Generacja modelu mysiego z infekcją ośrodkowego układu nerwowego

Streszczenie

Źródło: Shen, T., et al. Mysi model ostrej choroby wirusowego zapalenia mózgu wywołanej wirusem dengi. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film pokazuje generowanie modelu myszy z infekcją OUN. Młodemu szczeniakowi ssącemu wstrzykuje się wirusa zarówno wewnątrzczaszkowo, jak i dootrzewnowo. Wirus rozprzestrzenia się, infekując OUN, powodując śmierć komórek neuronalnych i stan zapalny. Szczenię jest oceniane pod kątem objawów infekcji w miarę postępu choroby.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Procedura infekcji

1. Przygotuj nieprzystosowane zapasy DENV2 (szczep PL046)9 (pierwotnie uzyskane z Centrów Kontroli Chorób na Tajwanie, w zakresie od 2,5 x 10⁷ do 1 x 10⁹ PFU/ml).
2. Rozcieńczyć zapas wirusa do 1 x 10⁶ PFU za pomocą pożywki Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 do całkowitej objętości 40 μl.
3. Napełnić jedną strzykawkę o pojemności 0,3 ml wyposażoną w igłę 30 G 10 μl (2,5 x 10⁵ PFU) rozcieńczonego wirusa, a następnie napełnić kolejną strzykawkę o pojemności 0,3 ml wyposażoną w igłę 30 G 30 μl (7,5 x 10⁵ PFU) rozcieńczonego wirusa.
4. Przytrzymaj 7-dniową mysz ssącą ICR (Institute of Cancer Research) i wykonaj następujące czynności.
   1. W przypadku wstrzyknięcia domózgowego należy przytrzymać mysz w pozycji leżącej, naciskając małżowinę uszną między palcem wskazującym a kciukiem, a następnie wstrzyknąć domózgowo 10 μl rozcieńczonego wirusa w obszar lambda, punkt na przecięciu szwu strzałkowego i lambdoidalnego.
   2. Po wstrzyknięciu domózgowym należy przytrzymać mysz w pozycji leżącej na plecach za pomocą palca wskazującego i kciuka, a następnie delikatnie wstrzyknąć dootrzewnowo 30 μl rozcieńczonego wirusa do mysiego brzucha.
      nuta: Aby uniknąć kanibalizmu, 75% alkoholu stosuje się w celu tymczasowej utraty czucia węchowego matki. Dodatkowo sugeruje się przykrycie ściółki stolcem matki i moczem.
5. Połóż ssące myszy z powrotem w klatkach i odczekaj 5 minut, aby sprawdzić ich bezpieczeństwo po stymulacji z zachłannością myszy, w tym chodzeniem i ssaniem mleka matki.
   nuta: Najczęściej myszy wykazują normalną aktywność po stymulacji i wydaje się, że po wyzwaniu technicznym nie ma żadnych szkodliwych skutków.
6. Oceń dzienny postęp myszy pod względem masy ciała (przy użyciu wagi mikrogramowej), ostrej choroby podobnej do wirusowego zapalenia mózgu (według oceny choroby opisanej w sekcji 2) i wskaźnika przeżycia.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Roswell Park Memorial Institute 1640 średni (RPMI)	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy 11875-085	Rozcieńczanie wirusa
0,3 ml strzykawki z insuliną	BD Ultra-FineII	328838	Iniekcja domózgowa i dootrzewnowa
Mikrowaga	Oprogramowanie LabX firmy METTLER TOLEDO	AL104	Waga myszy
Nieprzystosowany DENV2 (szczep PL046)	Tajwańskie Centra Kontroli Chorób	-	Zainfekuj mysz
Instytut Badań nad Rakiem (ICR) mysz ssąca	BioLASCO Tajwan Co., Ltd	-	Nasz mysi model

powiedział: