Artykuł metodologiczny

Ocena stanu palmitoylacji białek błony komórkowej z tkanki mózgowej myszy

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Speca, D. J., et al. Test przesunięcia żelu acylo-pegylowego do ilościowego oznaczania palmitoylacji białek błony mózgowej. J. Vis. Exp. (2020).

Film przedstawia analizę stanu palmitoilacji białek błony komórkowej wyizolowanych z tkanki mózgowej myszy. Proces ten polega na wystawieniu niepalmitoilowanych cystein i zablokowaniu ich, a następnie użyciu polimeru, który wiąże się z cysteinami palmitoilowanymi, pomagając w ocenie stanu palmitoilacji wyizolowanych białek.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały sprawdzone i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Przygotowanie błon mózgowych myszy

  1. Odetnij głowę myszy za pomocą aparatu gilotynowego i szybko wypreparuj mózg (w <1 minutę, jeśli to możliwe, aby zminimalizować zmiany palmitoilacji, które mogą wystąpić podczas procedury sekcji). Natychmiast homogenizować w 10 ml buforu homogenizacyjnego (Tabela 1) w szklanym homogenizatorze (~12 suwów) na lodzie.
  2. Wirować lizaty przez 15 minut w temperaturze 1 400 x g w temperaturze 4 °C. Przenieść sup....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tabela 1: Roztwory używane do testu APEGS. Bufor homogenizacyjny i bufor A można przygotować z wyprzedzeniem; jednak bezpośrednio przed użyciem należy dodać inhibitory proteazy i fluorek fenylometylosulfonylu (PMSF). Wszystkie inne roztwory należy przygotować na świeżo.

BuforKomponentyDziałająca konc.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Hydroksyloamina (szynka) ThermoFisher 26103
Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)NOFME-050MAMW ~5000 kDa
MikrofugeEppendorf5415Rlub równoważny sprzęt
N-etylomalemid (NEM)Calbiochem34115Wysoce toksyczny
Kamera optyczna do densytometriiAzure BiosystemsSzafirowy obrazownik biomolekularnylub równoważny sprzęt
Rurki polipropylenowe z nakrętkąFisher Naukowy14-956-1D
Pipety serologiczne (szklane)Fisher Scientific13-678-27D
Wirówka stołowaBeckmanAllegra X-15Rlub równoważny sprzęt
Chlorowodorek tris(2-karboksyetylo)fosfiny (TCEP)EMD Millipore580560

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wytr canie chloroform metanolowemodyfikacja cysteinytest wi zania polimeruizolacja bia ekrozszczepienie tioestrumodyfikacja potranslacyjnaanaliza biochemiczna

Powiązane artykuły