Generowanie modelu hodowli narządów w celu symulacji wczesnego stadium choroby krążka międzykręgowego

Streszczenie

Źródło: Saravi, B. i inni., Prozapalny, zwyrodnieniowy model hodowli narządów do symulacji wczesnego stadium choroby krążka międzykręgowego. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film pokazuje rozwój prozapalnego i zwyrodnieniowego modelu hodowli narządów we wczesnym stadium choroby krążka międzykręgowego (IVD) przy użyciu TNF-α. Przedstawiono w nim procedurę wstrzykiwania TNF-α do krążka międzykręgowego i wyjaśniono mechanizmy, za pomocą których TNF-α indukuje stan zapalny i degradację IVD.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Posiew i obciążenie krążka międzykręgowego (IVD)

1. Przenieść krążki międzykręgowe (IVD) do komór IVD i dodać pożywkę hodowlaną IVD (Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, 4,5 g/L DMEM o wysokiej zawartości glukozy dla grupy fizjologicznej i 2 g/L DMEM o niskiej zawartości glukozy dla grupy patologicznej) + 1% penicyliny/streptomycyny + 2% płodowej surowicy cielęcej + 1% ITS (zawiera 5 μg/ml insuliny, 6 μg/ml transferyny i 5 ng/ml kwasu selenowego) + 50 μg/ml 2-fos....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
2-fosforan askorbinianu	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stany Zjednoczone	A8960
TNF-alfa, rekombinowane białko ludzkie	Systemy badawczo-rozwojowe, Minnesota, USA	210-TA-005
Bydło IL-8 Zrób to sam ELISA	Kingfisher Biotech, St. Paul, Stany Zjednoczone	DIY1028B-003
Corning ITS Premix	Corning Inc., Nowy Jork, Stany Zjednoczone	354350
DMEM o wysokiej zawartości glukozy	Gibco by life technologies, Karlowe Wary, USA	10741574
DMEM o niskim poziomie glukozy	Gibco by life technologies, Karlowe Wary, USA	11564446
Etanol w biologii molekularnej	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stany Zjednoczone	09-0851
Surowica płodowa bydlęca (FBS)	Gibco by life technologies, Karlowe Wary, USA	A4766801
Nieistotny roztwór aminokwasów	Gibco by life technologies, Karlowe Wary, USA	11140050
Penicylina/Streptomycyna(P/S)	gibco by life technologies, Carlsbad, USA	11548876
Bufor fosforanowy, tabletka	Sigma-Aldrich, St. Louis, Stany Zjednoczone	P4417
Primocin	InvivoGen, Sandiego, Stany Zjednoczone	ant-pm-05