Ustalenie mysiego modelu niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków

Streszczenie

Źródło: Kim, M., et al. Oceny neurobehawioralne w mysim modelu niedotlenieniowo-niedokrwiennego uszkodzenia mózgu. J. Vis. Exp. (2017).

Film demonstruje procedurę tworzenia modelu myszy do badania niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków. Przedstawia kroki chirurgicznego wywoływania niedokrwienia i poddawania zwierzęcia hipoksji w celu pogłębienia uszkodzenia mózgu. Na koniec pokazano, w jaki sposób można ocenić powstałe uszkodzenia mózgu, upewniając się, że model mysi jest przygotowany do dalszych badań naukowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Mysi model noworodkowego uszkodzenia mózgu HI

1. Znieczulić szczenięta izofluranem.
   1. Umieść szczenięta (mniej niż 5) w pudełku znieczulającym i zamknij pokrywkę.
   2. Włączyć system znieczulający na około 15 minut; wyregulować gaz i izofluran za pomocą stołowego urządzenia do znieczulenia. Ustaw przepływomierz tlenu na 1.5 l/min. Dostosuj parownik izofluranu do 3-5% w celu indukcji znieczulenia.
   3. Po 15 minutach wyreguluj parownik izofluranu na 1-2% w celu podtrzymania znieczulenia.
2. Połóż w pełni znieczulone szczenię pod mikroskopem preparacyjnym (brzuch skierowany w stronę badacza) i zabezpiecz je taśmą.
3. Wykonaj nacięcie na szyi ~0,7 mm za pomocą wysterylizowanych nożyczek.
4. Ostrożnie usuń tkankę tłuszczową za pomocą wysterylizowanych kleszczy i odsłoń jednostronną prawą tętnicę szyjną.
5. Podwiązać jednostronną prawą tętnicę szyjną za pomocą szwu wchłanialnego 5-0.
6. Zszyj nacięcie na szyi szwem 5-0.
7. Umieść każde szczenię w ciepłej komorze hipoksyjnej o temperaturze 37 °C na 1 godzinę w celu rekonwalescencji. Nie zamykaj pokrywy komory.
8. 1 godzinę po zabiegu, gdy młode są w pełni przytomne, zamknij pokrywę komory hipoksji i zmniejsz poziom gazów, aby ustalić warunki niedotlenienia (8%_O2 i 92% N₂).
9. Po 90 minutach niedotlenienia wróć szczenięta do klatek.
10. Tydzień po urazie mózgu HI powtórz krok 1.
    1. Po znieczuleniu wykonaj nacięcie w skórze głowy wysterylizowanymi nożyczkami i kleszczami, aby zidentyfikować uszkodzenie mózgu w tylno-bocznej części prawej półkuli.
       nuta: Zabieg ten wywołuje niedotlenienie u szczeniąt. Obecność i zakres uszkodzenia mózgu u wszystkich myszy jest oceniany wizualnie gołym okiem przez półprzezroczystą czaszkę. W zależności od wielkości lub objętości przebarwienia (tj. zmiany w mózgu), młode są klasyfikowane w grupy. Jeśli nie ma widocznego uszkodzenia kory mózgowej, mysz jest klasyfikowana do grupy "bez uszkodzenia kory". Jeśli występuje widoczne uszkodzenie kory mózgowej (tj. zmiana w prawej półkuli), mysz jest klasyfikowana do grupy "uszkodzenia kory". Ponieważ klasyfikacja myszy do grup odbywa się tydzień po operacji, grupowanie może być modyfikowane, gdy morfologie próbek mózgu są jasno określone w momencie ofiarowania.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Komora hipoksyjna	Jeung Do Bio & Plant Co	Eksperymentalny budowniczy
System znieczulający Fluovac w aparacie Harvard	Aparatura Harvarda
Pudełko anestezjologiczne			Pudełko akrylowe
Ciecz Fran (izofluoran)	Hana Pharm. Co., Sp. z o.o.		Znieczulenie ogólne ( izofluran 100ml)
Myszy CD-1	Orient Co., Sp. z o.o.
Niebieski Nylon Mono Niewchłanialny szew 5-0 50cm	Ailee Co., Sp. z o.o.	NB 521