Generowanie spontanicznych i na żądanie zdarzeń ictal w wycinkach kory mózgowej myszy

Streszczenie

Źródło: Chang, M. i wsp. Generowanie i inicjacja na żądanie ostrej aktywności ictal w tkankach gryzoni i ludzkich. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film pokazuje indukcję zdarzeń ictal w wycinkach kory koronalnej od transgenicznej myszy eksprymującej aktywowane światłem kanały kationowe w korowych pobudzających neuronach piramidowych. Wycinek umieszcza się w komorze nagrywającej, a elektrodę rejestrującą wprowadza się do powierzchownej warstwy korowej. Po perfuzji z lekiem wywołującym drgawki, który blokuje kanały potasowe, neurony stają się nadpobudliwe i generują spontaniczne zdarzenia ictal. Aby wygenerować zdarzenia ictal na żądanie, krótki impuls świetlny jest używany do aktywacji kanałów kationowych w neuronach piramidowych, wyzwalając uwalnianie neuroprzekaźników pobudzających, które indukują neurony postsynaptyczne do generowania zdarzeń ictal przez krótki czas.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Przygotowanie roztworów rozwarstwiających i sztucznego płynu mózgowo-rdzeniowego

1. Karbogeniczna woda ultraczysta (czyli woda filtrowana o rezystywności 18,2 MΩ·cm) z karbogenem (95% O₂/5% CO₂) przez 5 min za pomocą dyfuzorów pęcherzykowych z kamienia powietrznego (aeratory do akwariów).
   Uwaga: Kamienie napowietrzające można podłączyć do regulatora zbiornika karbogenicznego za pomocą standardowe rurki silikono....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Pentobarbital sodu	Nie dotyczy	n/a	Zakupione za pośrednictwem dostawców Toronto Western Hospital
1 mm strzykawka	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
25G 5/8" sterylna igła	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Żyletka jednoostrzowa (2x)	Nie dotyczy	n/a	Zakupione w sklepie UT Med
Klej błyskawiczny	n/a	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Papier do soczewek	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Szklana szalka Petriego (2x)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Kleszcze do odłamków (2x)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Mikroszpatułka z uchwytem PVC	Nie dotyczy	n/a	Zakupione w sklepie UT Med
Mikro łyżeczka z płaską końcówką	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Pędzel do detali 5/0	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Kupione w butikowym sklepie ze sztuką
Pipeta transferowa o szerokim otworze	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Pęseta dentystyczna	Nie dotyczy	n/a	Zakupione w sklepie UT Med
Termometr (cyfrowy)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupiony dnia Amazon.ca
Sprawdź zbiornik karbogeniczny (95%O2/5%CO2)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione za pośrednictwem dostawców Toronto Western Hospital
Wibratom	Leica	Nie dotyczy	Zakupione za pośrednictwem dostawców Toronto Western Hospital
Komora inkubacyjna do wycinków mózgu (znana również jako opiekunka plasterków mózgu)	Projektowanie systemów naukowych Inc	Nie dotyczy
Chlorek sodu (NaCl)	Nie dotyczy	n/a	Zakupione w sklepie UT Med
Wodorowęglan sodu	n/a	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Dekstroza	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Chlorek potasu (KCl)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Siarczan magnezu (MgSO4. H2O)	Nie dotyczy	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Sodu fosforan jednozasadowy jednowodny (HNaPO4·H2O)	n/a	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Chlorek wapnia (CaCl2·2H2O)	n/a	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med
Sacharoza	n/a	Nie dotyczy	Zakupione w sklepie UT Med