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film demonstruje procedurę generowania precyzyjnego, kontrolowanego uszkodzenia mózgu w korze ruchowej szczura za pomocą lasera.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Eksperymentalna procedura uszkodzenia mózgu wywołanego laserem

1. Znieczulij szczura mieszaniną 2% izofluranu w tlenie, co pozwoli na spontaniczną wentylację. Sprawdź, czy głębokość znieczulenia jest wystarczająca, ściskając ogon kleszczami, aby zobaczyć, czy nie ma odruchu wycofania.
2. Używając poduszki grzewczej o regulowanej temperaturze doodbytu, utrzymuj temperaturę ciała szczura na poziomie 37 °C przez cały czas trwania procedury doświadczalnej.
3. Usuń miejscowe włosy za pomocą golarki i zdezynfekuj je 70% alkoholem i 0,5% glukonianem chlorheksydyny. Powtórz krok dezynfekcji jeszcze dwa razy.
   UWAGA: Nacięcie chirurgiczne powinno mieć szerokość około 3 cm. Usuń włosy co najmniej 2 cm wokół obszaru nacięcia.
4. Umieść szczura na stereotaktycznym uchwycie na głowę w pozycji leżącej. Wykonaj 3 cm nacięcie, aby odbić bocznie skórę głowy i odsłonić obszar między Bregmą a Lambdą.
5. Utrzymuj znieczulenie przez stożek nosowy.
6. Użyj lasera neodymowo-YAG (Nd-YAG) (szczytowa długość fali 1064 nm), aby podać 50punktów J X 10, z czasem trwania impulsu 1 s, do odsłoniętego obszaru czaszki powyżej prawej półkuli.
7. Upewnij się, że część urządzenia generująca laser znajduje się w odległości 2 mm od odsłoniętego obszaru, aby wytworzyć wiązkę laserową. 50 punktówJ X 10 wybrano po dokładnej ocenie różnych kombinacji energii/powierzchni. Ta kombinacja jest skuteczna i nie powoduje zniszczenia kości czaszki po podaniu krócej niż sekundę.
   UWAGA: 2 mm to odległość między końcem wiązki laserowej (od optycznego, przez który jest przepuszczana) a kością czaszki. W przypadku zastosowania soczewki skupiającej należy obliczyć odległość, biorąc pod uwagę kąt nachylenia soczewki, aby skupić wiązkę w żądanym obszarze uszkodzenia. Zapewnij odpowiednie bezpieczeństwo podczas korzystania z urządzenia laserowego, w tym odpowiednie szkolenie i ochronę oczu.
8. Wyjmij szczura z urządzenia i zamknij skórę głowy jedwabnymi szwami chirurgicznymi 3-0.
9. Przerwij znieczulenie i wróć szczura do klatki w celu wyzdrowienia. Podawać miejscowo 0,1 ml 0,25% bupiwakainy w celu zmniejszenia bólu pooperacyjnego bezpośrednio po zabiegu.
   nuta: Cała procedura powinna trwać krócej niż 5 minut, jeśli zostanie wykonana prawidłowo.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Matryce mózgowe i tkankowe	SIGMA - ALDRICH	Numer katalogowy: 15013
Cyfrowa waga	SIGMA - ALDRICH	Złącze RS 4000
Etanol 96 %	RZYMSKI		Ciecz łatwopalna
Grzałka z termometrem	Poduszka grzewcza-1	Modelu: PODUSZKA GRZEWCZA-1/2
Mankiet infuzyjny	Abn	IC-500 (wersja angielska)
Izofluran, USP 100%	Piramamal Critical Care, Inc (Szpital Piramamal Critical Care), Inc	NDC 66794-017
Ostrza skalpela 11	SIGMA - ALDRICH	Zobacz materiał S2771
Maszyna laserowa Sharplan 3000 Nd:YAG (granat itrowo-aluminiowy domieszkowany neodymem)	Przemysł laserowy Sp. z o.o
Stereotaktyczny uchwyt na głowę	KOPF	900LS

ważenia .