Wywoływanie ukierunkowanego uszkodzenia neuronów za pomocą lasera o dużej mocy u larwy Drosophila

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Li, D., Li, F., et al. Model uszkodzenia Drosophila in vivo do badania neuroregeneracji w obwodowym i ośrodkowym układzie nerwowym. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film demonstruje metodę wywoływania ukierunkowanego uszkodzenia neuronów u larw Drosophila za pomocą lasera o dużej mocy. Po umieszczeniu larwy pod mikroskopem, laser o małej mocy skanuje w poszukiwaniu neuronów fluorescencyjnych, a następnie zwiększa moc lasera w celu wywołania miejscowego uszkodzenia. Uraz potwierdza zwiększona fluorescencja i krater w miejscu urazu.

Protokół

1. Uszkodzenie dwufotonowe i obrazowanie konfokalne

Konfiguracja mikroskopu
UWAGA: Do tego eksperymentu użyto konfokalnego laserowego mikroskopu skaningowego z laserem dwufotonowym, ale inne systemy o równoważnej konfiguracji również wystarczą. Laser dwufotonowy (930 nm) został użyty do zadawania obrażeń, a laser argonowy (488 nm) został użyty do konfokalnego obrazowania GFP.
1. Na początku każdej sesji włącz laser dwufotonowy i/lub laser konfokalny (lasery) konfokalny i mikroskop. Następnie otwórz oprogramowanie do obrazowania.
2. W przypadku uszkodzeń dwufotonowych należy ustawić następujące param....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1: Da regeneracja aksonów neuronów na peryferiach wykazuje specyficzność klasową. (A i B) Schematyczny rysunek przedstawiający położenie larw. (C) Schematyczny rysunek neuronów klasy III da. (D) Aksony neuronów klasy III da ddaF, znakowane 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+, nie odrastają. (E) Schematyczny rysunek neuronów klasy IV da. (F) Aksony neuronów v'ada klasy IV da, znakowane p.......