Ocena skurczu mięśni za pomocą leczenia blokerem nerwowo-mięśniowym

Streszczenie

Źródło: Lin, C. U., i wsp., Połączenie nerwowo-mięśniowe in vitro indukowane z ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film pokazuje ocenę mięśnia za pomocą hodowanych neuronów ruchowych, komórek Schwanna i miotubek, a następnie leczenia blokerem nerwowo-mięśniowym w celu zahamowania skurczu. Grafika w ruchu w czasie oznaczona kolorami przedstawia grafikę w ruchu w czasie oznaczoną kolorem. Czerwony oznacza najszybszy ruch, a niebieski oznacza najwolniejszy.

Protokół

1. Leczenie skurczów mięśni i kurary

1. Aby wywołać skurcz miotuby, dodaj 25 mM chlorku wapnia (CaCl₂) do pożywki hodowlanej. Ruch miotubek można zaobserwować w ciągu 1\u20122 min.
2. Umieść 6-dołkową płytkę na stoliku odwróconego mikroskopu. Nagraj film ze skurczem miotubówki za pomocą mikroskopii żywych komórek.
3. Aby zatrzymać skurcz rurki mięśniowej, dodaj kurarę do pożywki hodowlanej (300 ng/ml). Następnie nagraj film zgodnie z krokiem 1.2.
4. Otwórz plik filmowy za pomocą oprogramowania do analizy wektorów ruchu, a następnie kliknij przycisk Analiza ruchu, aby przeanalizować film.
   UWAGA: Skurcz myotubes jest pokazany jako grafika ruchu w czasie. Filmy są oznaczone kolorami, aby pokazać prędkość ruchu myotubes. Kolorowe błyszczące sygnały wskazują ruchy miotubes, gdzie kolor czerwony pokazuje najszybszą prędkość ruchu, a kolor niebieski pokazuje najwolniejszą prędkość ruchu.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Pożywka, czynniki wzrostu i odczynniki	Pozycja	Marka	Kot. Liczba
	B27, Gibco	Gibco	12587-001
	BDNF	Systemy badawczo-rozwojowe	248-BD
	ECM, Matrigel (obniżony czynnik wzrostu)	Corning	356230
	GDNF	Systemy badawczo-rozwojowe	212-GD
	Powlekarka jonowa	JEOL	JEC3000FC
	Mikroskopia żywych komórek	Nikon	Mikroskop Eclipse Ti
	Oprogramowanie do analizy wektorów ruchu	Sony	SI8000
	N2, Gibco	Gibco	17502-048
	Podłoże neuropodstawne	Gibco	21103-049
	NT3	Systemy badawczo-rozwojowe	267-N3