Barwienie immunohistochemiczne białka S-100 w biopsji odbytniczej

Streszczenie

Źródło: Chi, S., Fang, et al. Rozpoznanie choroby Hirschsprunga na podstawie biopsji odbytniczej z barwieniem immunologicznym w kierunku kalretyniny, białka S100 i produktu genu białka 9.5. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film przedstawia barwienie immunohistochemiczne białka S-100 w sekcjach biopsji ssącej odbytnicy. Skrawki pobrane z antygenu są blokowane i leczone pierwotnymi, a następnie drugorzędowymi przeciwciałami przeciwko S-100, markerowi choroby Hirschsprunga. Do docelowego komórki dodaje się substrat chromogenny. Próbki są odwadniane i montowane przed wizualizacją pod mikroskopem.

Protokół

1. Przygotowanie biopsji ssania doodbytniczego (RSB) Sekcje

1. Umieść biopsje ssące doodbytnicze w 4% paraformaldehydzie na 6 godzin, aby utrwalić tkankę. Użyj objętości utrwalacza 5 razy większej niż objętość tkanki.
2. Odwodnić tkankę za pomocą patologicznego odwadniacza tkanek przez 11 godzin. Cały zaprogramowany proces składa się z następujących 5 kroków:
   1. Umieść chusteczkę w formaldehydzie i utrwalaj ją przez 1 godzinę.
   2. Umieść chusteczkę w 75% etanolu na 4 godziny.
   3. Umieść tkankę w absolutnym etanolu (dwie przemiany po 1 h każda).
   4. Umieść tkankę w absolutnym etanolu (dwi....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Przeciwciało kalretyniny	MXB Biotechnologies	MAB-0716 170416405c	Przeciwciało: Przeciwciało pierwotne
Przeciwciało S-100	MXB Biotechnologies	Zestaw-0007	Przeciwciało: Przeciwciało pierwotne
Przeciwciało PGP9.5	Shanghai long island antibody Co. Ltd	R-0457-03	Przeciwciało: Przeciwciało pierwotne
Odczynnik wzmacniający	MXB Biotechnologies	KIT-9902-A 170416405a	przeciwciało: przeciwciało drugorzędowe A
Kozie przeciwciało anty-królicze/mysie IgG	MXB Biotechnologies	KIT-9902-B	przeciwciało: przeciwciało drugorzędowe B
Zestaw do barwienia DAB (zawierający odczynnik A, B i C)	MXB Biotechnologies	DAB-0031	zestaw do barwienia
Inkubator ciepła	Shanghai yiheng instrument Co. Ltd	DHP-9082	instrument
System do biopsji odbytnicy ssącej Rbi2	Aus Systems Pty Ltd, Australia Południowa, Australia	CP1200 HP1000 SS1000	instrument
Mikrotom	Leica	leica RM2016	instrument
Bufor cytrynianu sodu kwasu cytrynowego(100X)	MXB Biotechnologies	MVS-0101	bufor do odzyskiwania antygenu
Patologiczny odwadniacz tkanek	Wuhan junjie electronic Co. Ltd	JT-12F	instrument