$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Powstanie neuropatii resiniferatoksyny (RTX)
UWAGA: RTX jest neurotoksyczny i niebezpieczny. W kontakcie działa drażniąco na oczy, błony śluzowe i górne drogi oddechowe. Unikaj inhalacji i noś okulary i fartuchy laboratoryjne podczas przygotowywania RTX. Spłukać dużą ilością wody w przypadku kontaktu ze skórą lub po użyciu.
- Dodać 1 mg proszku RTX do mieszaniny 200 μl o równej objętości Tween 80 i absolutnego etanolu (100 μl na każdy rozpuszczalnik).
- Roztwór RTX należy podać na porcję (12 μl/fiolkę) i przechowywać w temperaturze -20 °C przez okres do 3 miesięcy. To jest akcja RTX; odrzuć pozostałe rozwiązanie RTX po wygaśnięciu.
- Rozcieńczyć wywar RTX zwykłą solą fizjologiczną do końcowej objętości 600 μl. Końcowe stężenie roztworu RTX powinno wynosić 0,01%, co odpowiada 1 μg RTX w 10 μl roztworu pojazdu.
- Wykorzystać 8-tygodniowe dorosłe samce myszy ICR (35-40 g) jako zwierzęta doświadczalne i podać myszom pojedynczą dawkę roztworu RTX (dawka: odpowiednio 200, 50 i 10 μg/kg) dootrzewnowo (i.p.) za pomocą strzykawki do mikroiniekcji. Myszy znieczulono inhalatorem z 5% izofluranem w celu głębokiego znieczulenia. Jeśli myszy wykazywały działanie odstawienne kończyn podczas wstrzykiwania RTX, myszy powinny przyjmować dłuższe wdychanie znieczulenia.
Przykład: Jeśli mysz waży 40 g, to otrzyma 20 μl roztworu RTX, co odpowiada dawce 50 μg/kg.
- Jednej grupie myszy należy podać równą objętość nośnika (10% Tween 80 i 10% bezwzględnego etanolu w roztworze soli) jako kontrolę.
- Po wstrzyknięciu RTX umieść myszy z powrotem w plastikowej klatce w 12-godzinnym cyklu światła/12-godzinnym ciemnym cyklu i zapewnij im jedzenie i wodę ad libitum.