$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
W odpowiedzi na infekcję wirusową, gospodarz rozwija różne reakcje obronne, takie jak aktywacja wrodzonych szlaków sygnalizacji immunologicznej, które prowadzą do produkcji cytokin przeciwwirusowych1,2. Aby skolonizować gospodarza, wirusy są zobowiązane do unikania odpowiedzi przeciwwirusowych gospodarza i manipulowania szlakami sygnałowymi. Odkrycie interakcji między gospodarzem a wirusem rzuci światło na rozwój nowych strategii terapeutycznych przeciwko infekcjom wirusowym.
Mysi γHV68 jest blisko spokrewniony z ludzkim onkogennym wirusem opryszczki Kaposiego związanym z mięsakiem Kaposiego i wirusem Epsten-Barr3,4. Zakażenie γHV68 u myszy laboratoryjnych dostarcza łatwego do opanowania modelu małego zwierzęcia do zbadania całego przebiegu reakcji gospodarza i infekcji wirusowej in vivo, które nie są dostępne dla ludzkich herpeswirusów. W niniejszym protokole przedstawiamy panel metod charakterystyki fenotypowej i molekularnej preparacji składników sygnalizacji gospodarza w replikacji litycznej γHV68 zarówno in vivo, jak i ex vivo. Dostępność genetycznie zmodyfikowanych szczepów myszy pozwala na zbadanie ról szlaków sygnałowych gospodarza podczas ostrej infekcji γHV68 in vivo. Dodatkowo, mysie fibroblasty embrionalne (MEF) wyizolowane z tych wadliwych szczepów myszy mogą być wykorzystane do dalszej analizy ról tych cząsteczek podczas replikacji litycznej γHV68 ex vivo.
Korzystając z testów wirusologicznych i biologii molekularnej, możemy określić molekularny mechanizm interakcji gospodarz-wirus i zidentyfikować geny gospodarza i wirusa niezbędne do replikacji litycznej wirusa. Wreszcie, bakteryjny system sztucznych chromosomów (BAC) ułatwia wprowadzanie mutacji do czynnika wirusowego, który specyficznie przerywa interakcję gospodarz-wirus. Rekombinowany γHV68 przenoszący te mutacje może być wykorzystany do podsumowania fenotypów replikacji litycznej γHV68 w MEF z niedoborem kluczowych składników sygnalizacji gospodarza. Protokół ten stanowi doskonałą strategię badania interakcji gospodarz-patogen na wielu poziomach interwencji in vivo i ex vivo.
Ostatnio odkryliśmy, że γHV68 uzurpuje sobie prawo do korzystania z wrodzonego szlaku sygnalizacji immunologicznej, aby promować replikację lityczną wirusa5. W szczególności zakażenie γHV68 de novo aktywuje kinazę immunologiczną IKKβ, a aktywowany IKKβ fosforyluje główny wirusowy czynnik transkrypcyjny, replikację i transaktywator (RTA), aby promować aktywację transkrypcji wirusa. W ten sposób γHV68 skutecznie łączy swoją aktywację transkrypcyjną z wrodzoną aktywacją immunologiczną gospodarza, ułatwiając w ten sposób transkrypcję wirusa i replikację lityczną. Badanie to stanowi doskonały przykład, który można zastosować do innych wirusów w celu zbadania interakcji gospodarz-wirus.