Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

Abstract

Źródło: Schmitz, K., et al. Bioluminescencja i obrazowanie w bliskiej podczerwieni zapalenia nerwu wzrokowego i mózgu w modelu EAE stwardnienia rozsianego u myszy. J. Vis. Exp (2017).

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę sygnalizacyjną, która ostatecznie prowadzi do uszkodzenia mieliny, naśladując stan demielinizacyjny stwardnienia rozsianego.

Protocol

1. Indukcja EAE u myszy SJL/J

1. Myszy
   1. Użyj 11-tygodniowych samic myszy SJL/J i pozwól im przyzwyczaić się do pomieszczenia eksperymentalnego przez około 7 dni. Użyj n = 10 myszy na grupę.
   2. Aby ocenić działanie leku, należy w sposób ciągły podawać lek i placebo grupie kontrolnej za pośrednictwem wody pitnej lub granulek żywności, zaczynając 3 lub 5 dni po szczepieniu (n = 10 na grupę). W szczytowym okresie choroby podawaj leki lub placebo z mlekiem lub płatkami kukurydzianymi nasączonymi wodą z 3% cukrem.
2. Materiał uodparniający
   1. Użyć zestawu indukcyjnego EAE składającego się z antygenu (peptyd białka proteolipidowego, PLP139-151, emulsja 1 mg/ml) w emulsji z kompletnym adiuwantem Freunda (CFA, zabijane termicznie Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) i 2 fiolkami (po 5 μg każda) liofilizowanej toksyny krztuśca (PTX).
   2. Rozpuścić PTX (2 μg/ml) w 1x soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS, tj. dodać 1,5 ml PBS do każdej probówki PTX, dobrze wymieszać, usunąć tą samą końcówką pipety i dodać do 1 ml PBS w probówce o pojemności 50 ml); dobrze wymieszać.
3. immunizacja
   1. Wstrzyknąć PLP/CFA podskórnie w 2 porcjach, każda po 100 μl, obie u podstawy ogona.
   2. Wstrzyknąć 100 μl PTX dootrzewnowo (i.p.) dwa razy na mysz, pierwsze 1-2 godziny po szczepieniu, a drugie po 24 godzinach.
   3. W przypadku myszy kontrolnych wstrzyknąć CFA bez PLP (2 porcje po 100 μl) oraz PTX bez PLP.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PLP139-151/CFA emulsja	Hooke Labs, St Lawrence, Massachusetts	EK-0123	Zestaw indukcyjny EAE
Toksyna krztuścowa	Hooke Labs, St Lawrence, Massachusetts	EK-0123	Zestaw indukcyjny EAE
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone		System obrazowania bioluminescencji i podczerwieni
Oprogramowanie LivingImage 4.5	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Stany Zjednoczone	CLS136334	Oprogramowanie analityczne IVIS
Izofluran	Abbott Labs, Illinois, Stany Zjednoczone	26675-46-7	narkoza